徐静娟，栗金权

(南通大学附属常州儿童医院，江苏 常州 213003)

复方薄荷涂剂，为我院的医疗机构制剂(医院制剂)，是耳鼻喉科常用的鼻用涂剂，主要由薄荷脑、樟脑、桉叶油等成分组成，用于治疗萎缩性鼻炎、鼻黏膜干燥等症。该制剂安全性高、疗效确切，在儿童中应用广泛，并被收载于《江苏省医疗机构制剂规程》第一册。

樟脑有消炎、抗菌(白色念珠菌、金黄色葡萄球菌等)作用，对薄荷脑有促渗透的作用[1]，是复方薄荷涂剂中的重要组分。为保障儿童用药安全，进一步加强制剂的质量控制，本文建立方法对制剂中樟脑的含量进行测定，并做了系统的方法学研究。本文采用的高效液相色谱法(HPLC)测定樟脑含量，专属性高、结果准确可靠，为复方薄荷涂剂的质量评价提供重要依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

沃特世高效液相色谱仪(型号E2695)，沃特世PDA检测器(型号2998)，梅特勒万分之一电子天平(型号AG245)。

1.2 药品与试剂

樟脑对照品(110747-201409)，甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂为分析纯；复方薄荷涂剂(常州市儿童医院自制)；缺樟脑的复方薄荷涂剂(常州市儿童医院自制)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

采用Waters Symmetry C18(4.6mm×250mm，5μm)以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(75∶25)为流动相；进样量：25μL；检测波长：288nm；流速：1.0mL·min-1；柱温：30℃。

2.2 溶液的制备

2.2.1对照品溶液的制备

精密称取樟脑对照品10.14mg，置10ml量瓶中，加无水乙醇使溶解并稀释至刻度作为贮备液。精密量取贮备液2ml置10ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀即得。

2.2.2供试品溶液的制备

精密量取复方薄荷涂剂2ml，置100ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

2.2.3阴性对照溶液的制备

按复方薄荷涂剂处方量取樟脑以外的其余原辅料，同法制备得到缺樟脑的复方薄荷涂剂，即阴性制剂，按“2.2.2”项下供试品溶液制备方法，取阴性制剂2ml，置100ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得阴性对照溶液。

2.3 专属性

以“2.1”项下的色谱条件，分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各25μL，注入色谱柱，采集色谱图(见图1)。

由图1可知，供试品溶液与对照品在保留时间(tR)为6.2min处出现色谱峰，阴性对照无此峰，我们认为tR=6.2min处的色谱峰为樟脑色谱峰，分离效果良好，供试品溶液中樟脑色谱峰与相邻色谱峰分离度均大于1.5，理论塔板数以樟脑计大于8000。

2.4 线性关系与线性范围考察

精密称取樟脑对照品10.14mg，置10ml量瓶中，加无水乙醇使溶解并稀释至刻度，作为对照品贮备液。精密量取贮备液适量，加无水乙醇配制成浓度为0.05、0.1、0.2、0.4、0.6、1.0mg·mL-1的系列对照品溶液。吸取上述各浓度对照品溶液25μl注入高效液相色谱仪，记录色谱峰面积。以浓度C(mg·mL-1)为横坐标，樟脑峰面积(A)为纵坐标，进行线性回归，得到线性回归方程：Y=664401X-726.6，r=0.9999。结果表明，樟脑在0.05～1.00mg·mL-1浓度范围内与峰面积线性关系良好。

2.5 精密度试验

取浓度为0.6084mg·mL-1的樟脑对照品溶液，按上述色谱条件测定峰面积，重复进样6次，计算峰面积的相对标准偏差RSD(n=6)为0.4%，小于2%，本实验的精密度满足要求。

2.6 重复性试验

按“2.2.2”项下操作，平行配制6份供试品溶液，按上述色谱条件测定，并计算樟脑含量。结果樟脑含量的平均值(n=6)为10.1250mg·mL-1，RSD为0.6%，小于2%，表明该方法重复性良好。

2.7 溶液稳定性

取同一供试品溶液，按上述色谱条件在0h，2h，4h，6h，8h，12h，24h进行测定，樟脑色谱峰无明显变化，其峰面积的RSD为0.6%，表明样品溶液在24h内是稳定的。

2.8 加样回收率试验

精密量取已知樟脑含量的样品(9.2550mg·mL-1)1ml，平行取6份，分别置于100ml量瓶中，加入3.0646mg/ml樟脑对照品溶液3ml，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，备用。吸取上述续滤液25μL注入高效液相色谱仪，在实验色谱条件下进行测定，用外标法计算含量，并计算加样回收率。樟脑的平均回收率为100.36%，RSD为0.73%，见表1。

表1 加样回收率试验结果

2.9 样品含量测定

取3批样品，按“2.2.2”项下操作，制备供试品溶液，在上述色谱条件下，每份进样2次，测定峰面积，并计算复方薄荷涂剂中樟脑的含量，见表2。

表2 样品含量测定结果

3 结论

本试验采用PAD HPLC色谱法测定复方薄荷涂剂中樟脑的含量，精密度高(RSD=0.4%)、重复性好(RSD=0.6%)，在0.05～1.0mg·mL-1浓度范围内与峰面积线性关系良好。加样回收率在98%～102%之间，RSD小于2%，表明该方法准确度高。所以，该法适用于复方薄荷涂剂中樟脑的含量测定。

4 讨论

4.1 波长的选择

建立检测方法的初期，波长的选择至关重要。使用沃特世PDA检测器对樟脑对照品溶液在200～400nm波长范围内扫描，得到其波长扫描图谱(沃特世PAD检测器命名为光谱指数图)，显示对照品溶液在287.7nm处有吸收峰。另外，样品中处方中的各个辅料，根据处方量配制相同浓度的辅料供试品溶液，同法在200～400nm波长范围内进行扫描，在288nm波长处无吸收，表明辅料在288nm处无干扰，故选择288nm为测定波长。

4.2 流动相比例的考察

文献中HPLC法测定樟脑含量多采用甲醇-水体系[2-7]为流动相，所以本文直接考察了甲醇-水的比例，如甲醇-水为(80∶20)、(75∶25)、(70∶30)、(60∶40)，结果显示有机相(甲醇)比例越低，出峰时间越晚，色谱峰之间的距离越大，峰宽越大，干扰峰出尽所需时间越长，如图4。综合考虑保留时间、峰型、峰面积和分离度，最终选取甲醇-水体积比为75∶25作为流动相。

4.3 柱温的选择

同等色谱条件下，不同柱温可能会对保留时间、峰型有影响，所以分别在柱温为25℃、30℃、35℃时进行了考察，结果显示保留时间分别为6.2min、6.1min、5.9min，表明随着柱温升高，出峰时间越早，但是峰型和峰面积无明显变化，含量测定结果也无明显差异。考虑到环境温度随季节性的变化，30℃比较容易控制，所以选择柱温为30℃。