金立

头颈部内分泌癌在临床中不常见，属于头颈部恶性肿瘤，患者在早期易发生转移且死亡率比较高，影响患者预后因素尚不完全清楚，当前临床对其治疗还没有统一标准，所以，寻找新的疗法使头颈部神经内分泌癌疗效提升就变得非常迫切[1-2]。伴随着分子生物学与免疫学等不断发展，多数学者一致认为肿瘤转移与浸润为多步骤、多因素发展进程，而相关基因表达为其中重要机制之一。头颈部神经内分泌癌患者机体内肿瘤组织生长较快，能量代谢变强，葡萄糖摄入量明显增大，同时会造成患者出现肿瘤内缺氧微环境。葡萄糖转运蛋白1(Glut-1)参加到肿瘤细胞能量代谢过程中，相关研究显示许多恶性肿瘤内Glut-1出现异常表达。另外，研究表明肿瘤细胞在缺氧状况下基因表达与转录中HIF-1α都重要影响，在肿瘤组织代谢中，Glut-1是HIF-1α下游基因会受到调控，并且PI3K和p-AKT所启动PI3K/AKT信号通路可调控HIF-1α与Glut-1表达[3-4]。因此，本文通过分析Glut-1与HIF-1α及p-Akt在头颈部神经内分泌癌中表达影响，为临床患者治疗提供一些实验室依据。

1 材料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析2011年6月至2014年6月间在本院接受治疗的头颈部神经内分泌癌活检或手术标本66例，其中男性48例，女性18例，平均年龄(60.7±8.4)岁，6例为鼻神经内分泌癌(左侧鼻腔2例，右侧鼻腔4例)、12例为鼻窦神经内分泌癌(5例右侧鼻窦，7例左侧鼻窦)、42例为喉神经内分泌癌(喉声门下14例，声门上28例)、6例为口咽神经内分泌癌(1例左侧扁桃体，5例右侧扁桃体)，其中出现远处转移12例，淋巴结转移18例。选取同期在本院接受治疗60例声带息肉患者作为对照组，其中男性34例，女性26例，平均年龄(55.8±8.6)岁。

1.2 主要试剂

兔抗人Glut-1多克隆抗体、鼠抗人HIF-1α单抗、兔抗人p-Akt多克隆抗体及兔抗人PI3K-p85亚单位多克隆抗体(均由上海赛默飞世尔公司生产)。

1.3 试验方法

免疫组织化学法：标本使用10%中性福尔马林液进行规定，石蜡包埋后4 μm切片；脱蜡水化并使用PBS缓冲液3次冲洗，高压高温下抗原修复，切片内加入3%过氧化氢，孵育15 min将内源性过氧化物酶阻断，分别加入Glut-1抗体、HIF-1α抗体、p-Akt抗体及PI3K-p85抗体，PBS溶液冲洗3～5 min后每个切片加入聚合物增强剂45 μl，PBS溶液冲洗3 min后切片加入酶标抗兔或鼠聚合物45 μl，孵育35 min；PBS冲洗后切片加入AEC或者DAB显色液90 μl，阳性表现为红色或者棕色；苏木精复染，PBS溶液返蓝，水洗，最后苏木精淡染、脱水及封固。

空白对照：PBS代替一抗为阴性对照；阳性对照：红细胞染色当做Glut-1阳性对照；光镜下，Glut-1抗体胞质或者胞核为不同程度棕黄色，p-Akt、PI3K及HIF-α阳性细胞的染色都在细胞质与细胞膜上，表现为均匀棕黄色颗粒。切片随机察看10个高倍视野，每个视野下记录100个肿瘤细胞。若阳性细胞比率≥25%是阳性，若阳性细胞比率<25%是阴性。患者随访3年，随访截止2017年6月。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 患者p-Akt、Glut-1、PI3K及HIF-1α表达情况

在头颈部神经内分泌癌内Glut-1阳性表达率为81.82%(54/66)，声带息肉组织其阳性表达率为6.67(4/60)，HIF-1α表达率为54.44%(36/66)，声带息肉其表达率为0%，PI3K阳性表达率为45.45%(30/66)，声带息肉其表达率为0，p-Akt表达率为36.36%(24/66)，声带息肉其表达率为0%，差异均有统计学意义(χ2=10.984、9.387、12.063、11.338，P<0.05)。

2.2 患者生存率状况单因素分析

66例头颈部神经内分泌癌患者3年生存率36.36%，单因素分析显示是否出现淋巴结转移与远处转移患者间生存率对比差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 患者3年生存率影响因素分析(例，%)

2.3 影响患者生存率Logistic回归分析

Logistic回归分析显示：远处转移为影响患者生存率独立危险因素，见表2。

表2 影响患者生存率多因素分析

3 讨论

瘤细胞发生转移、增殖、生化和分化等需消耗大量的能量，进而使糖酵解量升高，肿瘤细胞生化特征之一为葡萄糖摄取量增大[5-6]。Glut为介导细胞摄取葡萄糖主要载体，当前发现Glut蛋白已有14余种，Glut-1对葡萄糖亲和力较高[7]。相关研究显示肿瘤细胞对摄取葡萄糖升高和患者机体Glut-1表达升高有紧密联系，在肾癌、乳腺癌、甲状腺癌、肺癌、胃癌、肝癌和直肠癌等肿瘤组织内其表达比其他正常组织显著升高[8-10]。头颈部神经内分泌癌同样有无限转移、增殖、侵袭与生长特性，其发生与进展也需大量营养与能量，进而对Glut-1表达刺激增大[11-12]。本文研究显示癌症患者机体内Glut-1阳性表达率是81.82%，和声带息肉对比差异有统计学意义，说明Glut-1在肿瘤发生与进展中有重要影响，可当做头颈部神经内分泌癌检测标志物之一。

HIF-1为HIF-1β亚基于HIF-1α亚基组成异源二聚体，HIF-α亚基为功能性亚基，细胞内氧浓度对其表达有调控作用。缺氧条件下，HIF-1α表达升高，可上调细胞增殖，将乏氧反应性因基因表达激活[13-15]。患者机体内肿瘤细胞无限增大会造成细胞供氧不充足，形成癌组织乏氧微环境，致使机体HIF-1α表达升高。国内外相关研究显示，在前列腺癌、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌和肺癌等肿瘤内HIF-1α都为阳性表达，在癌前病变组织内也存在HIF-1，正常组织内则没有表达，本文研究和相关研究一致。AKT还可称作蛋白激酶B，是细胞信号转导路径上原癌基因。它作为信号蛋白分子，参加磷脂酞肌醇3激酶的信号传导中心环节。PI3K-AKT信号路径可控制肿瘤发生进展内细胞的生物学进展，包含细胞迁移、转录、调控细胞周期、翻译、增殖、代谢、细胞凋亡和新生血管等，PI3K活化可使AKT磷酸化产生p-AKT，p-AKT能将下游色氨酸残基与络氨酸磷酸化，使下游因子激活，进而发挥加速生成肿瘤血管、抑制细胞凋亡、加速细胞侵袭、增殖、运动与生长等作用[16-18]。本文研究显示头颈部神经内分泌癌患者机体内PI3K阳性表达率为45.45%，p-Akt表达率为36.36%和声带息肉表达率差异有统计学意义，说明PI3K-AKT信号路径在患者疾病进展有一定影响。对患者三年生存率研究显示，仅转移对其生存状况有显著影响。

综上所述，头颈部神经内分泌癌患者PI3K、Glut-1、p-Akt及HIF-1α表现为高表达，其生存情况和发生远处转移有联系。