丁爱君等

摘  要：为比较来源不同厂家的重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗在哈伯德父母代肉种鸡上的应用效果，通过颈部皮下注射21日龄和50日龄的哈伯德父母代肉种鸡，免疫后1周、2周、3周采血并分别检测H5（Re-8）、H7（Re-1）的抗体滴度，同时比较其抗体消长规律。试验结果表明，不同厂家疫苗在H5亚型的免疫效果应答上存在差异显著，在加强免疫后的免疫应答也差异显著;在H7亚型的免疫应答上差异显著，加强免疫后免疫效果差异不显著。

关键词：禽流感H5;禽流感H7;灭活疫苗;抗体滴度;效果评估

许多养殖场在疫苗免疫方面有一些不妥行为，包括有的没有实验室检测疫苗免疫后的抗体滴度，有的未系统地对疫苗免疫应答进行有效地跟踪检测，有的使用了不合格疫苗产品，有的免疫程序设计不合理，导致许多养殖场疫苗免疫失败，使鸡群不能产生有效的抗体保护。近几年H5N1亚型禽流感病毒传播有扩散的趋势，2017年秋季H7N9禽流感疫苗作为新疫苗被批准使用，这些都需要通过实验室抗体滴度进行疫苗免疫效果评估。因着选择适宜的疫苗对家禽的安全生产具有重要意义，本试验选择了三个厂家的重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗进行试验，通过在21日龄首免和50日龄加强免疫，对禽流感疫苗进行免疫效果评估。本试验采集免疫后血清通过血凝抑制抗体水平评估来源不同厂家疫苗的免疫应答效果，并对抗体水平的消长规律进行分析。

1  试验材料

1.1  疫苗来源  三个厂家生产的疫苗：A厂家生产的重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗，批号2018092;B厂家生产的重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗，批号2018146;C厂家生产的重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗，批号2018029。

1.2  鸡群分组  试验鸡群随机分为三个组，每组一个重复。三组为A厂家组、B厂家组、C厂家组。疫苗免疫采取颈部皮下的注射方法接种，免疫剂量首免每羽0.3ml，加强免疫每羽0.5ml。试验鸡群21日龄进行首免，在免疫后1周、2周、3周分别采血;试验鸡群50日龄进行加强免疫，在免疫后1周、2周、3周分别采血。试验鸡群是来自同一种群的哈伯德父母代肉种鸡，在同一场区按照相同的饲养管理模式进行管理，每个舍的饲养规模为11000羽。其他疫苗按照常规免疫程序执行。

2  试验方法

2.1  方法  血凝和血凝抑制试验方法检测灭活疫苗免疫后的H5（Re-8）、H7（Re-1）的抗体滴度，参照GB/T14926.53-2001血凝试验、GB/T14926.54-2001血凝抑制试验执行。

2.2  血清采集  重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗在鸡群21日龄免疫，血清采集免疫后的1周（鸡群28日龄）、2周（鸡群35日龄）、3周（鸡群42日龄），加强免疫在鸡群50日龄免疫，血清采集免疫后的1周（鸡群57日龄）、2周（鸡群64日龄）、3周（鸡群71日龄）。每组按照40羽的采样数量随机抽样，翅静脉采血，标明组别、样品数、种鸡品种，待析出血清后及时分离血清冻存，最后一次采样结束后，同时对所有的抽样血清进行H5（Re-8）、H7（Re-1）的抗体滴度检测。

2.3  数据的统计分析  将测定的H5（Re-8）、H7（Re-1）抗体滴度的数据，用Microsoft Excel软件进行数据处理及作图，并用SPSS Statistics19.0數据统计分析软件中的单因素ANOVA分析处理。

3  试验结果及分析

3.1  H5（Re-8）抗体的测定结果  H5（Re-8）抗体在疫苗首免后1周（28日龄）时，B厂家组抗体滴度最高，A、B、C厂家三组间抗体滴度结果差异显著（P<0.05），首免后2周（35日龄）B厂家组抗体滴度最高，B厂家和C厂家抗体滴度结果差异不显著（P>0.05），A厂家和B、C厂家抗体滴度结果差异显著（P<0.05）;首免后3周（42日龄）B厂家组抗体滴度最高，A、B、C厂家三组抗体滴度结果差异显著（P<0.05）。H5（Re-8）抗体在相同厂家疫苗加强免疫后1周（57日龄）时，B厂家组抗体滴度最高，A厂家和C厂家抗体滴度结果差异不显著（P>0.05），B厂家和A、C厂家抗体滴度结果差异显著（P<0.05）;加强免疫后2周（64日龄）时，B厂家组抗体滴度最高，A厂家和B厂家抗体滴度结果差异显著（P<0.05），A、C厂家抗体滴度结果差异不显著（P>0.05）B、C厂家抗体滴度结果差异不显著（P>0.05）;加强免疫后3周（71日龄）时，B厂家组抗体滴度最高，滴度结果差异显著性同10周的抗体结果。H5亚型（Re-8）抗体的含量见表1。

从图1 H5亚型（Re-8）抗体滴度（Log2）消长规律可以明显地看出A、B、C厂家组三组抗体滴度的变化，疫苗首免后B厂家组免疫抗体最高，优于A、C厂家组，C厂家组免疫抗体高于A厂家组;加强免疫后B厂家组抗体滴度最高，优于A、C厂家组，C厂家组抗体滴度高于A厂家组。详见图1。

3.2  H7（Re-1）抗体的测定结果  H7（Re-1）抗体在疫苗首免后1周（28日龄）A厂家组抗体滴度最高，A、B、C厂家三组抗体滴度结果差异显著（P<0.05），首免后2周（35日龄）A厂家组抗体滴度最高，A厂家和B厂家抗体滴度结果差异不显著（P>0.05），B厂家和C厂家抗体滴度结果差异不显著（P>0.05），A厂家和C厂家抗体滴度结果差异显著（P<0.05）;首免后3周（42日龄）C厂家组抗体滴度最高，B厂家和C厂家抗体滴度结果差异不显著（P>0.05），A厂家和B、C厂家抗体滴度结果差异显著（P<0.05）。H7（Re-1）抗体在相同厂家疫苗加强免疫后1周（57日龄）C厂家组抗体滴度最高，A厂家和C厂家抗体滴度结果差异显著（P<0.05），A厂家和B厂家抗体滴度结果差异不显著（P>0.05），B厂家和C厂家抗体滴度结果差异不显著（P>0.05）;加强免疫后2周（64日龄）A、B厂家组相同抗体滴度最高，A、B、C厂家三组抗体滴度结果差异不显著（P>0.05）;加强免疫后3周（71日龄）B厂家组抗体滴度最高，A、B、C厂家三组抗体滴度结果差异不显著（P>0.05）。H7（Re-1）抗体的含量见表2。

从图2可以很明显的看出A、B、C厂家生产的疫苗的H7（Re-1）的抗体滴度（Log2）的消长规律，疫苗首免后A厂家的免疫应答最快，B厂家、C厂家组在免疫3周时稍高于A厂家;加强免疫后A、B、C厂家的抗体滴度曲线基本一致，见图2。

4  讨论和结论

4.1  讨论  为了解鸡群免疫不同厂家疫苗产生抗体滴度是否有差异，同时也为哈伯德父母代肉种鸡禽流感疫苗的选择提供科学依据，我们开展重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗免疫效果评估。因为不同厂家疫苗抗原含量、生产工艺、免疫佐剂以及保存运输等方面的原因，会导致疫苗质量会存在一些差异。不同品种的鸡群对疫苗的免疫应答也不同。因为试验结果对疫苗厂家的影响较大，免疫效果评价结果比较敏感，故用A、B、C来区分不同的疫苗厂家。此次试验是评估三个疫苗厂家生产的重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗在哈伯德父母代种鸡2次接种免疫后的综合免疫效果。免疫后H5亚型（Re-8）抗体滴度，疫苗首免后2周的抗体滴度≥4Log2符合免疫抗体保护标准。H5亚型（Re-8）抗体首免后B厂家组免疫抗体最高抗体滴度为8.23Log2，C厂家组次之，抗体滴度为7.10Log2，均高于A厂家组;加强免疫后B厂家组抗体滴度最高为11.68Log2;A、C厂家组在免疫后1周抗体水平基本一致，在免疫后2周C厂家组抗体滴度（10.87Log2）逐渐稍高于A厂家组的10.11Log2。免疫后H7（Re-1）抗体滴度，疫苗首免后2周的抗体≥6Log2，符合免疫抗体保护标准。疫苗首免后A厂家免疫应答最快，2周高达7.02Log2，在免疫3周时B厂家组的抗体滴度7.50Log2、C厂家组的7.63Log2均高于A厂家;在加强免疫后，A、B、C厂家的抗体滴度都达到11Log2，免疫抗体滴度基本一致。

试验结果显示：三个疫苗厂家的疫苗均能产生很好的免疫效果，达到疫苗免疫的保护要求。

4.2  结论  选择合适的疫苗并对疫苗的免疫效果进行评估尤其重要。定期开展禽流感的流行病学调查和疫苗的免疫效果评估具有重要的临床指導意义，有报道称免疫抗体高的鸡群对病毒感染的抵抗力更强，造成的产蛋率、死亡率影响较低。在易感季节，加强消毒防疫措施和生物安全措施能有效阻断病毒入侵，对提高机体免疫抗体滴度的整齐度和高度尤其重要。