朱勤　陈忆凤　颜婕　孙伟　祝海梅

摘 要 通过对紫花苜蓿基础成分进行测定，发现其可作为饲料蛋白源原料，采用酸性、碱性和中性蛋白酶、鱼体内源酶酶测定紫花苜蓿消化率，发现其能够被很好地消化，可初步确定紫花苜蓿可作为水产饲料的原料。结果表明，饲料中添加适量的苜蓿草粉对提高动物的免疫机能、繁殖性能都有促进作用。

关键词 紫花苜蓿;营养成分;消化率;胰蛋白酶

中图分类号：S823.5 文献标志码：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2019.12.003

紫花苜蓿又名紫苜蓿，是豆科植物家族中的一员，是世界上分布最广、栽培历史最古老的豆科牧草。随着我国牧草产业化及对草产品需求的快速增加，紫花苜蓿的栽培面积呈迅速扩大之势[1-2]，且其氨基酸种类齐全且较平衡，是最具经济价值的牧草品种之一。并且其适口性好，营养丰富，有良好的饲喂效果，因此在养殖中占有重要的地位，可作为优良的饲草推动渔牧业的发展[3]。本研究在测定紫花苜蓿的主要成分含量的基础上，测定紫花苜蓿在水产动物中的消化情况，以探索其作为水产饲料原料的应用情况。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

紫花苜蓿草来自内蒙古阿鲁科尔沁旗惠农草业有限公司;硫酸、混合指示剂、氢氧化钠等均为分析纯购自国药集团化学试剂有限公司;胰蛋白酶、碱性蛋白酶购自南宁庞博有限公司;胃蛋白酶购自Sigma有限公司。

1.2 主要仪器设备

HH-2数显恒温水浴振荡器，产自国华公司;自动定氮仪，产自上海纤检仪器有限公司;电子分析天平、pH计，产自梅特勒—托利多仪器上海有限公司。

1.3 试验方法

1.3.1 基础成分测定

粗灰分测定参照GB/T6438-2007中的方法，水分测定参照GB/T6435-2014中的方法，粗脂肪测定参照GB/T6433-2006中的方法，粗纤维测定参照GB/T6434-2006中的方法，粗纤维测定参照GB/T6432-2018中的方法。

1.3.2 草鱼内脏酶酶液的制取

解剖鲜活的草鱼，取其肠道部分，加入1∶30磷酸盐缓冲溶液，然后匀浆器匀浆后，过滤，去除结缔组织，滤液放入冰箱冷冻保藏。

1.3.3 鱿鱼内脏酶的制取

将新鲜的鱿鱼内脏，加入1∶20的Tris-盐酸缓冲溶液，然后匀浆器匀浆后，过滤，去除结缔组织，滤液放入冰箱冷冻保藏。

1.3.4 蛋白质消化率的测定

取试样2 g，分别加入一定量的胰蛋白酶、碱性蛋白酶、胃蛋白酶酶液和制备的鱿鱼内脏酶和草鱼内脏酶酶液，在40 ℃恒温振荡酶解6 h，将酶解液过滤，并用丙酮洗涤2次;将残渣无损地移入凯氏烧瓶中，105 ℃烘箱内烘干，测定粗蛋白含量，同时称取烘干后的样品（精确至0.000 2 g）测定未酶解样品蛋白含量。

2 结果与分析

2.1 紫花苜蓿基础成分的测定

每个指标的测定均做两组试验，每组三个平行，得到紫花苜蓿的基础成分如表1所示。由结果可知，紫花苜蓿的粗蛋白含量为20.37%，粗纤维含量为33.62%。蛋白质是鱼类生长的主要营养物质，鱼粉一直以来是重要的蛋白源提供者，但因为其短缺、价格高涨的问题，急需寻找可替代它的原料[4]。紫花苜蓿粗蛋白含量高，转化效价高，是良好的蛋白源提供者。

2.2 不同的酶在紫花苜蓿中消化率的测定

为了研究紫花苜蓿蛋白是否适合水产动物肠道的吸收利用，以胰蛋白酶、碱性蛋白酶、胃蛋白酶、草鱼及鱿鱼内脏酶进行蛋白消化的离体试验，得到以不同的酶酶解后蛋白消化率，结果如图1所示。

由图1可知，草鱼内脏酶酶解紫花苜蓿的消化率为37.42%，鱿鱼内脏酶酶解紫花苜蓿的消化率为40.37%，与胰蛋白酶的结果接近，均优于碱性蛋白酶和酸性蛋白酶。但由于是离体试验且酶活力不稳定，实际消化率应偏高于本试验结果。何云等[5]发现，在黄河鲤鱼饲粮中添加10%苜蓿草粉能显著提高其消化酶活性及肠绒毛高度。此外研究发现，在鱼饲料中添加适当的苜蓿草粉有利于提高鱼的生长性能，改善外观体型[6]。因此，紫花苜蓿所含蛋白能被食草类和杂食鱼类肠道消化利用，可作为水产饲料原料。

2.3 不同饲料原料的蛋白消化率

在饲料原料行业中，豆粕是饲料生产中最优质的蛋白原料，菜粕是水产饲料使用量最大的原料，玉米蛋白饲料也是使用普遍的蛋白原料之一。本试验进行了对比测定，以胰蛋白酶作为消化酶以最适宜的条件分别测定不同原料的消化率，结果如图2所示。

由结果可知，在相同加酶量条件下，豆粕的蛋白质消化率最高，达87.1%;其次是紫花苜蓿74.84%;最后是玉米蛋白饲料53.07%。由此可看出，紫花苜蓿具有良好的可消化性，可作为水产饲料原料。

3 结语

研究表明，饲料中添加适量的苜蓿草粉对提高动物的免疫机能、繁殖性能都有促进作用。目前，苜蓿草粉及其提取物在猪、牛、羊和兔等畜禽动物养殖方面已被广泛应用，且应用效果很好，但在水产动物方面，只有在草鱼、团头鲂鲤鱼等鱼类中有所研究[7-8]。本试验为进一步研究紫花苜蓿在水产饲料中的应用提供一定的理论数据。

参考文献：

[1] 张春梅，王成章，胡喜峰，等.紫花苜蓿的营养价值及应用研究进展[J].中国饲料，2005（1）：15-17.

[2] 王雪，李志萍，孙建军，等.中国苜蓿品种的选育与研究[J].草业科学，2014，31（3）：512-518.

[3] 王凤芝.紫花苜蓿的栽培技术及在养殖业中的应用[J].现代畜牧科技，2019（5）：26-27.

[4] 艾春香，陶青燕.鱼粉替代：鱼粉高价运行下水产配合饲料研发的技术对策[J].饲料工业，2013，34（10）：1-7.

[5] 何云，王成章，严学兵，等.苜蓿草粉对黄河鲤鱼消化生理指标的影响[J].草地学报，2010，18（1）：121-125，136.

[6] 李科云，龔福春，李大雄.鱼用优质高产饲草的引种与品比筛选试验报告[J].草业科学，1999（4）：54-60.

[7] 冯德庆，唐龙飞，黄秀声，等.优质牧草对提高草鱼品质的研究[J].水利渔业，2006（2）：81-82.

[8] 胡喜峰，王成章，张春梅，等.不同水平苜蓿草粉对团头鲂生长性能及肉品质的影响[J].西北农林科技大学学报（自然科学版），2005（11）：49-56.

（责任编辑：刘昀）