刘泽平(通信作者)，钟福杭，蒋小英，汤晓晖

1 福建省龙岩市第二医院病理科 (福建龙岩 364000)；2 福建省上杭县医院病理科 (福建龙岩 364200)；3 福建省龙岩市第一医院病理科 (福建龙岩 364000)

细胞块技术已广泛应用于临床病理工作中，并能同时应用免疫组织化学及分子病理检测，能提高诊断的灵敏度及特异度。目前制作细胞块主要有试管包埋法、普通离心沉淀法、血清凝聚法及琼脂凝聚法等[1-4]，但若标本的细胞量较少则难以制作成组织块。本研究介绍一种操作简单、费用低，但制成的组织块细胞量较多的细胞块制作方法，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

收集2015年1月至2017年12月龙岩市第一医院、龙岩市第二医院病理科胸腹水样本共168例，要求样本细胞量较大，在制作常规细胞涂片后有剩余足量细胞量以便制成细胞块，同时有活检或手术标本并有明确诊断。样本中女87例,男81例,年龄35～86岁,平均 (59.6±5.9) 岁。本研究得到两医院伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1传统细胞病理学检查

(1)送检标本静置20～30 min；(2)弃上清液，取底部沉积物40 ml于离心管中，2 500 r/min离心5 min，弃上清液；(3)将所得细胞沉淀物与中性福尔马林按1∶2比例混匀，静置1～4 h后，以2 500 r/min离心5 min，弃上清液；(4)用棉签将部分标本单向、均匀地涂抹于载玻片上；(5)进行常规苏木精-伊红染色(Hematoxylin-Enosin staining，HE染色)，试剂均由珠海贝索生物技术有限公司提供，按试剂盒上流程操作。

1.2.2细胞块制备

(1)将1.2.1中所余标本的试管放置冷冻切片机冻台上(LECAI 德国，CM1520)，(温度：-18℃至-25℃，时间5～8 min)，使沉淀物形成冰块；(5)将试管放置80℃左右水中，时间3～4 min，让紧贴试管的冰块稍融化；(6)将试管倒置显微镜拭镜纸上，使细胞块与试管分离；(7)细胞块表面滴些冷冻切片胶水，用拭镜纸封包；(8)上述细胞块可按常规组织进行脱水、浸蜡、包埋、切片等处理制成细胞蜡块。

1.2.3染色方法

(1)常规HE染色(操作同1.2.1)；(2)免疫组化染色，用快捷免疫组化S-P法染色；二氨基联苯胺(DAB)及Maxvision试剂盒，二抗：广谱细胞角蛋白(Cytokeratin-Pan CK-Pan,鼠抗人单克隆抗体)、Ki-67(鼠抗人单克隆抗体)等均由迈新公司(福州)提供，并由主管病理技师操作以确保实验准确性。

1.3 显微镜阅片

均采用双盲法，由两名细胞病理学高年资主治医师同时阅片，并做出一致性诊断。依据《浆膜腔积液细胞病理学诊断》标准，诊断报告采用3级分类法，即找到恶性细胞(鳞状细胞癌、腺癌、小细胞未分化癌、大细胞未分化癌、腺鳞癌、癌型未定)为阳性，可疑恶性细胞为不确定性，及未找到恶性细胞为阴性。综合活检或手术标本常规病理为最终确诊结果。

1.4 统计学处理

采用SPSS21.0统计软件进行数据分析，计数资料以率表示，采用χ2检验， 等级资料采用秩和检验，P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 HE染色结果

采用上述方法制备细胞块，收集的细胞完整，不易碎，对细胞量较少的标本也能比传统方法收集较多量细胞；且成本低，操作简单。HE染色中细胞结构清晰，红染及蓝染染色鲜艳，细胞核、核染色质颗粒清楚,核膜清晰,均质深蓝染色,核仁明显呈紫红色,颜色鲜艳，对比性强，无背景着色；同时可以看到肿瘤组织结构，见图1。

2.2 免疫组织化学染色结果

抗体CK：癌细胞胞浆黄染颗粒定位准确，其他部位未见黄染颗粒(图2)。抗体Ki-67：肿瘤细胞胞核黄染颗粒定位准确，对比性较强，其他部位未见黄染颗粒(图3)。

图1 HE染色,x200图2 CK-Pan S-P法免疫组化染色x200图3 Ki-67 S-P法免疫组化染色x200

2.3 两种方法诊断情况比较

168例样经高年资主治医生诊断后，细胞块诊断情况优于传统细胞学，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 两种方法诊断情况比较(n %)

注：两种方法比较，χ2=91.17，P<0.05

3 讨论

细胞块方法最早于1896年由Bahrenburg创造[5]，目前我国临床病理工作中，制作细胞块的方法很多，且各有优点[1-4]。本研究所用方法由于冷冻前已将细胞充分用中性福尔马林固定，因此细胞冷冻不会破坏其酸碱性及丢失表面抗原，离心加冷冻提高了细胞收集率，且细胞保存良好，无皱缩和变性，苏木精把胞核染成蓝色,伊红把胞质染成红色，以及抗体定位准确及表达强度较高的免疫组织化学切片，最终能制出高质量HE染色[9]。168例样本通过本方法明显提高了阳性确诊率，减少了不确定(可疑)率；且极大的减少了误诊率，为临床继续治疗提供更无创的确诊方法。

细胞块比传统细胞学能作出更明确的细胞病理学诊断，该技术也是简单，安全，经济且可重复的[10]。细胞块为形态学提供了最佳环境，背景染色非常少，诊断结果最接近组织病理学诊断[11]。胸水或腹水中的恶性细胞几乎均是转移性肿瘤，间皮细胞引起的原发性恶性肿瘤并不常见。恶性细胞的及时诊断是癌症患者的重要预后指标[12]。恶性胸水是肺癌、乳腺癌和胃癌等晚期癌症的常见并发症和适应症。恶性腹水是由于卵巢癌、结肠癌、肝癌和胰腺癌导致的。因此，诊断胸水、腹水是否存在恶性细胞已被作为癌症的常规诊断程序。细胞块比传统细胞学更能突显肿瘤的组织结构，也有更多组织切片便于免疫组化及基因检测等。

由于诊断医师业务有待提高，导致细胞块存在个别误诊，因此本方法也得基于专业水平较高医生的前提下才能更有效开展。组织学检查虽为目前诊断的“金标准”，但取材较困难，费用较高。本方法操作简易，成本低，可操作性强。