顾健沛 王巍 李士博 王小乔

1. 兰州现代职业学院，甘肃 兰州730207；2. 甘肃省药品检验研究院，甘肃 兰州730030；3. 兰州市食品药品检验所，甘肃 兰州730040

甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.具有补脾益气、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛、调和诸药等功效［1-2］，主要化学成分为三萜类皂苷、黄酮及多糖类成分［3-5］，广泛用于医药、保健、化妆品等产品中，近20 年来，由于对野生甘草过度拆挖，甘草野生资源濒临枯竭，为满足市场的需要，国内各原甘草产区开始大量种植甘草，但对甘草的质量评价仅限于《中国药典》的质量要求，不能全信息反映甘草质量，本研究采用HPLC 检测手段，借鉴指纹图谱的研究方法，对甘肃野生与栽培的甘草通过化学成分的指纹特征进行研究，经聚类分析，形成直观、量化的数字图谱，为甘草药材的鉴定及质量控制提供了新的手段。

1 材料与方法

1.1 仪器与试药 Waters1200 液相色谱仪；岛津LC-2010A 高效液相色谱仪；SPD-M10Avp 二极管阵列测器。超声波清洗器（天津AUTOSCIENCE 公司）；sartorius225D 电子天平。甘草酸单铵盐对照品（批号110731-201720），甘草苷对照品（批号11610-201607）购自中国药品生物制品检定研究院；乙腈为色谱纯，磷酸为分析纯，水为二级反渗透实验用水，色谱柱：Hypersil C18（5um，4.6mm×250mm）；保护柱：Hypersil C18（5um，4mm×40mm）。甘草样品：产自甘肃省各主产地区及宁夏等地，将样品切头取除1cm 以下至0.3cm 部分。

2 方法与结果

2.1 样品来源 甘草产自甘肃省各主产地区及宁夏等地，北纬36 度线以上，13 个地区，19 批次甘草。见表1。

2.2 样品的制备 取500g 样品，粉碎成细粉，过80目筛，取约1g 甘草粉，精密称定，置100mL 容量瓶中，加80%的甲醇适量，超声提取40min，加80%的甲醇至刻度，摇匀，过滤，取续滤液用0.45μm 的微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。取甘草酸铵对照品适量，精密称定，加甲醇制成含甘草酸铵0.2mg/mL 的溶液，即得（甘草酸重量=甘草酸铵重量/1.0207）。或按《中国药典》2015 年版方法配置。取甘草苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成含甘草苷20μg/mL 的溶液，即得［1］。

2.3 实验方法 采用梯度洗脱的方法以A 0.5%磷酸溶液、B 乙腈，二元梯度洗脱。柱温：30℃，流速：0.8mL/min，进样量：10μL，梯度洗脱系统见表2，色谱图见图1。

《中国药典》2015 年版规定，含甘草苷（C21H22O9）不得少于0.50%，甘草酸（C42H62O16）不得少于2.0%。

2.4 甘草计算机模拟指纹图谱的建立 取上述样品，按照上述方法，对甘草样品进行处理测定，以计量标准物甘草酸保留时间为1，计算各出峰与相对保留时间的关系做各样品图，其中03 酒泉样品为不合格品，见表3，图2-6。

在前置色谱条件中，10min 前为冲洗极性糖类成分，不计入分析范围，即相对保留时间10/39=0.25，小于0.25 的计算峰不计入甘草指纹图谱相对保留时间统计。

2.5 结果 将在特征相对保留时间0.47、0.49、0.66、0.76、0.90～0.92、0.96 及1.00 峰面积归类统计，相对保留时间面积表。见表3。

表1 甘草样品采集表

表2 甘草梯度洗脱系统

3 讨论

以合格甘草为标准基样，进行分析，得出以相对保留时间为横坐标，峰面积为纵坐标的数字图谱；相对保留时间0.49 为甘草苷，相对保留时间1 为甘草酸，甘草应具备相对保留时间为0.47、0.49、0.66、0.76、0.90～0.92、0.96 及1.00 处7 个数字特征峰组成的甘草计算机模拟指纹图谱，可用于甘草全信息质量控制。

表3 甘草相对保留时间及峰面积表

图1 甘草测定指纹图谱

图2 样品17 庆阳（正宁）野生甘草计算机模拟指纹图谱

图3 样品4 酒泉种植4 年甘草计算机模拟指纹图谱

图4 样品19 宁夏同心种植4 年甘草计算机模拟指纹图谱

图5 样品13 通渭野生甘草计算机模拟指纹图谱

图6 样品3 酒泉种植3 年甘草计算机模拟指纹图谱

甘草应在以甘草酸为1 的保留时间，计算其他色谱峰，在相对保留时间为0.47、0.49、0.66、0.76、0.90～0.92、0.96、1.00 处有7 个特征峰。人工种植4 年甘草且种植纬度在北纬36 度以上，其甘草酸与甘草苷能同时达到《中国药典》质量要求，野生甘草与种植合格甘草有相同的数字特征峰。