范宏元 向开维 孙珺 孙弘扬

( 贵州中医药大学第一附属医院 贵州 贵阳 550000)

推拿学是中医的重要组成部分，而手法在推拿学中占有十分重要的地位[1]。推拿手法本质上属于机械力刺激，手法通过其力学效治疗临床许多疾患的细胞生物力学原理之一，随着细胞组学[2]等多学科的发展，推拿的机制已经从简单的操作方法、经验总结向疗效机制研究方向发展。

1.资料与方法

1.1 一般资料

动物选取普通级健康大鼠40 只，体重质量1.8 ～2.5kg，雌雄不限。

1.2 方法

分组实验鼠分笼饲养，适应性饲养7d 后，随机分为正常组A、损伤组B、低频组C 和高频组D，各10 只。

在实验前1d 禁食禁水，并8%硫化钠溶液双腿去毛。用3%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉（注射剂量：1.5mL·kg），麻醉成功后将大鼠固定在自制打击器上，将200g 重的砝码通过与其直径相当的塑料管自20cm 高处垂直自由落在大鼠小腿后侧、踝关节上方2.5cm 处，连续打击2 次，打击面积约2 m（两条后肢均造模）。半小时后可见打击局部出现散在出血点，皮下瘀肿，但皮肤完整无破损且无骨折。

C 组、D 组均于造模后第4 天开始按摩治疗，由具有执业医师资格证的推拿方向研究生经由推拿按摩测试仪测试标准后执行。

取材与预处理A 组实验鼠于第3 天处死取材,BC、D 组实验鼠用于损伤模型于损伤后第10 天处死取材。HE 染色4%多聚甲醛固定液中固定4h 后取出肌肉标本，常规乙醇梯度脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，切片，片厚5μm。取其中一部分切片常规法行HE 染色。于100 倍光镜观察后，200 倍光镜下对目标进行照相，并记录下至少5 个不同视野。用免疫组织化学ABC 法检测MyoD、Myf-5 基因的表达。

1.3 统计学方法

应用SPSS13.0 软件进行统计学分析，数据结果用均数±标准差（±s）。检验水准α=0.05。

2.结果

B、C 组和D 组同A 组相比Myf5 具有明显表达（P ＜0.01）经按摩干预，Myf5 的表达水平C 组与D 组相比，差异有统计学意义（P ＜0.01）。同样MyoD B、C 组和D 组同A 组相比MyoD B 具有明显表达（P ＜0.01）经按摩干预，MyoD B 的表达水平C组与D 组相比，差异有统计学意义（P ＜0.01），见表。

表 Myf5 和MyoD 相对表达量的差异（±s）

表 Myf5 和MyoD 相对表达量的差异（±s）

注:C、D 组与A 组相比*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01；C、D 组与B 组相比★P＜0.05，★★P ＜0.01；C、D 组与B 组相比◆P ＜0.05，◆◆P ＜0.01。

组别 N Myf5 MyOD正常组（A） 10 7.88±021 14.93±0.18损伤组（B） 10 4.97±0.18 12.34±0.18低频组（C） 10 6.74±0.18**★★ 13.34±0.18**★★高频组（D） 10 5.92±0.18**★★ 13.36±0.18**★★

3.讨论

生肌调节因子由MyoD、MyoG、Myf-5、MRF4 等4 个家族成员组成，具有极其相似的结构特征。Myf-5 对骨骼肌发生起重要的调节作用，可激活肌肉的基因转录，抑制细胞生长周期，促进细胞分化。生肌调节因子Myf-5 是与骨骼肌的生成有重要关系的因，可促进损伤部位成纤维细胞转化为纤维细胞，利于伤口的愈合，促进新陈代谢，加快炎症消散。本研究发现，10Hz 和40Hz频率振动干预均可提高大鼠下肢骨骼肌中的Myf5 和MyoD 蛋白表达水平，低频（10Hz）较高频（40Hz）刺激效果更显著。不同的推拿手法振动刺激对肌肉力量提升有良好作用，且得到的效果也不同。

手法的技术特征研究为其他研究的基础。将手法产生的生物效应与手法操作的具体参数密切联系起来，如手法的力量大小、方向、频率等，才能有效的优化力学参数。目前,由于手法操作的技术规范不统一，不同研究者所得到的结果很难互相印证或比较，尚无法得出系统全面的研究结论。