李钦青， 柴金苗， 董虹玲， 贺文彬， 李秀英

（山西中医药大学，山西 晋中030619）

心脑康胶囊被2015 年版《中国药典》 一部收录，由丹参、赤芍、九节菖蒲、地龙、川芎、红花、远志（蜜炙）、牛膝、鹿心粉、酸枣仁（炒）、制何首乌、枸杞子、葛根、泽泻、郁金、甘草16 味药材组成，具有活血化瘀、通窍止痛、扩张血管、增加冠状动脉血流量的功效［1］，可用于治疗冠心病、心绞痛、动脉硬化等症状，并能降低血液浓度，抑制血小板聚集。前期有对心脑康胶囊中葛根素、芍药苷含有量进行测定的文献，但尚未涉及甘草酸铵等多成分含有量同时测定。因此，本实验采用HPLC 法同时测定心脑康胶囊中葛根素、芍药苷、甘草酸铵的含有量，为全面控制该制剂质量提供参考依据。

1 材料

心脑康胶囊（批号161108、161101、160901、160702）购自山西仁源堂药业有限公司。葛根素 （批号110752-201514）、芍药苷（批号110736-201640）、甘草酸铵（批号110731-201418） 对照品购自中国食品药品检定研究院。Waters 2695 高效液相色谱仪（美国Waters 公司）；FB224、AUW120D 电子天平（日本岛津公司）；ABB5-S 电子天平［十万分之一，赛多利斯科学仪器（北京） 有限公司］；KQ-500E 超声波清洗器 （昆山市超声仪器有限公司）；GZX-9146MBE 电热鼓风干燥箱（上海博迅医疗生物仪器股份有限公司）。甲醇为色谱纯；其他试剂均为分析纯；水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 Waters C18色谱柱 （4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相甲醇（A） -水（含0.2%磷酸） （B），梯度洗脱（0～20 min，15%→35%A；20～35 min，35%→4%A；35～40 min，4%→65%A；40～55 min，65%A；55～70 min，65%→72%A；70～71 min，72%→80%A；71～80 min，80%A；80～81 min，80%→15%A；81～90 min，15%A）；检测波长241 nm；体积流量1.0 mL／min；柱温35 ℃；进样量10 μL。色谱图见图1。

2.2 对照品溶液制备 精密称取葛根素、芍药苷、甘草酸铵对照品适量，甲醇制成贮备液（三者质量浓度分别为123.6、241.6、124.8 μg／mL），分别精密量取1.0 mL，置于5 mL 量瓶中，甲醇定容至刻度，即得（三者质量浓度分别为24.72、48.32、24.96 μg／mL）。

2.3 供试品溶液制备 取胶囊（批号161108） 10 粒，精密称定内容物约0.4 g，置于具塞锥形瓶中，加50%乙醇50 mL，称定质量，超声（250 W、40 kHz） 30 min，放冷至室温，补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 阴性样品溶液的制备 根据生产工艺，分别制备缺葛根，赤芍， 甘草及葛根、 赤芍、 甘草的阴性样品， 按“2.3” 项下方法制备，即得。

2.5 线性关系考察 精密量取“2.2” 项下对照品贮备液1.0、3.0、5.0、7.0、9.0、11.0、13.0、15.0、17.0 mL，置于50 mL 量瓶中，甲醇定容至刻度，摇匀，在“2.1” 项色谱条件下进样10 μL 测定。以质量浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y） 进行回归，得葛根素、芍药苷、甘草酸铵方程分别为Y＝31 488X-3 100.7（r ＝0.999 8）、Y ＝6 206.2X＋1 001（r ＝0.999 9）、Y ＝3 599.7X-204.66（r ＝0.999 8）， 分 别 在2.47 ～41.99、4.83 ～82.14、 2.49 ～42.43 μg／mL范围内线性关系良好。

图1 各成分HPLC 色谱图

2.6 精密度试验 精密吸取 “2.2” 项下对照品溶液10 μL，在“2.1” 项色谱条件下进样测定6 次，测得葛根素、芍药苷、甘草酸铵峰面积RSD 分别为0.49%、0.44%、0.42%，表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性试验 取“2.3” 项下供试品溶液，于0、1、2、4、8、16 h 在“2.1” 项色谱条件下进样测定，测得葛根素、芍药苷、 甘草酸铵峰面积RSD 分别为0.75%、1.57%、0.67%，表明溶液在16 h 内稳定性良好。

2.8 重复性试验 取同1 批胶囊 （批号161108），按“2.3” 项下方法平行制备6 份供试品溶液，在“2.1” 项色谱条件下进样测定，测得葛根素、芍药苷、甘草酸铵含有量RSD 分别为1.07%、1.00%、1.36%，表明该方法重复性良好。

2.9 加样回收率试验 精密称取含有量已知的50 粒胶囊（批号161108）内容物6 份，每份约0.2 g，置于具塞锥形瓶中，加入葛根素（425.6 μg／mL）、芍药苷（952.8 μg／mL）、甘草酸铵（132.3 μg／mL） 对照品溶液各1 mL，按“2.3”项下方法平行制备6 份供试品溶液，在“2.1” 项色谱条件下进样测定，计算回收率，结果见表1。

表1 各成分加样回收率试验结果（n＝6）

2.10 含有量测定 取3 批样品，按“2.3” 项下方法制备供试品溶液，在“2.1” 项色谱条件下进样测定3 次，计算含有量，结果见表2。

表2 各成分含有量测定结果（n＝3）

3 讨论

3.1 供试品溶液制备方法筛选 本实验采用甲醇、50%乙醇［2-5］进行提取，发现后者提取率更高。采用回流、超声进行提取，发现两者对提取率无明显影响，最终选用提取效率更高、操作更简便的后者。

3.2 流动相筛选 本实验采用梯度洗脱，可用于节省分析时间［6-9］，分别以甲醇-水、乙腈-水为流动相进行梯度洗脱，并加入磷酸作为改性剂，发现以前者为流动相时分离效果较好。然后，比较了甲醇-水（0.1%乙酸）、甲醇-水（0.2%磷酸），发现后者能很好地改善峰形，并且保留时间及最终峰形均可达到理想效果。

3.3 检测波长筛选 本实验在200～500 nm 波长范围内进行紫外扫描［10］，发现葛根素、芍药苷、甘草酸铵分别在250、230、237 nm 附近吸收明显。由于三者在241 nm 附近均有较强吸收，而且响应值大，杂质峰小，峰形好，干扰少，故选择其作为检测波长。

3.4 指标成分筛选 根据心脑康胶囊药味组成及所含成分，本实验曾选择丹参中丹酚酸B、赤芍中芍药苷、葛根中葛根素、甘草中甘草酸铵进行研究，发现葛根素、芍药苷、甘草酸铵分离度好，阴性无干扰，故以三者为指标成分。

丹参作为方中君药，其所含的丹酚酸B 含有量较高，但本实验发现该成分几乎检测不出来，其原因可能是心脑康胶囊在制备工艺过程中丹参经过6 h 水提与浓缩过程，丹酚酸B 被破坏，含有量大大降低。赤芍对心脏的保护机制主要有避免氧化损伤、调节凋亡基因与促凋亡基因的表达、维持细胞内外环境平衡等作用，其所含的芍药苷具有扩展血管保护脑缺血、抗血栓形成等活性［11-12］，也是《中国药典》 中心脑康胶囊含有量测定成分。葛根素不仅可扩张血管，还能明显缓解头痛症状，促进微循环，降低心肌氧耗，改善心肌收缩功能，目前已有相应注射剂广泛用于治疗冠心病［13-16］。甘草功效益气补中、祛痰止咳、缓急止痛、缓和药性、清热解毒，具有保护心血管、抗心率失常的作用，其所含的甘草酸铵可用于抗炎［17］。同时， 《中国药典》 中葛根、赤芍、甘草含有量测定成分分别为葛根素、芍药苷、甘草酸铵，因此，本实验最终选择三者作为心脑康胶囊指标成分。