雷燕妮,张小斌

(1.商洛学院 生物医药与食品工程学院,陕西 商洛 726000；2.商洛学院 健康管理学院、中国中医科学院商洛中药材GAP科研工程中心,陕西 商洛 726000)

伴随着现代化生活的步伐，人们心脑血管疾病的发病急剧攀升。故预防及治疗心脑血管疾病的药品被广泛关注，其中黄酮类化合物是治疗该类疾病的代表药物。芦丁作为槐树花蕾槐米的重要组成成分，其功能主要包括抗菌作用和止血作用[1]，其对紫外线的吸收功能，让它作为天然防晒剂而被广泛应用[2，3]。

芦丁的维生素P样具备改善毛细血管的透通性，不仅拥有一定抗过敏和抗炎性，而且还可以防范血小板积聚等功能[4]。目前临床上芦丁广泛应用于高血压病的防治，以及部分出血性疾病，并且对于糖尿病及并发病症的预防和治疗也有应用[5]。总之，芦丁开发潜力巨大，它被广泛的用于预治心脑血管病和高血压、糖尿病等疾病，芦丁需求量每日剧增，原料供不应求，原料短缺，而陕西商洛为槐花、槐米的主要生产区，面对紧张的供应需求，本实验的研究为进一步发掘槐树其它部位芦丁的含量，扩大芦丁药源，扩大槐树其他部位的利用率提供理论依据。

1 材料与仪器

1.1 实验材料

采集地点：秦岭南坡槐树(国槐)；

采集时间：槐米：4.10-4.28；

槐花、花梗：4.29-5.15；

槐角：9.10-10.20。

1.2 实验试剂

芦丁对照品(石家庄启迪科技有限公司，批号100080-201408,含量92.8%)，甲醇为分析纯，色谱纯甲醇，纯净水，硼酸，冰醋酸等。

1.3 实验仪器

MS220电子天平(Radwag)；HH-M6电热恒温水浴锅(上海赫田科学仪器有限公司)；高效液相色谱仪包括LC-20AT泵、SPD-20A检测器 (日本岛津制作所)；SHB-IIIG台式循环水式多用真空泵(郑州长城)；KQ2200系列台式超声波清洗器(上海精密仪器有限公司)；移液枪，移液管，吸液球，容量瓶等。

2 实验方法

2.1 样品制备

将采集的不同部位槐米、槐花、槐花花梗、槐角晾干；60℃恒温箱保存6 h；称取上述干燥原料各100 g，并将其进行粉碎，过筛(3号50目)，编号备用。

2.2 提取方法考察

通过芦丁性质，对诸多提取方法综合考察，结果表明超声法效果显著[6，7]。

超声法主要是利用超声波的空化作用[8]，它是通过固有频率的超声波使液体中大小尺寸合适的气泡共振，将细胞壁振破，从而使有效成分分离。

2.3 线性关系考察

重在考察被测组分浓度与峰面积间的线性范围。准确称取60摄氏度下干燥的芦丁5.0 mg，并给其加入25 mL的70%甲醇，加水至50 mL，其浓度为100 ug·mL-1。准确吸取1.0 、2.0、3.0、4.0、5.0 μL分别置于10 mL量瓶中，加入甲醇，使芦丁含量分别为10、20、30、40、50 ug·mL-1；按上述色谱条件测定，纵坐标和横坐标分别为峰面积、对照品浓度，进行回归，并计算出曲线方程和相关系数。

结果：曲线方程为y=4 981.2x+5 243.5，相关系数R=0.9989；表明芦丁在(10 ～50 ug·mL-1)的浓度间与峰面积线性关系良好。

表1 标准品配制浓度与峰面积

2.4 精密度考察

进行重现性实验。精密吸取浓度为30 μg·mL-1芦丁标准溶液10 μL进行液相色谱测定，重复进样5次，记录其峰面积，并计算RSD%(相对标准偏差)。

结果：芦丁峰面积平均积分值为：153 769.5，RSD为2.2%，表明精密度良好。

表2 精密度测试结果(n=5)

2.5 样品中芦丁含量测定

参考相关文献资料[9，10]，笔者对槐树上槐米、槐花、槐花花梗、槐角等不同部位的芦丁用HLPC，并分别对其内在含量进行相应的测定。

2.5.1 色谱条件与系统适应性 色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-1%冰醋酸(32∶68)为流动相；检测波长为257 nm；柱温为室温；流速：1.0 mL·min-1;进样量：10 uL。

2.5.2 供试品溶液配制 精密称取槐花、槐米、槐角、花梗各7.5 g(各6份)。

将硼酸0.08 g置于150 mL的三角瓶中，加入70%甲醇30 mL,并给予超声波提取，得到滤液；将滤渣再次超声提取两次，将这三次的滤液定容至100 mL。精密量取1 mL于25 mL量瓶中，加水至刻度，得到0.3 mg·mL-1的供试品溶液，备用。

2.5.3 测定法 针对对照和供试品溶液各10 μl进行吸取，并将其注入液相色谱仪进行测定，对两者在溶液中芦丁的峰面积进行详细记录，并根据以下公式对试品溶液中芦丁的含量进行计算：

式中：供试品峰面积为AX；

供试品深度为CX；

对照品的峰面积为AR为；

对照品的浓度为CR；

稀释倍数为S；

称样量为W。

3 结果与分析

依据以上设置条件和方法，分别测试槐树各个不同部位中芦丁的含量，重复3次，分别计算平均值，结果见表1、图1、图2、图3、图4、图5。

表1 不同部位芦丁的浓度、峰面积、含量

图1 芦丁对照品色谱

图2槐米中芦丁含量色谱

图3 槐花中芦丁含量色谱

图4 花梗中芦丁含量色谱

图5槐角中芦丁含量色谱

通过对表1、图1、图2、图3、图4、图5的结果进行综合分析可知在相同条件下，对采集不同时期槐树不同部位的芦丁进行提取并测定含量，其含量从高到低依次为：槐米(16.48%)>槐花(13.06%)>槐花梗(7.83%)>槐角(1.99%)，其中槐米中芦丁含量16.48%为最高。依据实验结果分析槐树四种不同部位的芦丁含量的不同，可能与产地种植条件、存放时间、干燥方法，以及该品种类型、采集期等相关因素，有着密切联系。

4 讨论

芦丁在我国主要以槐米的形式提取，需求量极大，约1 000 t·a-1，国际上则以法国、比利时为消费大国，需求量在500 t左右[11]，而槐米的资源仍不充分，很难满足人类需要，故急需寻求更多增加芦丁产量的方法，缓解供需紧张，可见，加大心血管药物的来源就显得尤为重要。

采用超声波提取法对槐树上槐米、槐花、槐花花梗、槐角等不同部位的芦丁进行提取，用HLPC对其含量分别进行测定。结果表明其含量分别为：槐米16.48%，槐花13.06%，槐角1.99%，槐花梗7.83%。从各部位含量以及与生物总量的关系综合考虑，以采集槐米提取芦丁为好，如果采集时间已过，亦可采集槐花、花梗以扩大药源。过去药农采收槐米或槐花时，常用的方法是剪掉槐米或槐花的整个花序，干燥，它的花蕾就会脱落，花梗弃去不用，通过笔者试验，测出花梗中芦丁含量为7.8%，而且总重量可以达到槐米的3倍，因此今后槐花采集加工无需剪掉花梗直接采摘，工厂无特殊要求可直接带花梗提取芦丁，既节省人力又节约了资源，变废为宝。