钟阳青，陈艳清，肖　翔，郭馥艳，闵琴琴

(1.广东省东莞市塘厦医院检验科　523722；2.广东省东莞市塘厦医院妇科　523722； 3.广东省深圳市中医院病理科　518033)

人乳头瘤病毒(HPV)是一种双链环状DNA病毒，也是乳头瘤空泡病毒，归属乳多空病毒科[1]。根据致癌风险的大小，HPV分为低危型和高危型两大类，高危型HPV(HR-HPV)主要有HPV16、18、26、31、33、35、52、56、58 等亚型。研究表明HPV感染与宫颈癌密切相关[2]。宫颈癌是威胁全球女性健康的最常见的恶性肿瘤之一，有报道显示全球每年约有宫颈癌新发病例52.8万，与宫颈癌相关的死亡例数达26.6万，其中 85%的病例发生在发展中国家，全球每年约有1/4左右的新发病例在我国发生[3]。研究表明HR-HPV 持续感染约 8～24个月将导致宫颈上皮内瘤变(CIN)，经过8～12年可进展为宫颈癌[4]。HR-HPV感染导致CIN，发展到癌是一个漫长的过程，在这个漫长的过程中阴道微环境可能在其中扮演着重要的角色[5]。本研究通过观察阴道微环境的变化与HR-HPV感染的相关性，为临床疾病的诊疗提供客观依据。

1　资料与方法

1.1一般资料选择2016年1月至2017年5月来东莞市塘厦医院妇科门诊就诊的宫颈细胞学检测阴性的患者2 945例，年龄21～48岁，平均(28.32±5.17)岁。

1.2标本采集HPV标本：将标本刷在子宫颈和外口顺时针旋转 5 圈，收集子宫颈脱落细胞，置入保存液中。阴道微环境检验标本：用 2 根无菌棉拭子留取阴道侧壁上1/3分泌物，其中一支用于阴道病五联检，另一支加0.9%的生理盐水1 mL用于显微镜检查。

1.3仪器及试剂HPV检测采用Thermo基因扩增仪，试剂使用深圳亚能公司的试剂，能检测HR-HPV17种(16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82)，低危型HPV6种(6、11、42、43、81、83)；阴道病五联检试剂使用北京中生金域诊断技术股份有限公司生产的爱必维试剂盒，能检测过氧化氢(H2O2)、唾液酸苷酶(sNa)、白细胞酯酶(LE)、葡萄糖醛酸苷酶(Gus)、凝固酶(GA)。

1.4检测方法HPV检测、阴道病五联检严格按照厂家说明书的规定操作；外阴阴道假丝酵母菌性阴道炎(VVC)和滴虫性阴道炎(TV)的检测使用加了0.9%生理盐水的棉签，在玻璃片上涂片，使用400倍显微镜检测。

1.5诊断标准HPV检测出高危型为HR-HPV感染；H2O2、sNa阳性为需氧菌性阴道炎(AV)，H2O2、LE阳性+Gus、GA一项或两项阳性为细菌性阴道炎(BV)，H2O2、sNa、LE阳性+Gus、GA一项或两项阳性为AV+BV混合感染；显微镜检测观察到假丝酵母菌、滴虫诊断为相应阴道炎；H2O2阳性其余阴性为单纯H2O2缺乏，H2O2和LE阳性其余阴性为单纯H2O2、LE阳性；以上任意两项阳性为混合感染。

1.6统计学处理所有数据使用SPSS17.0软件进行统计，计数资料以例数或率表示，组间比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2　结　　果

2.1阴道微环境改变与HR-HPV感染2 945例标本中有1 957例阴道微环境改变，发生率为66.45%；HR-HPV感染468例，感染率为15.89%，其中阴道微环境改变的HR-HPV感染率为384例(19.62%)，阴道微环境正常者的HR-HPV感染率为84例(8.5%)，阴道微环境改变者HR-HPV感染率与阴道微环境正常者比较差异有统计学意义(P<0.05)。

表1　　各类型阴道微环境改变与HR-HPV感染的关系

注：与阴道微环境正常比较，*P<0.05

2.2各类型阴道微环境改变与HR-HPV感染的关系1 957例阴道微环境改变的患者中AV、BV、VVC、TV、单纯H2O2缺乏、单纯H2O2和LE阳性的分别为 302例(15.43%)、578例(29.54%)、276例(14.10%)，225例(11.50%)、246例(12.57%)、330例(16.86%)，其中存在混合感染的情况，AV通常与BV、VVC混合，VVC、TV通常与BV混合，总混合例数为439例，占22.43%；AV、BV、VVC、TV阳性者，单纯H2O2缺乏者，单纯H2O2和LE阳性者，混合感染者HR-HPV感染率与阴道微环境正常者比较差异有统计学意义(P<0.05)；AV、TV阴性者HR-HPV感染率与其他各类型比较差异无统计学意义(P>0.05)；BV、VVC阴性者HR-HPV感染率与其他类型比较差异有统计学意义(P<0.05)；混合感染者与BV者比较HR-HPV感染率差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

3　讨　　论

阴道微环境为阴道内正常的定植菌群、宿主免疫能力、体内外环境与宫颈阴道解剖结构之间构成的动态平衡的微生态系统。正常条件下，阴道微环境中优势菌如乳杆菌等占主导地位，乳杆菌分泌乳酸、H2O2及细菌素等，维持阴道的酸性环境，并杀死部分条件致病菌，维持阴道微环境平衡状态,当阴道微环境被打破时，可能造成一系列下生殖道疾病[6-8]。有研究报道阴道微环境改变如BV、滴虫感染、假丝酵母菌、乳酸杆菌数量减少或功能降低等都会影响HPV的感染率[9-10]。

本研究共纳入2 945例标本，其中阴道微环境改变的有1 957例(66.45%)，HR-HPV感染468例(15.89%)，阴道微环境改变者HR-HPV感染率与阴道微环境正常者比较差异有统计学意义(P<0.05)，表明阴道微环境改变与HR-HPV感染有关。李东燕等[6]对3 861例标本进行分析也得出相同结果。AV、BV、VVC、TV、单纯H2O2缺乏、单纯H2O2和LE阳性的患者HR-HPV感染分别为78例(25.83%)、184例(31.86%)、83例(30.11%)、56例(24.92%)、62例(25.24%)、94例(28.48%)，与阴道微环境正常者比较差异有统计学意义(P<0.05)。混合型阴道微环境改变患者HR-HPV感染率明显升高，与阴道微环境正常者相比差异有统计学意义(P<0.05)。夏玉洁等[11]对149例HR-HPV感染、宫颈细胞学阴性患者和165例健康者HPV阴性、细胞学阴性患者的研究表明，BV、AV、VVC、pH>4.5及乳酸杆菌减少与HR-HPV感染有关。VIEIRA-BAPTISTA等[12]的研究表明AV与宫颈癌的发生有关，是宫颈癌的独立危险因素，但是与HPV感染率无关，目前对AV感染与HR-HPV感染的报道较少且存在差异，因此需要进一步扩大样本研究。H2O2、LE被认为是反映阴道乳酸杆菌功能和数量的指标，本研究表明此两项中的一项阳性或两项均阳性与HR-HPV感染有关，与以往的研究有相同也有差异[7,11]。此外本次还发现VVC、TV与HR-HPV感染有关，亦与以往的研究有相符也存在差异[7,11，13]。有研究报道TV合并BV HR-HPV感染率降低，BV合并VVC感染HR-HPV感染率升高[11]。对于混合感染对HR-HPV的研究需要进一步研究。

综上所述，阴道微环境改变与HR-HPV感染有关，尤其是BV、VVC和混合感染者的HR-HPV升高较明显。临床需要重视阴道微环境改变的治疗，以达到预防HR-HPV感染的目的，进而降低宫颈癌的发生率。