段冰玉 张肖（通讯作者）

（湖北省中西医结合医院耳鼻咽喉科 湖北 武汉 430000）

鼻咽癌的发生涉及到多个基因的表达改变，正是这些基因表达的改变决定了癌细胞的恶性表型，寻找鼻咽癌相关基因并深入研究其功能对理解和早期诊断鼻咽癌具有重要意义[1]，转谷氨酰胺酶又称谷氨酰胺转氨酶，是一种钙离子依赖性酶家族，能催化蛋白质的酰基转移反应，已有研究证明转谷氨酰胺酶可调节细胞生长和分化，而TGM3 属于上皮型转谷氨酰胺酶，尽管在哺乳动物上皮细胞中TGM3 蛋白的量较血浆型或组织型转谷氨酰胺酶要少的多，但其活性占75%，故推测其可能在转谷氨酰胺酶功能中起主导作用。研究发现其在肿瘤中的活性和表达水平下调可能和肿瘤的发生有关。而鼻咽癌与TGM3 的关系，笔者未见文献报道。本次采用免疫组化对50 例鼻咽癌组织、癌旁正常组织以及20 例鼻咽炎组织中的TGM3 进行检测。报道如下。

1.资料与方法

1.1 标本来源

选择2014 年1 月—2018 年9 月湖北省中西医结合医院收治的50 例鼻咽癌患者，其中男性27 例，女性23 例，平均年龄（18.4±68.0）岁，根据第七版国际抗癌联盟/美国癌症联合委员会(UICC/AJCC)标准进行TNM 分期[2]所有患者入院前均未接受过任何化疗放疗，且均经过两名以上病理医师确诊为鼻咽癌，其病理分级根据WHO 的标准分型进行，同时选取同时期活检组织为慢性鼻咽炎标本20 例为对照组，病历资料见表1。

1.2 主要试剂

兔抗人TGM3 抗体购于某公司，3,3-二氨基联苯胺（DAB）显色试剂购于某公司。

1.3 染色方法

标本组织常规经过4%多聚甲醛固定后脱水透明，浸蜡并包埋，石蜡切片机切片，常规HE 染色确定性质后。之后进行修复，滴加一抗，清洗，上二抗，孵育，DAB 染色，苏木精复染，脱水封片，显微镜下观察。

1.4 结果判定

采用双盲法，TGM3 主要位于细胞的胞浆中，TGM3 阳性表达在细胞的胞浆呈棕黄色着色，阳性细胞率可以分为五个等级：＜5%，5 ～24%，25 ～49%，50 ～74%，＞74% 分别标记为0 ～4 分。显色程度中：无色为0 分，淡黄色弱阳性为1 分，棕黄色为2 分，棕褐色为3 分。免疫反应的得分主要为两种得分的乘积，再分别将乘积划分成0-1 分阴性（-），≥2 分为阳性（+）

1.5 统计学分析

采用SPSS13.0 统计软件，对于正常鼻咽癌组织和鼻咽炎组织之间TGM3 表达情况的比较以及不同临床特征的鼻咽癌组织中的TGM3 表达阳性率的比较均使用χ2检验进行统计学分析，P ＜0.05 差异具有统计学意义。

2.结果

2.1 TGM3 在鼻咽癌组织及鼻咽炎组织及癌旁正常组织中的表达

TGM3 主要在胞浆中表达，在正常粘膜组织中显色多为棕褐色（强阳性），在肿瘤组织中着色浅或不着色（弱阳性或阴性），TGM3 在鼻咽癌组织中的表达降低（P ＜0.05），见图1-6 及表1。

表1 鼻咽癌组织、癌旁正常组织与鼻咽炎粘膜组织中TGM3 的表达

2.2 TGM3 的表达与鼻咽癌临床特征的关系

根据有无淋巴结转移两组间TGM3 的表达，以及临床分期不同组间TG M3 的表达，我们发现，TG M3 的表达与有无淋巴结转移以及患者的性别，年龄无关（P ＞0.05）；在有无淋巴结转移患者中表达有统计学差异（P ＜0.05），其中无淋巴结转移的鼻咽癌患者中，TGM3 基因表达越高。反之亦然，见表2。

表2 TGM3 的表达与鼻咽癌临床特征的关系

3.讨论

鼻咽癌是一种高发于东南亚的头颈部恶性肿瘤，其发生率高达71%[3]，尽管对鼻咽癌的放射治疗提高了很多患者的生存率，但是因为其位置发生于比较隐秘而又无疼痛的区域鼻咽部，因此对鼻咽癌的早期诊断经常非常困难，患者经常在出现转移后而就诊，这部分患者往往因为局部转移和复发而预后很差，近年来，许多着力于研究鼻咽癌的诊断及预后的生物标记被展开，已经有一部分蛋白被认为与鼻咽癌的早期诊断与预后有关[4]，但是发现更多的生物标记不仅对鼻咽癌的诊断有利，也可以为鼻咽癌的后期治疗提供帮助。

本文，我们使用免疫组织化学方法检测了TGM3 在不同特征鼻咽癌患者组织中的表达以及在正常鼻咽部组织中表达，结果表明了TGM3 在鼻咽癌组织中表达下调，且其与鼻咽癌的有无淋巴结转移相关，与患者的发病年龄、性别、病理分级无关。有实验[5]证实TGM3 在食管癌中的表达下调，与我们此次的实验结果相同，且其进一步研究了TGM3 可能成为抑癌基因，通过下调NF-κB 信号通路作为食管鳞癌的治疗和诊断的生物标记。

结果表明，TGM3 在鼻咽癌组织中的表达显著低于正常鼻咽部组织，尽管TGM3 的降低在很多肿瘤组织中发现，但是沉默TG M3 表达的分子机制仍然不明确，在此，我们将TG M3 与鼻咽癌的临床病理特征联系在一起，发现其与患者的年龄、性别、有无淋巴结转移、分期以及病理分级的关系。

综上所述，TGM3 可能成为早期诊断鼻咽癌患者的一个基因标志，此次只针对了小部分样本进行分析，还有很多大样本且其他地区的患者并未包含进去，因此大样本多地区的研究亟待进行。