红曲蜂胶片辅助降血脂功能的研究

2019-04-12黄彦通周丹英余琪

食品研究与开发 2019年8期

黄彦通，周丹英，余琪

（浙江省中药研究所有限公司，浙江杭州310023）

高血脂症是指人体脂质代谢障碍导致的血浆胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇等的异常现象，与心血管疾病、动脉粥样硬化的发生密切相关[1]。人群血清胆固醇水平的升高导致2010年～2030年期间我国心血管病事件约增加920万[2]。我国成人血脂异常水平和患病率与西方发达国家相比还处于较低水平，但比10年前有了较大升高，随着年龄增加有上升的趋势[3]。我国血脂异常总患病率为34 %，城乡差别不大，城市患病率为35.1 %，乡村为26.3%，男性患病率41.9%，高于女性患病率32.5%[4]。我国儿童青少年高胆固醇血症患病率也有明显升高，儿童青少年合并血脂异常总患病率为25.3 %，7 岁～18岁儿童青少年血脂异常总患病率（31.6 %）高于2岁～6 岁儿童（9.0%）[5]。对于高血脂症，临床治疗多使用降血脂药物，但药物具有一定的毒副作用，不适合长期服用，因此，开发既有营养价值又有降脂功效的保健食品是防治高脂血症的一个重要研究方向。本产品红曲蜂胶片是以红曲、蜂胶乙醇提取物为主要原料开发的保健食品。现代药理学研究表明，红曲、蜂胶均有良好的调节血脂作用[6-7]，而由蜂胶乙醇提取物、红曲粉为原料组合而成的具有降脂功效的保健食品还未见报道。因此，本文依照《关于印发抗氧化功能评价方法等9 个保健功能评价方法的通知》对红曲蜂胶片的功效性进行评价。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

红曲蜂胶片非定型粉末：浙江某生物科技有限公司，棕红色，由功能性红曲米粉与蜂胶乙醇提取物配合辅料制成，主要功效性成分为洛伐他汀和总黄酮，规格为0.5 g/片，每日两次，每次2 片。以每人60 kg 体重计算，折合剂量0.033 g/（kg·d）。

胆固醇测定试剂盒、甘油三酯测定试剂盒、高密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒、低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒：中生北控生物科技股份有限公司。

1.2 试验动物

雄性SD 大鼠，50只，体重180 g～220 g，无特定病原体，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，实验动物合格证号：SCXK（沪）2012-0002；实验动物维持饲料由浙江省实验动物中心提供；实验动物模型饲料由北京科奥协力饲料有限公司提供。

1.3 仪器与设备

TBA-40FR型全自动生化分析仪：东芝公司；Thermo16离心机：赛默飞世尔科技公司；eppendorf Researchplus可调移液器：德国艾本德股份公司。

1.4 方法

1.4.1 动物分组

空白对照组、模型组按1 mL/100 g 体重灌胃去离子水，红曲蜂胶片低剂量、中剂量、高剂量组分别以0.17、0.33、1.00 g/kg 剂量等容灌胃（分别相当于人推荐摄入量的5、10、30 倍）。空白对照组继续给予维持饲料，模型对照组及3 个剂量组继续给予模型饲料，并每周定期称量体重。

1.4.2 实验方法

50只SD 大鼠于屏障环境适应6 d，按体重随机分为2 组，10 只大鼠给予维持饲料作为空白对照，40 只给予模型饲料作为模型组。模型组给予模型饲料12 d后，空白对照组和模型组大鼠不禁食采血（尾部），采血后20 ℃静置1 h，分离血清，测定血清总胆固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（triglyceride，TG）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C）水平。根据TC 水平将模型组随机分成4 组，每组10 只，分别为模型对照组和样品的3 个剂量组，4 组比较LDL-C、TG、TC、HDL-C 差异均无显著性（P＞0.05）。分组后，空白对照组继续给予维持饲料，模型对照组及3 个剂量组继续给予模型饲料，并每周定期称量体重。于给受试样品后第31 天和第42 天不禁食采血，采血后20 ℃静置1 h，分离血清，采用全自动生化分析仪测定血清LDL-C、TG、TC、HDL-C 水平。

1.4.3 统计方法

用SPSS11.5 统计软件统计。方差符合齐性要求时，用方差分析进行统计；如果各组均数之间差异有显著性，则进一步用q 检验进行两两比较。方差不符合齐性要求时，用秩和检验进行统计。

2 结果

2.1 高脂血症动物模型的建立

造模后、实验第31 天及实验第42 天，大鼠不禁食采血（尾部），采血后室温静置1 h，分离血清，测定血清TC、TG、LDL-C、HDL-C 水平，结果见表1～表3。大鼠血清TC、TG、LDL-C 与对照组比较均显著升高（P＜0.01），表明高脂血症动物模型成立。

表1 造模后大鼠血清TC、TG、LDL-C、HDL-C 水平（±s）Table 1 Serum lipids level of TC，TG，LDL-C，HDL-C in model rats（±s）

注：与空白对照组比较，**表示差异极显著，P＜0.01。

组别鼠数 LDL-C/（mmol/L） TG/（mmol/L） TC/（mmol/L） HDL-C/（mmol/L）空白对照组 10 0.43±0.04 1.31±0.25 1.61±0.15 0.95±0.08模型组 40 0.90±0.10** 4.11±1.12** 3.75±0.58** 1.22±0.12**t 21.412 14.468 20.509 6.496 P 0.000 0.000 0.000 0.000

表2 实验第31 天大鼠血清TC、TG、LDL-C、HDL-C 水平（±s）Table 2 Serum lipids level of TC，TG，LDL-C，HDL-C in each group rats on the day 31 after administration（±s）

注：与空白对照组比较，**表示差异极显著，P＜0.01。

组别鼠数 LDL-C/（mmol/L） TG/（mmol/L） TC/（mmol/L） HDL-C/（mmol/L）空白对照组 10 0.30±0.07 1.42±0.26 1.47±0.20 0.78±0.12模型组 10 0.73±0.07** 2.81±0.44** 3.43±0.45** 0.86±0.07 t 13.679 8.588 12.665 1.935 P 0.000 0.000 0.000 0.069

表3 实验第42 天大鼠血清TC、TG、LDL-C、HDL-C 水平（±s）Table 3 Serum lipids level of TC，TG，LDL-C，HDL-C in each group rats on the day 42 after administration（±s）

注：与空白对照组比较，**表示差异极显著，P＜0.01。

组别鼠数 LDL-C/（mmol/L） TG/（mmol/L） TC/（mmol/L） HDL-C/（mmol/L）空白对照组 10 0.34±0.04 1.33±0.37 1.54±0.22 0.76±0.15模型组 10 0.72±0.07** 2.47±0.47** 3.23±0.50** 0.76±0.10 t 14.260 6.029 9.725-0.090 P 0.000 0.000 0.000 0.930

表4 各组大鼠体重变化情况（±s）Table 4 Weight changes of each group rats（±s）

组别鼠数始重/g 第14 天体重/g 第31 天体重/g 第42 天体重/g模型对照组 10 306.5±17.7 401.9±19.4 499.0±21.7 530.8±22.5低剂量组 10 318.2±20.7 407.7±26.8 493.4±35.8 530.6±38.5中剂量组 10 315.9±14.9 409.0±23.7 496.4±34.5 533.8±40.3高剂量组 10 306.2±16.6 398.9±23.1 474.5±30.5 509.9±32.7

2.2 红曲蜂胶片对高脂血症大鼠体重及血脂的影响

大鼠喂饲维持饲料观察6 d 后，按体重随机分成模型组（40 只）和空白对照组（10 只），体重分别为（204.5±9.6）g 和（206.1±9.0）g，差异无统计学意义（t=-0.486，P＞0.05）。造模后，样品对大鼠体重的影响结果见表4，原始数据均符合方差齐的要求（P＞0.05）。给样前、中、末期，低、中、高3 剂量组大鼠体重分别和模型对照组比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。

红曲蜂胶片对高脂血症大鼠血脂的影响见表5，喂饲高脂饲料31 d 后，模型对照组大鼠血清TG、TC、LDL-C、HDL-C 值与高、中、低剂量组比较差异均无统计学意义（P＞0.05），中、高剂量组的血清TG 值及中剂量组的血清TC 值与模型对照组相比稍有降低。喂饲高脂饲料42 d 后，模型对照组大鼠血清TG 与高、中剂量组比较有明显降低，差异显著（P＜0.05）；模型对照组大鼠血清LDL-C 与中剂量组比较有明显降低，差异显著（P＜0.05）。

表5 各组大鼠血清TG、TC、LDL-C、HDL-C 含量测定结果（±s）Table 5 The results of serum TG，TC，LDL-C，HDL-C content of each group rats（±s）

注：与空白对照组比较，*表示差异显著P＜0.05。

组别鼠数 LDL-C/（mmol/L） TG/（mmol/L） TC（/mmol/L） HDL-C/（mmol/L）实验前 31 d 后 42 d 后实验前 31 d 后 42 d 后实验前 31 d 后 42 d 后实验前 31 d 后 42 d 后模型对照组 10 0.90±0.12 0.76±0.10低剂0.73±0.07 0.72±0.07 4.04±1.05 2.81±0.44 2.47±0.47 3.80±0.53 3.43±0.45 3.23±0.50 1.27±0.10 0.86±0.07 0.75±0.10中剂量组 10 0.87±0.09 0.72±0.09 0.69±0.08 4.01±1.16 2.83±0.48 2.21±0.42 3.78±0.36 3.47±0.38 3.22±0.37 1.23±0.10 0.88±0.08 0.70±0.04高剂量组 10 0.92±0.09 0.70±0.07 0.62±0.07*4.05±1.17 2.64±0.52 1.94±0.46*3.72±0.38 3.30±0.47 3.03±0.56 1.20±0.10 0.86±0.08量组 10 0.92±0.12 0.75±0.09 0.70±0.08 4.16±1.04 2.40±0.56 1.93±0.40*3.84±0.60 3.56±0.60 3.25±0.56 1.16±0.11 0.85±0.12 0.74±0.07

各项实验结果表明：给受试样品42 d 后，中剂量组大鼠血清LDL-C 含量，中、高剂量组大鼠血清TG含量均明显低于模型对照组，差异均有统计学意义。综上所述，在本实验条件下，红曲蜂胶片辅助降血脂功能动物实验结果阳性。

3 结论与讨论

近年来，我国人群的血脂水平逐步升高，血脂异常患病率明显提高且有低龄化趋势。血脂异常受饮食及生活方式的影响，饮食治疗和生活方式改善是治疗血脂异常的基础措施[8]。红曲是药食两用的传统中药，以大米为原料经红曲霉发酵而成，具有降血脂、降血压、抗肥胖、防治老年痴呆及骨质疏松等多种药理作用[9]。高跃中等[10]通过人体试食实验研究了功能性红曲具有明确的调脂功能，并且无明显不良反应。1979年日本远藤章教授在红曲菌发酵液中得到可以抑制体内胆固醇合成的活性物质Monacolin K，后来证明Monacolin K 即为洛伐他汀，该类化合物在临床应用中可作为羟甲基戊二酰辅酶A（HMG-CoA）还原酶的竞争性抑制剂，能有效减少或阻断内源性胆固醇的合成[11]。他汀类药物虽然降低血脂异常的效果较明确，但可引起较严重的不良反应。研究表明，红曲降脂作用较为温和，不良反应少[12]，从红曲中提取的洛伐他汀有明显降低胆固醇及甘油三酯的作用[13]。Chen C H 等[14]研究了红曲的3 个产品的溶解性、物态、口服生物药效率，并与纯洛伐他汀进行比较，结果显示红曲产品溶解度高并结晶度减少，因而具有比纯洛伐他汀更高更快的口服生物药效率。有研究表明，红曲中非他汀类物质也具有辅助降血脂的功能，并且只需红曲中所含他汀类纯品十分之一的剂量即能表现出较好的功效[15]。蜂胶为天然蜂产品，食用历史悠久，属可用于保健食品的物品，具有抗炎镇痛、增强免疫、保护心血管、抗肿瘤、抗氧化、护肝等方面的药理作用[16]。蜂胶中富含黄酮类化合物，已从蜂胶中分离鉴定的黄酮化合物有30 余种，许多黄酮种类为蜂胶所特有，已有报道证明黄酮类物质为降血脂，清除自由基，扩张冠状血管等多种保健功能的活性成分[17]。有研究表明，蜂胶中黄酮含量越高，辅助降血脂作用越明显[18]。

本实验通过喂食高脂模型饲料建立了大鼠混合型高脂血症模型，研究了红曲蜂胶片的辅助降血脂功能。研究表明，红曲蜂胶片可降低血清中TG、LDL-C的含量，与模型对照组比较有显著性差异（P＜0.05）。红曲蜂胶片以传统食品红曲与蜂胶乙醇提取物为主要原料，经过科学的配比，经由现代制剂工艺加工而成，方中红曲能健脾消食，活血化瘀，蜂胶能补虚弱，化浊脂。红曲蜂胶片的主要功效性成分为洛伐他汀与总黄酮，红曲中的洛伐他汀能有效减少或阻断内源性胆固醇的合成，从而实现辅助降血脂的功效；而蜂胶能促进肝脏的脂质代谢，抑制甘油三酯和胆固醇与蛋白质的结合，抑制脂蛋白和血管壁胶原纤维蛋白的结合，蜂胶中的多种黄酮类物质可与胆固醇或其转化物胆酸结合，从而抑制其在肠内的吸收促进降解和排泄[19]。LDL-C 升高是动脉粥样硬化性心血管疾病（atherosclerotic cardiovascular disease，ASCVD）重要的危险因素[20]，故认为红曲蜂胶片对防治动脉粥样硬化方面疾病也具有积极意义。近年来，越来越多的关于辅助降血脂类保健食品正在兴起，其中以蜂胶降脂类产品与红曲降脂类产品未完全普及，具有非常广阔的市场前景。