河南省新乡市食品药品检验所（453000）常海莹

河南省新乡医学院药学院（453000）马伟伟

盐酸氟桂利嗪为选择性钙拮抗剂，可阻滞过量的钙离子跨膜进入细胞内，防止细胞内钙负荷过量。也可防止缺血缺氧时大量钙进入神经元，改善脑微循环及神经元代谢，抑制脑血管痉挛、血小板凝聚及血液粘滞度增高等，此外还有细胸胞膜稳定作用。本品脂溶性高，易透过血脑屏障。临床上主要用于脑供血不足，椎动脉缺血，脑血栓形成后等，收载于《中国药典》2015年版二部[1]。测量不确定度是与测量结果关联的参数，用于表征合理赋予被测量值的分散性，是判定测量结果可信的依据，也代表一个实验室结果可信性、可比性和可接受性的重要指标。通过对药品检测方法中的测量不确定度的分析评定为结果的准确性和可靠性提供了保证。本文参考我国国家计量技术规定最新版JJF1059.1_2012《测量不确定度评定与表示》[2]，并查看相关书籍及文献，对盐酸氟桂利嗪胶囊含量测定进行不确定度的评定，找出影响因素，反映测量结果的准确性和置信度[3][4]。

1 材料与方法

1.1 仪器 岛津高效液相色谱仪LC-20AT；CP225D型电子天平（北京赛多利斯公司，d=0.01mg）；AE100S型电子天平（瑞士梅特勒公司，d=0.1mg）。

1.2 药品及试剂 盐酸氟桂利嗪胶囊（吉林省七星山药业有限公司，批号20171002，规格5mg）；盐酸氟桂利嗪对照品（中国食品药品鉴定研究院，批号100844-201803）。甲醇（色谱纯）其他试剂为分析纯，水为纯化水。

1.3 溶液的配制

1.3.1 供试品溶液 取盐酸氟桂利嗪胶囊20粒，精密称定，取装量项下内容物，混合均匀，精密称取细粉适量（约相当于氟桂利嗪10mg），0.2478g和0.2468g置100ml容量瓶中，加乙醇10ml，振摇使盐酸氟桂利嗪溶解，加盐酸溶液（取稀盐酸24ml加水至1000ml）稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取5ml置50ml容量瓶中加上述盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，得供试品溶液。

1.3.2 对照品溶液 精密称取氟桂利嗪对照品12.85mg和12.88mg，分别置100ml容量瓶中，加乙醇10ml，振摇使溶解，加上述盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml置10ml容量瓶中加上述盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，即得。

1.4 HPLC法测定盐酸氟桂利嗪胶囊含量 取“1.3”项下配制的供试品溶液及对照品溶液，在色谱条件（C18，4.6mm×250mm，5μm色谱柱），以甲醇-磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钾1.36g，加水溶解并稀释成1000ml加三乙胺4ml，用磷酸调节pH值至3.5）（75∶25）为流动相；检测波长为253nm，柱温30.0℃，流速1.0ml，取20μL注入色谱仪，记录色谱图。

1.5 盐酸氟桂利嗪胶囊标示含量计算的数学模型 根据《中国药典》2015年版四部中高效液相色谱法计算方法及药品分析过程，得公式：y：测得含盐酸氟桂利嗪胶囊按桂利嗪计算为标示量的百分含量（%），AS：供试品平均峰面积；Ar：对照品平均峰面积；m：供试品20粒总质量（g），mS：供试品称重（g），mr：对照品称重（mg），DS：供试品稀释倍数；Dr：对照品稀释倍数；P：对照品纯度；5样品的规格（mg）。

1.6 相对标准不确定度(urel)的评定 根据文献对测量不确定度的来源（AS、Ar、DS、Dr、P、mS、mr和m）进行评定。

2 结果

2.1 对照品称量的不确定度

2.1.1 天平称量重复性不确定度[u(mr)1]实验所用电子天平（d=0.01mg）的重复性误差为0.05mg(见鉴定证书)，按矩形分布[2]（取包含因子计算：=2.89×10-2mg。

2.1.2 天平校准的测量不确定度[u(mr)2]所用电子天平的鉴定证书给出的称量范围的天平示值误差为-0.01mg，按矩形分布[2]（取包含因子计算：=5.77×10-3mg。

2.1.3 对照品称量的urel因称量为减重法，即2次称量均是相对独立的，每一次的称量都会受天平校准带来的不确定度影响，故对照品称量的urel分别为：urel(mr1)

2.2 对照品纯度的urel盐酸氟桂利嗪对照品由中国食品药品检定研究院提供，纯度100.0%，属于B类测量不确定度，故假定其分散区间的半宽度为0.05%，按矩形分布[2]（取包含因子计算：urel(p)=u(p)/ 1 00. 0 % = 22..89×10-4。

2.3 供试品称量的不确定度

2.3.1 天平称量重复性不确定度[u(ms)1]实验所用电子天平（d=0.1mg）的重复性误差为1.0mg(见鉴定证书)，按矩形分布[2]（取包含因子）计算：=0.577mg。

2.3.2 天平校准的测量不确定度[u(ms)2]所用电子天平的鉴定证书给出的示值误差为-0.1mg，按矩形分布[2]（取包含因子计算：

2.3.3 供试品总质量urel(m)20粒胶囊内容物重量（m=2.5840g）的urel(m)为urel(m)

2.3.4 供试品称量的urel(ms)每份供试品称重的urel分别为：

2.4 对照品稀释体积的不确定度

2.4.1 校准 实验中用到A级100ml容量瓶，允差为0.10ml。A级10ml容量瓶，允差为0.02ml。A级1ml移液管，允差为0.007ml。按三角分布（取包含因子计算：

2.4.2 温度 因水的膨胀系数（2.1×10-4.℃-1）大于玻璃的膨胀系数，因此可忽略温度对容器容积的影响。试验是溶液和量瓶的温度差异变化为3℃。按矩形分布[2]（取包含因子计算：u(vr2)1

2.4.3 对照品稀释体积的urel(Dr)urel(Dr1)

2.5 供试品稀释体积的不确定度

2.5.1 校准 实验中用到A级100ml容量瓶及50ml容量瓶和A级5ml单标线移液管，容量允差分别0.10ml为、0.05ml和0.015ml，均按三角分布（取包含因子计算：ml。

2.5.2 温度 按“2.4.2”项下评定：u(vs1)1

2.5.3 供试品稀释体积urel(Ds)urel(DS1)

2.6 对照品溶液色谱峰面积的不确定度

2.6.1urel(Ar1)对照品溶液1测量5次得峰面积；698780、697790、697860、697752、698020，平均峰面积按贝赛尔公式计算：=6.10×10-4。

2.6.2urel(Ar2)对照品溶液2测量2次得峰面积；699770、699790，平均峰面积=699780，按贝赛尔公式计算：urel(Ar2)

2.6.3urel(Ar)对照品溶液色谱峰面积引起的=6.10×10-4。

2.7 供试品溶液色谱峰面积引起的不确定度 取供试品溶液1和供试品溶液2分别进样2次，峰面积（A1和A2）分别为593960、594460和592850、593020，平均分别为594210和592940。采用极差法[2]评定，即R1＝500，R2＝170，C＝1.13极差系数，urel(As1)=R1/CA1=7.45×10-4；urel(As2)=R2/CA2=2.54×10-4；=3.73×10-4。

2.9 测得结果的合成标准不确定度uc(y)=99.7%×1.03×10-2=0.8%。

2.10 扩展不确定度u(y)=kuc(y)，本实验取包含因子K＝2（置信概率为95%），扩展不确定度为u(y)=1.6%。含量测定结果可表示为，即（96.7±1.6）%，K＝2。

3 讨论

检验结果的准确性和可靠性直接关系到药品的质量，实验中人员、仪器、环境等因素都会对测量结果的不确定度产生影响。因此要对实验数据、方法进行不确定度评定。由上述不确定度的分析评定结果可知，称量是定量分析中不确定度的最大影响因素，应选择高精密度的天平，尽量提高对照品和供试品的称样量。其次是体积的影响，选用干燥洁净的实验器具，减少操作步骤，规范人员操作，是降低不确定度分量值的关键。从高效液相色谱仪峰面积的重复性未产生较大的不确定度分量可知定期做好液相色谱仪的计量检定和期间核查工作尤为重要，使液相色谱仪处于良好的工作状态。