田 猛，李纯锦，易康乐，周 虚*

（1.吉林大学 动物科学学院，长春 130062；2.湖南省畜牧兽医研究所，长沙 410131）

奶牛乳腺炎是奶牛场的常发病之一，症状表现为乳房实质、间质的炎症，多由机械性刺激、病原微生物浸入及化学物理性损伤所致，结果导致乳汁中体细胞数增加，乳腺组织发生病理变化。导致奶牛乳腺炎的原因有很多，如病原微生物的感染、遗传因素、饲养管理因素、环境因素以及奶牛的年龄和胎次，其中病原微生物感染是主要致病因素，病原微生物主要包括金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、乳房链球菌，感染的微生物因地区不同而异［1］。临床型乳房炎往往会由于不表现临床症状，从而忽略治疗的隐性乳房炎发展而来。

目前，抗生素被列为世界范围内治疗乳腺炎的首选。但由于长期使用抗生素，奶牛和牛奶中的抗生素残留和细菌耐药性不仅影响牛奶质量，而且对奶牛和人体健康造成危害［2-3］。寻找可以替代传统抗生素治疗方法的新型、改良的治疗方法已成为科研人员的研究重点。近年来中草药以其独特优势成为科研工作者研究的热点。中草药是一种纯天然物质，含有多种生物有效成分，具有抗菌消炎的作用，还可以增强动物机体的免疫功能。运用中草药治疗奶牛乳房炎目前已经取得了喜人的成果［4-7］。

本试验通过给健康奶牛、隐性乳房炎组奶牛饲喂发酵中草药添加剂，比较使用添加剂前后奶牛体细胞数、奶牛血清炎性指标、乳脂率和蛋白率的变化，以探究饲喂中草药添加剂对奶牛乳腺炎预防和治疗效果。

1 材料

1.1 试验动物

胎次、泌乳期、产奶量相近的奶牛40头，湖南省畜牧兽医研究所奶牛场提供。其中隐性乳房炎患病奶牛20头，判定标准为：乳中体细胞数大于5×105个／mL。

1.2 药物与试剂

1.2.1 药物 黄芪、王不留行、鱼腥草等中草药按比例混合均匀，并添加水、芽孢杆菌、乳酸菌、酵母菌、丁酸菌、光合细菌，在适宜环境发酵3 d。发酵菌种来自河南君安生物科技有限公司。

1.2.2 试剂盒 SAA测试盒（批号为ml042466）、白细胞介素1（IL-1β）测试盒（批号为ml064295）、白细胞介素2（IL-2）测试盒（批号为ml023901）、白细胞介素8（IL-8）测试盒（批号为ml023909），均购自上海酶联生物科技有限公司。

1.3 主要仪器

离心机（Thermo，美国）、酶标仪（BioTek，美国）、移液枪（Eppendorf，德国）、离心管。

2 方法

2.1 动物分组

根据湖南省畜牧兽医研究所（DHI）2019年4月份检测结果，选取20头正常奶牛，分成正常奶牛组和正常奶牛饲喂中草药奶牛组两组；选取20头隐性乳房炎奶牛（奶牛无明显临床乳房炎症状，正常泌乳，乳汁无肉眼可见异常，但DHI检测体细胞数大于5×105个／mL）分为两组，分别为隐性乳房炎奶牛组和隐性乳房炎饲喂中草药奶牛组。

2.2 试验方法

试验日期为2019年5—6月，每头奶牛饲喂中草药量为200 g／（头·d）的发酵中草药添加剂，试验期为30 d。

2.3 奶样的采集

在使用中草药复方添加剂前和饲喂第7，14，21，28天采集试验牛奶样，放2～5℃保存，并及时送湖南省畜牧兽医研究所（DHI）检测乳中体细胞数、乳脂率、乳蛋白率。

2.4 血样的采集与血清的制备

在使用中草药复方添加剂第0天和第15天、第30天，在奶牛安静状态下尾根静脉采血，每头每次采血3 mL。采血后将血液静置20～40 min，放入离心机中3 000 r／min离心5～10 min，分离血清分装于1.5 mL Eppendof管中，然后放置于-20℃冰箱中保存，待测。

2.5 检测方法

细胞因子IL-1、IL-2、IL-8以及SAA的测定。将低温保存的血清样室温解冻，按试剂盒说明书分别进行各指标含量的测定。

2.6 数据的统计与分析

采用SPSS 22.0软件对试验数据利用独立样本t检验和One-way ANOVA过程进行分析，结果以“平均数 ±标准差”表示。数据差异显著性标注：P≤0.05表示差异显著，P＜0.01表示差异极显著，P＞0.05表示差异不显著。

3 结果与分析

3.1 饲喂中草药添加剂对奶牛乳中体细胞数的影响

见表1。

表1 奶牛乳中体细胞数在饲喂中草药各时期的变化 104·m L-1

从表1可见：正常奶牛饲喂中草药添加剂组与正常奶牛组间比较发现体细胞数没有明显的改变变化。从饲喂第14天开始患乳腺炎饲喂中草药组奶牛体细胞数逐渐减少与正常奶牛组体细胞数的差距，在第21天与正常奶牛组体细胞数差异不显著（P＞0.05）。反观未饲喂中草药的患乳腺炎组奶牛体细胞数保持在较高的水平，且显著高于正常组奶牛体细胞数（P≤0.05）。

3.2 饲喂中草药对奶牛乳中乳脂率和乳蛋白率的影响

见表2。

表2 奶牛乳中乳脂率和乳蛋白率在饲喂中草药各时期的变化 %

从表2可见：在整个饲喂试验中，奶牛的乳蛋白率没有明显的变化，奶牛的乳脂率变化整体上不明显，但乳腺炎奶牛饲喂中草药组随着饲喂中草药天数的增多，乳脂率有了显著的增长（P≤0.05）。

3.3 饲喂中草药对奶牛血清中SAA的影响

见表3。

表3 奶牛血清中SAA含量在饲喂中草药各时期的变化 μg·m L-1

从表3可见：乳腺炎奶牛饲喂中草药组在饲喂第30天，血清中SAA含量跟第0天相比具有显著差异（P≤0.05），但与正常奶牛组无显著差异。

3.4 饲喂中草药对奶牛血清中IL-1β、IL-2、IL-8水平的影响

见表4。

表4 奶牛血清中IL-2、IL-6、IL-8含量在饲喂中草药各时期的变化 ng·L-1

从表4可见：随着中草药的饲喂，在正常奶牛组和正常奶牛饲喂中草药组的奶牛血清中炎症因子并没有显著的变化。在乳腺炎奶牛饲喂中草药组奶牛血清中IL-1β、IL-2、IL-8三种炎症因子的水平显著降低（P≤0.05）。

4 讨论

4.1 复方中草药添加剂对奶牛乳腺炎的防治效果

体细胞数现在被越来越多的国家作为一种衡量乳腺健康、牛奶质量的重要指标。牛群的体细胞数标志着牛场饲养管理水平，可以反映奶牛乳腺的健康状况［8］。SCC可作为奶牛乳腺炎的检测方法，通过定期检查牛奶中的SCC，比较每次的测定值，可以查出奶牛群乳房健康状况以及个体乳房被感染的程度，从而能及时诊断隐性乳腺炎，尽早采取措施，减少损失。体细胞数是指每毫升奶中白细胞的数目，通过检测奶牛体细胞数可以诊断隐性乳房炎的情况。正常奶牛乳中体细胞数小于50万个／mL，当奶牛发生乳房炎时乳中体细胞数会显著增加［8］。从本试验结果可以看出，乳腺炎奶牛在饲喂中草药添加剂后乳中体细胞数显著下降，并下降至接近正常奶牛体细胞数水平。蛋白率和乳脂率是衡量牛奶质量的重要指标，本试验中，饲喂中草药添加剂后牛奶中乳蛋白率变化不明显，但在乳腺炎奶牛饲喂中草药组发现乳脂率有明显的上升趋势，这与梁涛等［9］的试验结果相同。因此，长期使用中草药添加剂能在一定程度上提高奶牛的乳品质。同时正常奶牛饲喂中草药添加剂组乳中体细胞数与未处理的正常奶牛组相比也有一定程度的下降。综上得出结论，饲喂复方中草药添加剂可以有效治疗奶牛乳腺炎，并在一定程度上预防奶牛体细胞数的升高。

4.2 复方中草药添加剂对奶牛血清中炎性标记物以及炎症因子水平的影响

奶牛乳腺炎的临床症状主要是炎症反应，表现为以血管通透性增加和白细胞迁移为特征的非特异性炎症。已有研究证明，奶牛发生乳腺炎时乳中体细胞数目会大幅度上升，特别是白细胞数目显著增加［10］。白细胞实现对机体的保护作用主要依赖于自身具有的游走性、趋化性和吞噬作用等。奶牛乳腺炎是一个全身性的病理过程，不仅乳腺组织遭到破坏，血液成分也发生了变化，同时预示乳腺炎奶牛有炎症的发生［11］。

SAA是由肝细胞、脂肪细胞、巨噬细胞和成纤维样滑膜细胞合成的载脂蛋白家族，是一种较新的急性期反应物。目前是临床检测常用的炎性指标，当发生细菌和病毒感染时机体内的SAA水平明显升高［12］。检测原理是因为SAA由局部参与炎症的细胞产生并伴有系统性溢出现象，所以可作为局部和全身炎症的标志物［13］。此外SAA还具有多种生物学功能，包括内毒素的解毒、抑制免疫反应、促进细胞黏附以及迁移等多种生理、病理过程。机体内的SAA主要来源于肝细胞中的C-SAA，在机体受到刺激后会受到产生的一系列细胞因子的作用，此时A-SAA成为体内主要的SAA。虽然在医学检测领域SAA作为炎性指标已经很成熟，但用其作为炎性指标在动物体内的研究还较少。薛永康等［14］证实，乳清中的SAA水平可以作为奶牛隐性乳腺炎的诊断指标。张思学等［15］报道，奶牛乳腺炎的发病程度与乳中SAA水平成正相关。王洪伟［16］认为，患不同程度乳腺炎的牛乳中SAA水平是判定奶牛乳腺损伤的重要依据。杨永新等［17］证实，奶牛乳房炎导致血清中SAA水平增加明显。本试验中，奶牛血清中SAA水平随中草药治疗时间延长明显下降，表明中草药添加剂对奶牛乳房炎具有明显的治疗作用。

炎症细胞因子是指参与炎症反应的各种细胞因子。白细胞介素2（interleukin-2，IL-2）是一种主要由活化T细胞产生的具有多向性作用的细胞因子。白细胞介素8（interleukin-8，IL-8）是一种主要来源于单核-巨噬细胞、内皮细胞、血小板等的中性粒细胞趋化和活化因子。白细胞介素1β（interleukin-1β，IL-1β）是由单核细胞、内皮细胞、成纤维细胞和其他类型细胞在应答感染时产生的细胞因子。孙厚启［18］证实了在炎性乳腺组织中IL-2的表达显著上升。刘本君等［19］证实了血液中IL-8可作为奶牛乳腺炎的诊断指标。尹柏双等［20］的研究证实乳清中IL-1β含量与奶牛隐性乳房炎发病程度呈正相关。在本试验中，饲喂中草药添加剂治疗患乳腺炎奶牛过程中，奶牛血清中IL-1β、IL-2、IL-8含量随治疗时间延长明显下降，与血清炎性指标结果相同，进一步证实血液中IL-1β、IL-2、IL-8也可作为奶牛乳腺炎的诊断指标。

5 结论

由黄芪、王不留行、鱼腥草等中药按照一定的比例配制而成后发酵的复方中草药能够降低隐性乳腺炎患病奶牛乳中的体细胞数和血液中SAA、IL-1β、IL-2、IL-8水平，对奶牛的隐性乳房炎具有较好的治疗作用和一定的抗炎作用。说明中草药对奶牛乳腺炎具有一定的预防功能，而且安全、无副作用。