陈玮姗，出树强（通信作者）

1 泉州市第一医院病理科 （福建泉州 362000）；2 福建医科大学附属第二医院病理科 （福建泉州 362000）

原发性肝癌在临床上的发生率较高，好发于东南沿海地区，常见于40～50岁人群中，严重影响患者的健康及生活[1]。目前，临床上对于原发性肝癌病因复杂，普遍认为与肝硬化、病毒性肝炎及黄曲霉的化学物质和环境因素有关[2]。由于患者发病早期临床症状缺乏典型性，多数患者确诊时已经是中、晚期，错过最佳诊疗时机[3]。近年来，随着医疗技术的不断发展，微小核糖核酸（microRNA，miRNA）、长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）和RNA 结合蛋白（RNA-binding proteins，RBPs）被认为对基因表达有主要影响[4]；同时，RNA 芯片与测序技术已经将RBP 鉴定作为重要的转录调控因子，能够同时控制多个信使核糖核酸（messenger RNA，mRNA）蛋白。La 及La 相关蛋白是一类较为保守的RBPs，主要包括La 相关蛋白（La-related proteins 3，LARP3）、LARP1、LARP1B、LARP4等，其表达与肿瘤的增殖、侵袭与迁移等有关[5]。本研究以原发性肝癌患者为研究对象，探讨La 及La 相关蛋白在原发性肝癌患者中的表达及与预后的相关性，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2016年6月至2017年1月医院收治的68例原发性肝癌患者作为研究对象，男40例，女28例；年龄32～78岁，平均（52.98±5.73）岁；肿瘤直径1～6 cm，平均（3.41±0.67）cm；分化类型，高分化24例，中分化30例，低分化14例；TNM分期，Ⅰ～Ⅱ期33例，Ⅲ～Ⅳ期35例；淋巴结转移21例，淋巴结未转移47 例。本研究经医院医学伦理委员会审核批准。

纳入标准：符合原发性肝癌诊断标准，经手术组织检查确诊；拟行手术治疗，完成病灶组织的采集。排除标准：精神异常、血液系统疾病；认知功能异常、器质性疾病或术前放化疗；自身免疫系统疾病、其他部位恶性肿瘤。

1.2 方法

所有患者均拟行手术治疗，具体操作如下。（1）标本采集：手术过程中取病灶组织及癌旁组织，常规石蜡包埋后制备5 μm 切片，备用。（2）检测方法：取4～5片切片（大小为1 cm×1 cm），将其放置在离心管中，加入二甲苯1 ml，旋涡振荡10 s；离心2 min，速度为12 000 rpm，离心完毕后去除上层清液，加入无水乙醇1 ml，旋涡震荡混合后离心2 min，速度为12 000 rpm，去除上清，避免吸除沉淀；打开管盖，室温或最高37 ℃进行10 min 孵育，直到无乙醇残留，加入150 μl 缓冲GTL，加入10 μl 生化蛋白酶，旋涡振荡混合；56 ℃下完成15 min 孵育，直到样品完全溶解，加入320 μl buffer GTL，离心1 min，速度12 000 rpm，旋涡振荡混合均匀；将所获得的溶液全部收集到FM 管中，离心1 min，速度12 000 rpm，取滤液；向获得的滤液中加入无水乙醇720 μl，旋涡振荡混合均匀；将获得的溶液全部放置在吸附柱二甲基乙酰胺化中（可分多次转入），离心1 min，去除废液，并将吸附柱重新放置在收集管中；向吸附柱中加入500 μl 缓冲器RW2，离心1 min，速度12 000 rpm，去除废液，并重新放回收集管中；重复上述操作（2次），离心2 min，速度12 000 rpm，去除废液，将吸附柱放置在室温下数分钟晾干后，将吸附柱放置在新的核糖核酸酶离心中，向吸附柱中间悬空中加入20～50 μl 双蒸馏水，室温下放置2～5 min，离心1 min，速度为12 000 rpm，收集RNA溶液，放置在冰箱中，备用。（3）检测方法：采用实时荧光聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）技术测定不同病灶组织中La 及La 相关蛋白RNA 水平，设置PCR 参数为30 ℃下10 min，42 ℃下30 min，99 ℃下5 min，5 ℃下5 min，连续进行35个循环，72 ℃下10 min 延长，获得最终产物并放入1.5%琼脂凝胶电泳中，β-actin 为内对照，引物见表1。所有患者治疗后均完成3年随访，分析La 及La 相关蛋白不同表达下生存期。

表1 引物设计

1.3 统计学处理

采用SPSS 18.0统计软件进行数据处理，计数资料以率表示，采用χ2检验，计量资料以x-±s 表示，采用t 检验，P<0.05差异有统计学意义。

2 结果

2.1 原发性肝癌患者不同组织中La 及La 相关蛋白mRNA水平比较

原发性肝癌患者病灶组织中LARP3、LARP1、LARP1B、LARP4 mRNA 水平均高于癌旁组织中（P<0.05），见表2。

表2 原发性肝癌患者不同组织中La 及La 相关蛋白mRNA水平比较（）

表2 原发性肝癌患者不同组织中La 及La 相关蛋白mRNA水平比较（）

组织类型 例数 LARP3 LARP1 LARP1B LARP4病灶组织 68 0.75±0.11 0.79±0.13 0.76±0.12 0.78±0.14癌旁组织 68 0.21±0.06 0.19±0.05 0.22±0.08 0.20±0.07 t 6.493 7.724 5.498 7.121 P 0.000 0.000 0.000 0.000

2.2 不同表达下原发性肝癌生存期比较

所有患者治疗后均完成3年随访，68例原发性肝癌患者中La 高表达41例，低表达27例；La 相关蛋白高表达36例，低表达32例，La 及La 相关蛋白高表达患者生存期均短于低表达患者（P<0.05），见图1。

图1 不同表达下原发性肝癌患者的生存期

3 讨论

原发性肝癌是一种具有细胞周期失调、异常的血管生成和逃避凋亡分子特征的高密度血管生成实体瘤[6]。目前，临床上对于肝癌发病机制尚未阐明，但是其发生、发展常伴有染色体畸变、分子通路改变及基因突变等。La 及La 相关蛋白是一类进化上相对保守的RNA 结合蛋白，LARPs 家族中含有氨基酸90的保守La 基序，其结构与原本的La 蛋白类似。La 蛋白又称为干燥综合征抗原B，在细胞核内表达较为丰富[7]。La 蛋白至少有3个区域，含有中度保守的RNA 识别基序。本研究结果显示，原发性肝癌患者病灶组织中LARP3、LARP1、LARP1B、LARP4 mRNA 水平均高于癌旁组织中（P<0.05），说明La 及La 相关蛋白在原发性肝癌患者中呈高表达，能直接参与疾病的发生、发展。国内学者研究表明，La 及La 相关蛋白在原发性肝癌中能发挥重要作用，促进上皮肿瘤细胞的增殖，亦可调节细胞周期维持肿瘤细胞更新；同时，La 及La 相关蛋白能刺激抗凋亡因子Bcl-2合成，抵抗顺铂诱导的细胞凋亡，在肿瘤化疗耐药中发挥重要作用[8]。为了进一步分析La 及La 相关蛋白与原发性肝癌患者预后的关系，本研究所有患者治疗后均完成3年随访，68例原发性肝癌患者中La 高表达41例，低表达27例；La 相关蛋白高表达36例，低表达32例，La 及La 相关蛋白高表达患者生存期均短于低表达患者（P<0.05），说明La 及La 相关蛋白高表达患者生存期较短、治疗预后较差。因此，原发性肝癌患者治疗过程中应加强患者La 及La 相关蛋白水平，评估预后，指导临床治疗。

综上所述，La 及La 相关蛋白在原发性肝癌患者中呈高表达，且表达水平能反映患者疾病严重程度，预测患者预后，指导临床治疗。