古丽那尔·阿布拉江　桑伟　王雯

[摘要] 目的 探討E-钙黏蛋白（E-cadherin）和Claudin-7在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系。 方法 以2016年8月～2017年8月新疆医科大学第一附属医院采集的正常宫颈上皮组织（对照组，n=30）、重度宫颈上皮内瘤变组织（HSIL组，n=28）和宫颈鳞状细胞癌组织（CA组，n=80）为研究样本，采用免疫组织化学方法检测三组E-cadherin、Claudin-7蛋白表达情况，分析两者与宫颈鳞状细胞癌病理特征的关系，同时对两者的表达水平进行相关性分析。 结果HSIL组、CA组E-cadherin蛋白阳性表达率明显低于对照组，且HSIL组明显高于CA组（P < 0.05）；HSIL组、CA组Claudin-7蛋白阳性表达率明显低于对照组，HSIL组明显低CA组（P < 0.05）；E-cadherin蛋白阳性表达率与宫颈鳞状细胞癌肿瘤大小、淋巴结转移呈负相关（P < 0.05），与组织分化程度呈正相关（P < 0.05），Claudin-7蛋白阳性表达率与淋巴结转移呈正相关（P < 0.05），与组织分化程度、临床分期呈负相关（P < 0.05）；Claudin-7蛋白与E-cadherin蛋白表达呈负相关（P < 0.05）。 结论 宫颈鳞状细胞癌组织中E-cadherin和Claudin-7蛋白阳性表达率分别明显降低和升高，两者阳性表达率与宫颈鳞状细胞癌临床病理特征紧密相关。

[关键词] 宫颈鳞状细胞癌；E-钙黏蛋白；Claudin-7；病理特征；相关性

[中图分类号] R737.33 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2018）04（b）-0095-04

[Abstract] Objective To investigate the expression of E-cadherin and Claudin-7 in cervical squamous cell carcinoma and its relationship with clinicopathological features. Methods The normal cervical epithelial tissues （control group， n=30）， high squamous intraepithelial neoplasias （HSIL group， n=28） and cervical squamous cell carcinomas （CA group， n=80） in the First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University from August 2016 to August 2017 were selected as the research samples. The expression of E-cadherin and Claudin-7 protein in the three groups was detected by the immunohistochemical method. The relationship between them and pathological characteristics of cervical squamous cell carcinoma was analyzed， and the correlation between the expression levels of the two was also analyzed. Results The positive expression rate of E-cadherin protein was significantly higher in the control group than in HSIL group and CA group， and significantly higher in HSIL group than in CA group （P < 0.05）. The positive rate of Claudin-7 protein was significantly lower in the control group than in HSIL group and CA group， and significantly lower in HSIL group than in CA group （P < 0.05）. The positive expression rate of E-cadherin protein was negatively correlated with the size and lymph node metastasis of cervical squamous cell carcinoma （P < 0.05）， and positively correlated with the differentiation degree （P < 0.05）. The positive expression rate of Claudin-7 protein was significantly positively correlated with lymph node metastasis （P < 0.05）， and negatively correlated with the differentiation degree and clinical stage （P < 0.05）. The expression of Claudin-7 protein was negatively correlated with the expression of E-cadherin protein （P < 0.05）. Conclusion The positive expression rates of E-cadherin and Claudin-7 protein in cervical squamous cell carcinoma are significantly decreased and increased， respectively. The positive expression rate of them is closely related to the clinicopathological features of cervical squamous cell carcinoma.

[Key words] Cervical squamous cell carcinoma； E-cadherin； Claudin-7； Pathological features； Correlation

宫颈癌为全球范围内女性中常见恶性肿瘤之一，目前对其病因尚未完全明确，多认为与早孕、早产、多育、吸烟等因素有关[1]。随医学技术的不断更新及普及工作的不断开展，虽宫颈癌早期筛查和治疗日益被重视，但宫颈癌患病率仍居高不下[2]。宫颈癌约有80%为宫颈鳞癌[3]，临床有必要积极探究灵敏的肿瘤标志物对宫颈鳞状细胞癌发生、进展进行有效评估。早期有学者研究表明E-钙黏蛋白（E-cadherin）可有效评估肿瘤细胞侵袭及迁移能力[4]，而临床实践表明Claudin-7在癌组织中异常表达[5]，因而笔者推测E-cadherin和Claudin-7表达与宫颈鳞状细胞癌临床病理特征有一定关系，并与于本文展开临床对照性研究。

1 资料与方法

1.1 一般资料

以2016年8月～2017年8月新疆医科大学第一附属医院（以下简称“我院”）病理科采集的正常宫颈上皮组织（对照组，n=30）、重度宫颈上皮内瘤变组织（HSIL组，n=28）和宫颈鳞状细胞癌组织（CA组，n=80）为研究样本；对照组30例，均取自在我院因妇科良性疾病手术治疗者，年龄35～58岁，平均（46.15±3.16）岁；HSIL组，组织标本取自于我院接受手术治疗的重度宫颈上皮内瘤变患者，年龄36～60岁，平均（47.02±3.14）岁；CA组80例患者纳入研究前均未接受任何化疗及其他方式治疗者，年龄37～60岁，平均（48.01±3.51）岁，国际妇产科联盟标准分期：Ⅰ、Ⅱ期各65、15例，组织分化程度：高、中、低分化各8、45、27例。患者纳入排除标准：①经术后病理组织学检查确诊；②未合并其他恶性肿瘤；③非妊娠期及哺乳期女性。本研究符合赫尔辛基宣言，患者及其家属均知情同意并自愿签署书面知情同意书，同时本研究征得我院医学伦理委员会批准。

1.2 研究方法

①组织标本采集：纳入研究的组织标本均为手术切除后，经10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，3 μm厚连续切片标本。②主要试剂：浓缩型单抗人Claudin-7单克隆抗体（编号：CCM-0880，稀释比例为1︰60）及即用型单抗人E-cadherin单克隆抗体（编号：CEM-0023）均由赛诺特生物技术股份公司提供。Dako REALTM EnVisionTM Detection System，Peroxidase/DAB+，Rabbit/Mouse检测试剂盒由DAKO公司提供。③检测方法：采用免疫组织化学EnVision二步法检测，阴性对照采用PBS取代一抗，阳性对照则选用已知阳性片。组织切片经二甲苯、梯度乙醇脱蜡至水后，采用柠檬酸盐缓冲液进行抗原修复，滴加一抗，4℃孵育过夜后PBS洗涤，滴加通用型二抗，37℃孵育30 min，DAB显色约5～10 min，苏木素复染，盐酸酒精分化，蓝化，最后进行脱水、透明，中性树胶封片及镜检。③结果判断，E-cadherin阳性：定位于细胞膜和胞质，并呈棕黄色；Claudin-7阳性：定位于细胞膜和细胞质之中，呈现棕黄色细小颗，免疫组化染色结果由我科两名资深病理诊断医师（在不知病例资料前提下）盲法阅片判断，每张切片结果均在高倍镜（×400）下至少观察到5个不重复视野下判断；阳性细胞数≤10%记1分，>10%～50%记2分，>50%～75%记3分，>75%记4分；染色强度评分：无色记0分，淡色记1分，棕黄色记2分，棕褐记3分；按照乘积原则，0～2分记为“-”，3～4分记为“+”，6～8分记为“++”，9～12分记为“+++”。结果判定：分数≥3分为阳性，<3分为阴性。

1.3 观察指标

①三组E-cadherin、Claudin-7蛋白表达情况；②E-cadherin、Claudin-7蛋白表达与宫颈鳞状细胞癌临床病理特征的关系；③宫颈鳞状细胞癌组织中E-cadherin、Claudin-7蛋白表达的相关性分析。

1.4 统计学方法

采用SPSS 19.0统计学软件进行数据分析，计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验，从正态分布各变量间相关性采用Spearman相关分析，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组E-cadherin、Claudin-7蛋白表达情况

HSIL组、CA组E-cadherin蛋白阳性表达率明显低于对照组，HSIL组明显高于CA组（χ2=5.718、30.714、11.703，均P < 0.05）；HSIL组、CA组Claudin-7蛋白阳性表达率明显高于对照组，且HSIL组明显低于CA组（χ2=6.116、41.423、16.512，均P < 0.05）。见表1、图1～2（封四）。

2.2 E-cadherin、Claudin-7蛋白表达与宫颈鳞状细胞癌临床病理特征的关系

肿瘤大小<4 cm、组织分化为高中分化、无淋巴结转移的宫颈鳞状细胞癌组织中E-cadherin阳性表达率明显高于肿瘤大小≥4 cm、组织分化为低分化、有淋巴结转移者（P < 0.05）；临床分期为Ⅰ期、组织分化程度为低分化、有淋巴结转移宫颈鳞状细胞癌组织中Claudin-7阳性表达率明显高Ⅱ期、高中分化、无淋巴结转移者（P < 0.05）；E-cadherin阳性表达率与宫颈鳞状细胞癌腫瘤大小、淋巴结转移呈负相关（r=-0.421、 -0.428，P < 0.05），与组织分化程度呈正相关（r=0.405， P < 0.05），Claudin-7蛋白阳性表达率与淋巴结转移呈正相关（r=0.435，P < 0.05），与组织分化程度、临床分期呈负相关（r=-0.413、-0.398，P < 0.05）。

3 讨论

流行病学数据提示全球每年约有50万例新发宫颈癌患者，且其患病人群日趋年轻化[6]，现代医学表明从正常宫颈细胞发展为癌细胞常需经历相当长的癌前病变期，而早期宫颈癌患者及时诊治后的存活率高达90%[7]。随人们对宫颈癌认知不断深入，普遍认为宫颈癌属于一种多基因疾病，高危型人乳头瘤病毒（HPV）持续感染被认为是宫颈癌发生发展的关键，HPV感染正常上皮细胞中，上皮细胞表型逐渐消失，一些间质细胞表型发生EMT现象，E-cadherin是其中重要一员，早期临床研究证实其在肿瘤形成、侵袭及转移中发挥重要作用[8]；临床病理学研究表明癌细胞侵袭转移，需先从原癌灶中脱离出来，改变细胞间黏附结构功能使恶性肿瘤细胞脱离原发组织，Claudin-7有潜在限制癌细胞营养及生长因子供应，癌细胞失去紧密连接蛋白在膜上的定位是肿瘤发展的关键[9-10]。

陈小燕等[11]研究表明宫颈鳞癌组织中E-cadherin蛋白阳性表达率与宫颈鳞癌恶性临床病理特征有明显相关性；李燕[12]研究则提示Claudin-1、3、4、7与浸润型鳞状细胞癌临床病理特征有明显相关性。而本研究结果发现：对照组E-cadherin蛋白阳性表达率较HSIL组、CA组显著高，对照组Claudin-7蛋白阳性表达率较HSIL组、CA组明显低，E-cadherin阳性表达率与宫颈鳞状细胞癌肿瘤大小、淋巴结转移呈明显负相关，与组织分化程度呈明显正相关，Claudin-7阳性表达率与淋巴结转移呈正相关，与组织分化程度、临床分期呈负相关，Claudin-7与E-cadherin表达呈负相关，提示E-cadherin、Claudin-7表达与宫颈鳞状细胞癌临床病理特征密切相关[13，9]。E-cadherin属于一种典型钙依赖型细胞表面跨膜糖蛋白，由人类染色体16q 22上相关基因编码，主要负责上皮细胞和细胞间黏附功能，在组织形态形成及胚胎发育和细胞转归中发挥重要作用[14]，已有研究提示E-cadherin为抑癌基因，其通过加强细胞间黏附及抑制细胞增殖两方面发挥抑癌及抑癌细胞转移作用，因而与宫颈鳞状细胞癌疾病病理过程密切相关[15]。Claudin-7属于一种跨膜蛋白，主要表达于上皮细胞相邻面的胞膜上，存在组织特异性，在宫颈鳞状细胞疾病进展恶化中发挥作用可能与其参与细胞分化和其他因子调控有一定关系[16]，Claudin-7在宫颈鳞状细胞癌组织中阳性表达率明显升高，其阳性表达率升高导致细胞间信号传导异常，从而促进肿瘤的增殖及迁移[17]，因而推测Claudin-7蛋白阳性表达率与淋巴结转移、组织分化程度、临床分期有明显相关性[18]。本研究还发现宫颈鳞状细胞癌组织中Claudin-7蛋白与E-cadherin蛋白表达呈负相关，提示Claudin-7功能异常会导致E-cadherin蛋白表达减少，从而增加宫颈鳞状细胞癌侵袭性，加剧肿瘤进展，这与既往国外学者研究的观点相似[19]。

综上所述，宫颈鳞状细胞癌组织中E-cadherin、Claudin-7蛋白阳性表达率可较好预测宫颈鳞状细胞癌早期分化程度、淋巴结转移、肿瘤大小等情况，两者有望成为宫颈鳞状细胞癌早期诊断的灵敏指标。

[参考文献]

[1] 张珊，官海涟，丁锦红，等.宫颈癌及其癌前病变的分子标志物临床应用进展[J].实用妇产科杂志，2016，32（7）：503-506.

[2] 张弦，李双飞，何珊茹.宫颈癌和乳腺癌筛查结果分析及对社区工作的指导意义[J].中华肿瘤防治杂志，2016，16（s1）：3-4.

[3] 杨敏，徐景杰，王晓红.宫颈鳞癌中CXCR4的表达变化与宫颈鳞癌细胞侵袭性关系[J].现代预防医学，2015，42（13）：2490-2492.

[4] 田峰，方瑞忠，徐建.基质金属蛋白酶-2和E-钙黏蛋白在胰腺癌组织中的表达及临床意义[J].中国现代医学杂志，2016，26（9）：34-38.

[5] 姜琳娜，路三军，魏娉，等.Slug和Claudin-7在食管癌中的表达及其对肿瘤生物学行为的影响[J].现代医学，2016， 18（5）：661-665.

[6] 周晖，林仲秋.美国国立综合癌症网络“2016宫颈癌临床实践指南”解读[J].中国实用妇科与产科杂志，2016， 32（3）：223-230.

[7] 乔友林.适宜发展中国家与地区的宫颈癌快速筛查技术的研究及意义[J].中华预防医学杂志，2015，49（2）：110-111.

[8] 苏莉，林静，周辉蓉，等.KLF4、Ki-67和E-cadherin在宮颈鳞状细胞癌中的表达及意义[J].诊断病理学杂志，2016， 23（2）：110-113.

[9] Zhu J，Wang R，Cao H，et al. Expression of claudin-5，-7，-8 and -9 in cervical carcinoma tissues and adjacent non-neoplastic tissues [J]. Int J Clin Exp Pathol，2015，8（8）：9479-9486.

[10] Jakab C，Rusvai M，Gálfi P，et al. Expression of claudin-7 molecule in canine perianal glandtumours [J]. Acta Vet？鄄erinaria Brno，2010，79（1）：127-133.

[11] 陈小燕，刘琴，兰康云，等.Srx与E-cadherin在宫颈鳞癌组织中的表达及临床意义[J].免疫学杂志，2015，18（12）：1067-1071.

[12] 李燕.Claudin-1，3，4，7在宫颈上皮内瘤变和浸润性鳞状细胞癌中的表达及意义[D].合肥：安徽医科大学，2013.

[13] Van de PG，Kristensen GB，Baekelandt M，et al. E-cad？鄄herin and catenins in early squamous cervical carcinoma [J]. Gynecol Oncol，2004，94（2）：521-527.

[14] 鄧秀文，邹文.E-cadherin和Vimentin表达与早期宫颈癌临床病理特征及预后的关系[J].临床肿瘤学杂志，2016， 21（2）：160-165.

[15] Jiang Y，Ren W，Wang W，et al. Inhibitor of ？魴2-catenin and TCF （ICAT） promotes cervical cancer growth and meta？鄄stasis by disrupting E-cadherin/？魴2-catenin complex [J]. Oncology Reports，2017，38（5）：2597-2597.

[16] 李锐，张道荣，蔡存伟，等.Claudin-7与Slug在肺鳞癌和腺癌中的表达及其临床意义[J].中国肺癌杂志，2011， 14（6）：492-496.

[17] 许畅，李文晶，丁磊.Claudin-7在肿瘤干细胞中的研究进展[J].医学综述，2017，23（17）：3373-3377.

[18] Cunniffe C，Brankin B，Lambkin H，et al. The role of cla？鄄udin-1 and claudin-7 in cervical tumorigenesis [J]. Ant？鄄icancer Research，2014，34（6）：2851-2857.

[19] Lioni M，Brafford P，Andl C，et al. Dysregulation of Claudin-7 leads to loss of E-cadherin expression and the increased invasion of esophageal squamous cell carcinoma cells [J]. Am J Pathol，2007，170（2）：709-721.

（收稿日期：2018-01-24 本文编辑：任 念）