郝晶晶，张府君，药雅俊，甄会贤

(山西药科职业学院，山西 太原 030031)

粉葛为豆科植物甘葛藤PuerariathomsoniiBenth.的干燥根。在秋、冬季采挖后，去除外皮，稍干，截断或再切成厚片，干燥，即得[1]。粉葛，性凉，味甘、辛，具有解肌退热，发表透疹，生津止渴，升阳止泻等功效[2]，主要用于治疗外感发热，项背强痛，麻疹初起，疹出不畅等病证[3]。其有效成分主要为黄酮类化合物，包括大豆苷、葛根素等[4]。中药配方颗粒，又称为免煎颗粒，作为传统中药饮片的补充，是对传统汤剂的改革。它是在中医药理论指导下，利用现代科技手段，以单味中药饮片为原料，经过提取、浓缩、制粒等制成的供临床调剂使用的粉状或颗粒状产品。中药配方颗粒具有剂量准确、卫生、免煎易服和贮存携带方便等特点，克服了传统中药饮片煎煮过程繁琐、携带服用不方便等不足[5-6]。本实验采用TLC对粉葛配方颗粒进行鉴别，采用HPLC建立含量测定以及指纹图谱方法，为该制剂的质量控制提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪 器

Waters 2695高效液相色谱仪，Waters 2998检测器，Empower色谱工作站；CP214型电子分析天平(万分之一)，奥豪斯仪器有限公司；AB135-S电子天平(十万分之一)，瑞士METTLER公司；ZF-90型暗箱式紫外透射仪，上海顾村电光仪器厂；Diamonsil C18(2)(4.6 mm×200 mm，5 μm)色谱柱；硅胶G板(批号：20150302)，青岛海洋化工厂分厂。

1.2 试 药

粉葛(豆科植物甘葛藤的干燥根，批号：110725-201615)，购自河北全泰药业有限公司，由甄会贤副教授鉴定为正品；10批不同产地粉葛饮片(1.产地：天津，批号：2017051140；2.产地：安徽，批号：2016110591；3.产地：广西，批号：2016060161；4.产地：广西，批号：161201；5.产地：广东，批号：160802；6.产地：广东；批号：1607018；7.产地：云南，批号：6-1-1939；8.产地：河北，商铺号：安国；9.产地：四川，批号：6-1-1952；10.产地：天津，批号：110725-201615)；葛根素对照品(批号：110752-201615)，中国食品药品检定研究院；甲醇(色谱纯，批号：20170301)，天津市科密欧化学试剂有限公司；娃哈哈纯净水，杭州娃哈哈集团有限公司。其余试剂为分析纯。

2 方法及结果

2.1 配方颗粒的制备

称取粉葛饮片，加水煎煮2次，每次1 h(第一次加水量10倍，浸泡30 min，第二次加水量8倍)，合并煎液，旋转蒸发仪减压浓缩至1 mL药液相当于原药材1.5 g(相对密度1.07，60 ℃)。喷雾干燥得到的干燥药粉加入麦芽糊精适量(干燥药粉量的0.5倍)，混匀，干法制粒，即得。

2.2 薄层鉴别

2.2.1 供试品溶液的制备

取本品粉末0.27 g，精密称定，加甲醇10 mL，放置2 h，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5 mL使溶解，作为供试品溶液。

2.2.2 对照品溶液的制备

取葛根素对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.2.3 薄层色谱鉴别

照薄层色谱法(通则0502)实验，吸取供试品溶液5 μL、葛根素对照品1 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-甲醇-水(10:2:0.2)为展开剂，展开后取出，晾干，置紫外仪(365 nm)下检视。

2.2.4 薄层结果

供试品薄层色谱中，在与对照品葛根素相应的位置上，显相同的荧光斑点(见图1)。

图1 粉葛配方颗粒薄层色谱图

2.3 含量测定

2.3.1 对照品溶液的制备

取葛根素对照品适量，精密称定，加30%乙醇制成每1 mL含0.32 mg的溶液，作为母液。

2.3.2 供试品溶液的制备

取本品粉末约0.27 g，参照文献[3]制备供试品溶液。

2.3.3 色谱条件

色谱柱：Diamonsil C18(2)(4.6 mm×200 mm，5 μm)色谱柱；流动相为甲醇-水(25:75)；检测波长为250 nm，进样体积10 μL，柱温：30 ℃，理论板数按葛根素峰计算应不低于4000，分离度良好(见图2)。

图2 粉葛配方颗粒含量测定HPLC色谱图

2.3.4 线性关系的考察

精密吸取葛根素对照品母液0.0625 mL、0.125 mL、0.25 mL、0.50 mL、0.75 mL、1.00 mL各于2 mL容量瓶中，加30%乙醇定容至刻度，摇匀。精密吸取每份样品10 μL按“2.3.3”项下色谱条件测定葛根素的线性关系。以对照品进样量(μg)为横坐标，峰面积A为纵坐标，作图。结果见图3以及表1。

表1 线性关系考察实验

图3 葛根素的标准曲线图

回归方程为：y=1827793.78x+5088.46，r=0.9996，表明葛根素在0.1～1.6 μg范围内呈现良好线性关系。

2.3.5 精密度实验

表2 葛根素精密度实验

2.3.6 稳定性实验

精密吸取供试品溶液在0、2、4、8、12、24 h分别进样10 μL，测定峰面积，计算RSD值，见表3，结果表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

表3 葛根素稳定性实验

2.3.7 重复性实验

取同一批粉葛配方颗粒共6份，每份约0.27 g，研细，精密称定，按“2.3.2”项下方法制备得供试品溶液，按“2.3.3”项下色谱条件，测定葛根素峰面积，计算葛根素的含量，计算RSD值，结果见表4，结果表明方法的重复性良好。

表4 葛根素重复性实验

2.3.8 加样回收率实验

称取已知含量的粉葛配方颗粒六份，每份0.14 g，按样品中葛根素含量与对照品(1:1)加入一定量的葛根素对照品，按“2.3.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.3.3”项下条件进样，计算葛根素的加样回收率及RSD值，结果见表5，结果表明建立的方法准确度良好。

表5 样品中葛根素回收率实验

2.3.9 样品含量测定

分别精密吸取10批不同产地的粉葛制备的配方颗粒供试品溶液各10 μL，按“2.3.3”项下条件注入液相色谱仪，测定，计算结果见表6。

表6 样品中葛根素含量测定结果

由表6结果可知粉葛配方颗粒中葛根素为11.44 mg/g，在此基础上下浮20%设限，由此确定本品每g含粉葛以葛根素(C21H20O9)计，不得少于9.15 mg。

2.4 粉葛配方颗粒指纹图谱相似度评价方法

2.4.1 色谱条件

色谱柱：Diamonsil C18(2)(4.6 mm×200 mm，5 μm)色谱柱；流动相：流动相A为甲醇，流动相B为水，流动相洗脱条件见表7；流速：1.0 mL·min-1；柱温：30 ℃；检测波长：280 nm；进样量：20 μL；参照物分离度良好，7个峰重现性好(见图4)。

表7 流动相洗脱条件

图4 粉葛配方颗粒指纹图谱

2.4.2 供试品溶液的制备

按“2.3.2”项下方法制备。

2.4.3 参照物溶液的制备

取葛根素对照品适量，精密称定，加30%乙醇制成每1 mL含80 μg的参照物溶液。

2.4.4 指纹图谱的建立

采用药典委员会颁布的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》进行数据处理，设定S5为参照图谱，将其他样品的色谱峰与参照峰进行自动匹配生成粉葛指纹图谱叠加图图5所示。

图5 10批粉葛颗粒指纹图谱(S5 参照图谱；R对照图谱)

2.4.5 指纹图谱相似度计算

采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》进行相似度计算，将10批粉葛配方颗粒数据导入系统，设定中位数匹配模式，进行色谱峰匹配，并进行相似度分析，利用夹角余弦法对样品进行相似度计算(见表8)。通过计算得到10批粉葛配方颗粒的色谱指纹图谱与共有模式的色谱指纹图谱的相似度，以此来评价这10批粉葛药材的质量。

表8 相似度计算结果

根据相似度计算结果可以得知，与对照指纹图谱相比较，10批粉葛药材相似度均>0.90，具有较好相似性。

3 结 论

本实验初期采用2015版《中国药典》粉葛鉴别项下的展开系统对样品进行薄层色谱鉴别，即二氯甲烷-甲醇-水(7:2.5:0.25)，效果不理想。调整展开系统为二氯甲烷-甲醇-水(10:2:0.2)后，展开效果好，斑点清晰，此方法简单，准确，可作为粉葛定性鉴别方法。

中药指纹图谱能较全面地反映中药中所含化学成分的组成及含量分布情况，进而对药材质量进行整体描述和评价[7-8]，使质量控制指标由单一成分含量测定上升为对整个中药内在品质的检测[9-10]，从而实现对中药内在质量的综合评价和整体物质的全面控制。结果显示，10批粉葛配方颗粒的指纹图谱中色谱峰数目一致，含量相近，不同批次间差异小，证明其制备工艺稳定。由此可知，本实验建立的高效液相指纹图谱特征性强，结合葛根素的含量测定，可作为控制粉葛配方颗粒的质量控制方法，使质量达到稳定可控。