◎ 车方萍，赵梦芸，陈 艳

（杭州谱可检测技术有限公司，浙江 杭州 310000）

1 材料与方法

①样品。同一批次的10个青团；环境条件为温度20 ℃，相对湿度55%。②检测仪器设备。电热恒温培养箱，温度偏差为±1 ℃；电子天平，测量范围（0.5～510）g，准确度等级Ⅱ级（0≤m≤500 g，MPE±0.05 g）；移液枪1，测量范围（100～1 000）μL，容量允许误差为±1.0%，测量重复性≤0.5%；移液枪2，测量范围（1 000～10 000）μL，容量允许误差±0.6%，测量重复性≤0.2%；量筒，250 mL，容量允差为±1.0 mL。③培养基和试剂。平板计数琼脂（PCA），购自北京路桥；生理盐水。④检测依据。GB 4789.2-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定》[1]。

2 检测目的

依据GB 4789.2-2016，采用平板菌落计数法测量食品中的菌落总数。通过对影响测量结果的不确定度分量的分析和量化，求出菌落总数的标准不确定度和扩展不确定度，给出各分量对测量结果不确定度的相对贡献，对测量结果进行不确定度表述。

3 测量步骤

参照国标GB 4789.2-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定》。

4 测量不确定度来源

①由输入量V引入的标准不确定度分量u(V)。由量筒和移液枪的固有误差和实验人员操作偏差引入。②由输入量m引入的标准不确定度分量u(m)。由电子天平的固有误差及实验人员操作偏差引入。③由实验人员重复性测量引入的标准不确定度分量urel。由重复性（检测环境、培养时间、培养温度、修约、样品均匀性、操作者、检测时间、计数、培养基和试剂）测量引入。

5 标准不确定度分量的评定

5.1 由实验人员重复性测量引入的标准不确定度分量urel

在重复性条件下，对青团样品进行10次测量，10次测量数据，见表1[2]。

表1 10次平行测量结果表

根据贝塞尔公式[3]，可计算出检验结果对数值标准偏差为：

相对标准不确定度为：

5.2 由输入量m引入的标准不确定度分量u(m)

（1）根据经验得出，称量时由人员引起的称量误差为±0.1 g，其半宽区间a=0.1 g，该区间内属均匀分布，包含因子，故：

（2）电子天平固有误差带来的标准不确定度分量u(m2)。电子天平最大允许误差±0.05 g，其半宽区间a=0.05 g，该区间属均匀分布，包含因子，则：

以上两项各不相关，故合成得出：

相对标准不确定度为：

5.3 由输入量V引入的标准不确定度分量u(V)

（1）初始稀释液（1∶10）：初始稀释液取25 g检样加入225 mL（V11）灭菌生理盐水制得。

由经验得出，操作时，由人员引起的误差为±3.0 mL，其半宽区间a=3.0 mL，该区间内属均匀分布，包含因子，故：

使用250 mL量筒量取生理盐水，其容量最大允差为±1.0 mL，其半宽区间a=1.0 mL，该区间内属均匀分布，包含因子，故：

以上两项各不相关，故合成得出：

相对标准不确定度为：

（2）分别使用1 000 μL（V21）和10 mL移液枪吸取样品稀释液和9 mL（V22）灭菌生理盐水，由于由移液枪产生的误差对结果造成的影响很小，可忽略不计。其容量允差分别为±0.01 mL和±0.054，该区间内均匀分布，包含因子，标准不确定度分别为：

计算得出：移液枪引起体积最大偏差导致的不确定度分量，不到最大分量的1/3不用估计，所以移液枪引起的不确定度可以忽略。

综上，体积的相对不确定度为u(V)=0.81%。

6 相对标准不确定度分量

相对标准不确定度分量，见表2。

表2 相对标准不确定度分量表

所引入的各不确定度分量ui彼此独立，互不相关，所以相对合s成标准不确定度为：

7 合成标准不确定度

由以上计算可知，青团样品的菌落总数测定的合成相对标准不确定度为4.37%，则其合成不确定度为：

8 扩展不确定度分析

根据置信概率p=95%和自由度v=9，由t分布得到包含因子k=2.26，扩展不确定度为：

9 结果表征

取反对数，相当于X1=130 000时，X的取值范围为90 000～180 000 CFU/g。