王艳楠 孔德娟

【摘 要】 目的：采用HPLC-MS/MS方法测定古固乐丸中川楝素的含量。方法：采用Waters XBridge C18柱（2.1mm×100mm，3.5μm），以乙腈-0.01%甲酸溶液（31 ∶69）為流动相;质谱使用电喷雾电离源（ESI）负离子模式，多反应监测（MRM）扫描方式检测，定性离子对为（m/z） 573/531和（m/z） 573/425。结果：川楝素对照品在0.002165～0.02165μg范围内与两个峰面积之和具有良好的线性关系（r=0.9997），平均加样回收率为99.7%，RSD=0.7%（n=9）。结论：该方法稳定、准确性好，可用于古固乐丸中川楝素的质量控制。

【关键词】 川楝素;古固乐丸;HPLC-MS/MS

【中图分类号】R284.1   【文献标志码】 A    【文章编号】1007-8517（2020）21-0029-02

Abstract：Objective The content of Toosendanin in Gugule Pill was determined by HPLC-MS/MS.Methods The HPLC-MS/MS analysis was performed on Waters XBridge C18 column（2.1mm×100mm，3.5μm），eluted with acetonitrile-0.01% formic acid solution （31∶69）.Negative ion mode of electrospray ionization source（ESI） by mass spectrometry，Multi-reaction detection（MRM） scanning method，qualitative ion pair is （m/z） 573/531 and （m/z） 573/425. Results There was a good linear relationship between 0.002165～0.02165μg in the injection volume of Toosendanin（r=0.9997），with the average recoveries were 99.4%  and the RSD was 0.9%（n=9）.Conclusion The method is stable and accurate.It could be used for the quality control of Toosendanin in Gugule Pill.

Keywords：Toosendanin;Gugule Pill;HPLC-MS/MS

古固乐丸是呼伦贝尔市人民医院制剂，由乳香、草决明、苘麻子、五灵脂、木香、瞿麦、诃子、川楝子、栀子、苦参、没药十一味药组成的复方制剂。功能：燥“协日乌素”，止痛。用于游痛症，风湿性关节疼痛。川楝子属理气药，具有舒肝、行气、止痛、驱虫的功效[1]，对本方的临床疗效有重要作用。川楝子的药理作用机制为阻断神经肌肉接头间的传递，驱虫，抑菌[2]。市场上发现川楝子质量参差不齐，为确保制剂药效，以川楝子中主要有效成分川楝素为定量监控指标可有效地控制产品的质量。本文采用HPLC-MS/MS法测定其中川楝素的含量，方法稳定、准确性好。可作为质量控制的方法。

1 仪器和材料

1.1 仪器 LCMS-8030三重四级杆液质联用仪（岛津公司）;甲醇为色谱纯，水为高纯水，乙腈为色谱纯。川楝素（批号：111842-201804，含量以96.9%计，购自中国食品药品检定研究院），古固乐丸（批号：20190821、20190916、20191104，呼伦贝尔市人民医院制剂室）。

2 方法和结果

2.1 色谱、质谱条件 色谱柱：Waters XBridge C18色谱柱（2.1mm×100mm，3.5μm），流动相为乙腈-0.01%甲酸溶液（31∶69）， 质谱使用电喷雾电离源（ESI）负离子模式[3]，多反应检测（MRM）扫描方式检测， 离子对分别为（m/z） 573/531和（m/z） 573/425，进样量2μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取川楝素对照品0.01117g，置50mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，制成每1mL含川楝素0.2165mg的对照品贮备液;精密量取1mL对照品贮备液，置100mL量瓶中，加甲醇稀释并定容至刻度，制成每1mL含川楝素2.165μg的对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液 取古固乐丸，研细（过三号筛），取粉末1.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，称定重量，加热回流1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性对照溶液 按照古固乐丸的制备工艺制备不含川楝子的阴性对照样品，并按“2.2.2”项下方法制成阴性对照溶液。

2.3 专属性试验 精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各2μL进行测定，结果：阴性对照色谱在川楝素两个峰保留时间处无干扰。结果见图1。

2.4 线性关系考察 精密吸取配制好的对照品溶液1、2、4、6、8、10μL分别进样。以川楝素两个峰面积之和为纵坐标，以对照品进样量X（μg）为横坐标，绘制标准曲线。川楝素进样量在0.002165～0.02165μg范围内线性关系良好。回归方程为：Y=71727773.74X+1660.41，r=0.9997。

2.5 精密度试验 取“2.2.1”项下的对照品溶液2μL，重复进样6次，测得川楝素两个峰面积之和平均值为319063.5， RSD为0.6%。

2.6 重复性试验 取供试品（20190821）古固乐丸供试品6份， 按“2.2.2”项下方法操作，测定含量。结果川楝素含量的平均值（n=6）为0.13mg·g-1，RSD为0.4%。

2.7 稳定性试验 取同一批号（20190821）古固乐丸供试品溶液，室温放置，分别于0，2，4，6，8，12，24h按上述色谱条件测定。测得川楝素峰面积的RSD（n=6）为0.9%。结果表明供试品溶液室温放置24h内稳定。

2.8 加样回收率试验 精密称取已知含量的样品约0.6g，共9份，分别精密加入一定量的川楝素对照品贮备液，按“2.2.2”项下方法操作，测定含量，并计算回收率。结果见表1。川楝素平均回收率（n=9）为99.7%。

2.9 样品测定 取古固乐丸，按上述供试品溶液制备方法制备，并按上述色谱、质谱条件测定，结果见表2。

3 讨论

本方法参考《中国药典》2015年版一部川楝子的含量测定方法中的样品制备及色谱条件对古固乐丸中川楝素进行分析。

质谱条件方面，《中国药典》2015年版一部采用的是单级四极杆质谱检测器，选择性反应监测方式，即只扫描一次母离子（m/z） 573;而本方法使用的是LCMS-8030三重四级杆液质联用仪（岛津公司），多反应监测（MRM）模式，即同时检测两个母离子/子离子对，分别为（m/z） 573/531和（m/z）573/425，进行含量测定，可排除更多的干扰离子，测定更为精准。

本方法样品前处理简单、回收率高、专属性强，可作为古固乐丸的质量标准，能够有效控制样品的质量。

参考文献

[1]时等，刘妍如，杨建云，等.中药川楝子的最新研究进展[J].中国临床药理学与治疗学，2012（3）：357-360.

[2]张建楼，钟秀会.川楝素的药理作用研究概况[J].上海畜牧兽医通讯，2007（5）：65-67.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典（2015年版一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2015：42.

（收稿日期：2020-06-09 编辑：刘 斌）