余丰，张澎怡，陈文芳

（佛山市妇幼保健院，广东 佛山 528000）

地中海贫血是常染色体隐性遗传病的一种，发病率高。地中海贫血的早期确诊是地中海贫血发病预防的主要方式，特别是新生儿地中海贫血筛查工作的开展，可有效避免后期盲目用药影响儿童正常生长发育[1]。以往新生儿地中海贫血的主要诊断方法为红细胞指数或管定量法红细胞脆性试验，但两种方法的诊断效果均不理想。脐蛋白电泳检测具有操作简单，检查费用较低，结果准确性高等优势，在临床新生儿地中海贫血诊断中得到了广泛应用[2-3]。因此，我院应用脐血蛋白电泳法对新生儿地中海贫血进行筛查，现将研究报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 于2016年1月-2017年12月选取我院活产新生儿脐血标本20000例作为筛查对象，其中男婴10542例，女婴9458例，均为足月产儿，无其他血液疾病。

1.2 方法

1.2.1 电泳检测 仪器选取全自动电泳仪，脐血标本选择胎儿出生切断脐带时，从胎盘端脐带血，采用一次性真空采血管采集新生儿脐带血2 mL，采用ACD抗凝处理后，低温保存送检。应用全自动毛细血管电泳仪与配合试剂盒开展质控品检测，待送标本合格后，开展血红蛋白电泳检测。电泳方法：将离心仪机离心速度设为3000 r/min，离心时间设为5 min，离心后将血浆弃除不用。经生理盐水洗涤红细胞，采用四氯化碳溶血法制备Hb液，溶液加入蒸馏水稀释至20g/L浓度，开展电泳的血红蛋白液。取血红蛋白液15-20 mL，应用全自动电泳仪进行电泳检测，完成检测后观察标本曲线图进行分析。

1.2.2 基因检测 将脐血蛋白电泳检测结果为阳性样本开展基因检测，缺失型α-地中海贫血的三种常见缺失型应用gap-PCR法检测，包括-SEA、-α3.7、-α-4.2；应用PCR与反向斑点杂交法对非缺失型α-地中海贫血、β-地中海贫血标本样本进行检测，主要对三种常见突变进行检查，包括αCS、αWS、αQS，β序列包括正常序列与17个突变序列。

1.2.3 异常血红蛋白检测 将其他正常血红蛋白样本排除，留下Hb E，检索GenBank中的α与β珠蛋白序列，应用Premier5软件设置相应引物，扩增PCR应用琼脂糖电泳检测。标本应用DNA序列检测，查找突变点。

1.3 观察指标 新生儿脐带血脐带血参考标准值：Hb无异常区带：Hb A约占30%，Hb F约占70%，Hb A2约占0.1%-1%。诊断标准：α-地中海贫血：存在Hb CS区带与异常Hb Bart′s区带；β-地中海贫血：Hb A＜10%，Hb F＞90%，父母双方存在1名以上的地中海贫血基因携带者。存在异常Hb区带即可判断存在异常血红蛋白。

2 结果

2.1 血红蛋白电泳检测 20000例新生儿脐带血标本开展脐血蛋白电泳检测结果提示，异常标本共2693例，占比13.48%，其中疑似α-地中海贫血者1678例，占比8.39%，疑似β-地中海贫血者903例，占比4.52%，疑似异常血红蛋白者117例，占比0.59%。

2.2 与基因检测结果相比 脐血蛋白电泳检测结果中呈阳性标本再行基因检测结果显示，α-地中海贫血者1594例，与电泳检查结果比较，相符率为94.99%；β-地中海贫血者822例，与电泳检查结果比较，相符率为91.03%。确诊血红蛋白异常者106例，其中Hb E者35例，Hb Q者19例，Hb D者15例，Hb J者10例，Hb G者13例，Hb New York者14例。

2.3 筛查结果 确诊α-地中海贫血1594例，占总新生儿样本比例的7.97%，确诊为β-地中海贫血者822，占总新生儿样本比例的4.11%，异常血红蛋白106例，占总新生儿样本比例0.53%。

3 讨论

血红蛋白疾病包括异常血红蛋白与地中海贫血，其中地中海贫血是一种危害性较大的遗传性疾病，已被WHO列为危害人类健康的6大常见疾病，包括α-地中海贫血与β-地中海贫血两类。脐血血红蛋白具有特殊性，新生儿脐血正常情况下无异常Hb区带，存在Hb Bart′s特有序列，出生3-12个月后会逐渐消失，可作为新生儿地中海筛查的重要指标。α-地中海贫血是一种遗传性溶血病，是由于α-珠蛋白基因缺失或非缺失性突变，导致α-珠蛋白肽链缺失，或者合成减少所致。胚胎时期已经出现α-珠蛋白，直接参与血红蛋白组成。血红蛋白是由于珠蛋白链分子所组成，珠蛋白一级结构发生改变，使珠蛋白分子结构出现变化，导致珠蛋白链分子结构所组成的血红蛋白发生异常。血红蛋白异常后生理化性质均会随之改变，出现分子迁移率变化，导致电泳检查时处于非正常位置，进而利用脐血蛋白电泳检查可对血红蛋白异常进行判断。

综上，新生儿地中海贫血筛查中应用脐血蛋白电泳法，筛查准确性较高，可在临床广泛推广。