唐苏铁，黄光墉，王金生

(1.深圳市宝安区福永人民医院桥头社区健康服务中心，广东 深圳 518103；2.深圳市宝安区福永人民医院检验科，广东 深圳 518103)

在宫颈上皮内瘤变(CINⅠ)、宫颈癌发生与发展中，人乳头瘤病毒(HPV)感染发挥重要作用[1]。且随女性年龄增加，其体内雌激素水平持续降低，会影响内分泌、免疫功能，降低对HPV抵御和清除能力，这可能是HPV持续感染的关键[2-3]。而且，近年来，人们开始越来越多地关注宫颈疾病发生、发展中免疫状态的作用，其中T淋巴亚群能对机体免疫状态进行反映，被证实在HPV感染并宫颈病变中存在一定异常表达[4]。本研究为证实这一点，分析HPV感染宫颈病变发生与细胞免疫功能的相关性，选择2016年5月～2018年5月本院200例HPV感染合并宫颈疾病患者的临床资料，现报告如下。

1 资料与方法

1.1一般资料：随机抽取2016年5月～2018年5月本院200例HPV感染合并宫颈疾病患者，作为研究组。同样方法选取同期到本院体检的200名健康人，作为对照组。研究组年龄35～75岁，平均(56.36±6.33)岁；宫颈炎64例，宫颈上皮内瘤变CINⅠ48例，CINⅡ30例，CINⅢ38例，宫颈癌20例。对照组年龄33～78岁，平均(56.48±6.50)岁。两组临床资料保持同质性。研究组根据组织病理学检查分为C组(宫颈炎+CINⅠ，n=112)、D组(CINⅡ～Ⅲ，n=68)、E组(宫颈癌，n=20)，且三组临床资料保持同质性。纳入标准：研究组符合：①确诊为HPV感染；②存在宫颈疾病；③资料完整；对照组符合：①体检各项检查无异常；②资料完整。排除标准：①合并严重心、肝、肾等重要脏器疾病；②近期出现感染性疾病；③长期采用皮质类固醇激素或免疫抑制剂治疗；④检测前2周内使用过局部抗病毒药物或系统抗病毒药物；⑤妊娠、哺乳期妇女。

1.2方法

1.2.1HPV分型检测：月经干净后3～5 d开始取样，取样前3 d避免性生活。取样时，以专用宫腔采样刷，收取宫颈口、宫颈上皮脱落细胞，置入含专用细胞保存液的取样瓶内，及时送检。采用罗氏cobas 4800全自动分析仪及21种HPV分型检测试剂盒进行检测，检测原理为PCR反向点杂交技术。其中，高危型含16、18、31、33等15种，低危型含6、11、42、43等6种。研究组根据监测结果分为A组(高危型NPV感染并宫颈病变，n=94)、B组(低危型NPV感染并宫颈病变，n=106)。

1.2.2外周血T细胞亚群检测：抽取2 ml清晨空腹静脉血，无需冻存，直接送检。将血液标本直接与抗体混匀，室温下避光孵育，持续20 min；加入红细胞裂解液，室温下避光孵育，持续10 min。2 000 r/min离心，持续10 min，弃上清液。以PBS洗液清洗细胞，重悬，上机检测。外周血T细胞亚群以美国BD公司的FACSCanto II型流式细胞仪检测，试剂盒购自德国Partec 公司。检测指标包括CD3+、CD4+、CD8+，并计算CD4+/ CD8+。

1.3观察指标：观察研究组与对照组、研究组中A组、B组、C组、D组与E组检测结果。

1.4统计学分析：所得数据以SPSS20.0统计学软件分析。CD3+、CD4+细胞计数等计量资料以均数±标准差表示，以t检验。性别等计数资料样本容量n>40,理论频数T>5,用直接χ2检验。P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

研究组CD3+、CD4+、CD4+/ CD8+均低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)，CD8+高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。研究组中，A组CD3+、CD4+、CD4+/ CD8+均低于B组，差异有统计学意义(P<0.05)，CD8+高于B组，差异有统计学意义(P<0.05)。E组CD3+、CD4+、CD4+/ CD8+均低于C组、D组，且D组低于C组，差异有统计学意义(P<0.05)；E组CD8+细胞计数高于C组、D组，且D组高于C组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1各组外周血T细胞亚群检测结果对比

组别例数CD3+(%)CD4+(%)CD8+(%)CD4+/ CD8+研究组20062.63±7.1835.08±3.5525.84±2.111.58±0.15A组9459.02±7.25②32.21±4.05②28.68±2.27②1.35±0.16②B组10666.24±7.1237.95±3.9023.00±2.571.80±0.14C组11268.10±8.00③37.94±3.70③23.01±2.01③1.82±0.15③D组6864.02±7.96③33.02±5.50③26.02±2.00③④1.33±0.25③E组2058.96±6.9929.30±3.9629.00±2.061.29±0.11对照组20069.90±5.42①40.24±3.70①21.22±2.40①1.89±0.18①

注：与研究组比较，①P<0.05；与B组比较，②P<0.05;与E组比较，③P<0.05；与C组比较，④P<0.05

3 讨论

宫颈癌是一种常见妇科恶性肿瘤，高危因素较多，包括免疫力下降、多孕、多产、不良性行为、HPV感染等[5-6]。HPV属于无包膜小型DNA病毒。多数宫颈癌患者存在高危型HPV感染，但并非所有HPV感染患者均可进展为宫颈癌。而且，宫颈癌发生与发展过程中，除HPV感染外，机体免疫功能变化也具有临床意义[7]。

T淋巴细胞是免疫应答一个重要部分，可经由体液免疫、细胞免疫等途径，有效杀灭病原体。CD4+和CD8+是T淋巴细胞常见亚群。CD4+提升极易诱发超敏反应，引发自身免疫性疾病；而过度下降会影响免疫功能，导致感染等疾病发生风险提升。CD8+具有直接杀伤性，表达提升可引发严重免疫紊乱，降低则会导致出现过度免疫反应。故两者比例处于正常水平时，才能维持免疫系统平衡，发挥抗肿瘤作用。而一旦机体出现宫颈病变，其外周血T淋巴细胞亚群数量会出现变化，且随着病情加重，可能引发细胞免疫系统失衡现象，导致免疫监视功能削弱或丧失。肿瘤筛查中检测T淋巴细胞亚群，可为辅助检查、预后评估等提供依据[8]。

本次研究重点调查了HPV感染宫颈疾病患者不同HPV分型、病理类型下T淋巴细胞亚群表达。结果发现，研究组CD3+、CD4+、CD4+/ CD8+较对照组低，且CD8+较对照组高。可见与健康人相比，HPV感染并宫颈病变患者存在T淋巴细胞亚群异常表达。而且，高危型HPV感染患者CD3+、CD4+、CD4+/ CD8+较低危型低，且CD8+较低危型高。唐玲等同样证实，高危型HPV感染并宫颈病变患CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均低于低危型，CD8+高于低危型[9]，与此相符。考虑是因高危HPV感染可影响机体免疫系统，逃避免疫监测，导致免疫功能处于相对较差状态。而且，随HPV感染并宫颈疾病严重程度的增加，其CD3+、CD4+、CD4+/ CD8+逐渐降低，CD8+逐渐增高，与杨晶等结果[10]相符。提示机体免疫功能下降、免疫功能紊乱，在宫颈病变发生、发展中发挥重要作用。

综上所述，HPV感染在宫颈病变发生、发展中发挥重要作用，且影响机制可能是细胞免疫功能下降，逃避免疫监测，刺激生殖道，促进宫颈疾病发生、发展，需引起高度关注。