郭继文，孙云纬，陈 琳，邱克茂，胡友主

(1.广州开发区医院普外科，广州 510730； 2.暨南大学附属第一医院普外科，广州 510632)

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一。目前，对乳腺癌的治疗主要有手术、化疗，其中化疗是综合治疗乳腺癌的重要方法[1]。但是，有研究[2]显示，部分患者会出现化疗效果欠佳等现象，而多药耐药是导致化疗失败的重要原因，其中多药耐药基因(MDR)产物——DNA拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)是形成化疗耐药性的物质基础，是导致肿瘤化疗失败以及肿瘤早期复发的主要原因。本研究通过对原发性乳腺癌患者进行TopoⅡ的免疫组化分析，并观察其与相关临床病理特征的关系，旨在探讨TopoⅡ蛋白在原发性乳腺癌组织中的表达及其与预后的相关性。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选择2014年6月至2015年12月在广州开发区医院和暨南大学附属第一医院经术后病理证实为原发性乳腺癌患者100例，均为女性，年龄32～73(52.76±2.48)岁。按照乳腺肿瘤世界卫生组织学分类标准进行病理组织学分型：浸润性导管癌63例，浸润性小叶癌10例，原位癌20例，黏液腺癌4例，非浸润性癌3例。淋巴结转移38例，无淋巴结转移62例。所有患者术前均未行新辅助化疗、放疗或内分泌治疗。

1.2 方法

1)取患者的乳腺癌组织标本，用10%中性甲醛固定，石蜡包埋，5μm厚连续切片，DAB显色，苏木精-伊红染色(HE染色)，常规脱水、封片。采用免疫组织化学SP法检测乳腺癌组织中TopoⅡ、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、p53的表达情况，所有试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司，以上具体操作根据试剂盒说明书进行。用PBS代替一抗作阴性对照，用已知阳性乳腺癌组织作阳性对照。2)分析TopoⅡ蛋白与临床病理特征的关系及其与ER、PR、p53和预后的相关性。

1.3 结果判定标准

由2位高年资的病理科医师采用双盲法进行阅片。在光学显微镜(日本奥林帕斯公司，型号：BX51)的产品下随机选取10个高倍视野，对每个高倍视野中阳性细胞数占肿瘤细胞总数的百分比进行计算。然后，对10个高倍视野阳性细胞的平均百分比进行计算，以细胞核呈现棕黄色或棕褐色颗粒为阳性细胞，若阳性细胞低于10%为阴性，反之为阳性，其中低度表达(+)为10%～29%，中度表达()为30%～49%，强阳性表达()为≥50%。

1.4 统计学方法

采用SPSS17.0统计软件进行数据处理。计数资料比较采用χ2检验，变量间的相关性采用Spearman相关分析。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

100例患者乳腺癌组织中TopoⅡ蛋白阳性表达率为58.00%(58/100)，阴性表达率为42.00%(42/100)；ER阳性表达率为38.00%(38/100)，阴性表达率为62.00%(62/100)；PR阳性表达率为35.00%(35/100)，阴性表达率为65.00%(65/100)；p53 阳性表达率为27.00%(27/100)，阴性表达率为73.00%(73/100)。100例患者乳腺癌组织中TopoⅡ蛋白阳性表达率明显高于ER、PR、p53(P<0.05)。

年龄为≤50岁、肿瘤大小为≤2 cm、病理类型为浸润性导管癌TopoⅡ蛋白阳性表达率与年龄>50岁、肿瘤大小为>2 cm，病理类型为浸润性小叶癌、原位癌、黏液腺癌、非浸润性癌比较差异无统计学意义(P>0.05)。有淋巴结转移的TopoⅡ蛋白阳性表达率明显高于无淋巴结转移(P<0.05)。见表1。

表1 TopoⅡ蛋白表达与临床病理特征的关系

相关性分析结果显示，TopoⅡ蛋白阳性表达与淋巴结转移和ER、PR、p53表达均呈正相关(r=0.947、0.785、0.627、0.468，均P<0.05)。

3 讨论

乳腺癌是全球女性最常见的恶性肿瘤。有研究[3]显示，我国乳腺癌的患病率呈逐渐增加的趋势，且在近10年患病率增加了30%，严重威胁女性的身心健康。因此，为降低乳腺癌患者的病死率，早期、准确诊断乳腺癌以及判断其预后具有重要的临床意义。

由于乳腺癌的临床症状不显著，大部分乳腺癌患者来院就诊时常处于中晚期，且只能接受化疗，但有研究[4]发现，部分患者由于多药耐药导致化疗效果欠佳，预后较差。目前，有研究[5]证明，胚胎型谷胱甘肽-S-转移酶-π、P-糖蛋白和TopoⅡ等均是导致机体产生多药耐药的重要物质基础，可直接影响乳腺癌患者的治疗效果及预后。有研究[6]证实，TopoⅡ不仅是多药耐药的重要靶酶，而且是某些细胞药物作用的靶点，可介导多种化疗药物产生耐药性。另外，TopoⅡ广泛存在于生物体细胞核内，是控制核酸生理功能以及调节核酸空间结构动态变化的关键酶。有文献[7-9]报道，TopoⅡ高表达可提示瘤细胞的复制速度加快，并说明肿瘤的恶性程度高。因此，可将TopoⅡ作为正常细胞或肿瘤细胞增殖的标志物之一，对评估化疗效果及预后具有十分重要的意义。本研究结果显示，100例患者乳腺癌组织中TopoⅡ蛋白阳性表达率明显高于ER、PR、p53(P<0.05)，TopoⅡ蛋白阳性表达与淋巴结转移和ER、PR、p53表达均呈正相关(r=0.947、0.785、0.627、0.468，均P<0.05)，提示TopoⅡ蛋白在原发性乳腺癌组织中可高表达，可能为评估乳腺癌患者预后的指标之一。马士辉等[10]探讨人表皮生长因子受体2(HER-2)、TopoⅡα以及Ki-67在乳腺癌组织中的表达情况，发现TopoⅡα的扩增或高表达与淋巴结转移均有显著的相关性，并认为，可将TopoⅡα作为评估乳腺癌预后的有效指标之一，该观点与本研究基本一致。

参考文献：

[1] 巩雷，陈萍，程薇，等.荧光原位杂交(FISH)检测乳腺癌中HER-2基因状态与p53、Ki-67、TOPOⅡ表达的相关性[J].现代肿瘤医学，2016，24(21)：3382-3386.

[2] 杨艳，杜云翔，张闯，等.p63、P-gp、GST-π及Topo-Ⅱ在食管鳞癌组织中的表达[J].东南大学学报(医学版)，2016，35(6)：927-931.

[3] Palermo G，Minniti E，Greco M L，et al.An optimized polyamine moiety boosts the potency of human type Ⅱtopoisomerase poisons as quantified by comparative analysis centered on the clinical candidate F14512[J].Chem Commun(Camb)，2015，51(76)：14310-14313.

[4] 王全志，郭艳风，韩芳毅，等.p53与DNA拓扑异构酶Ⅱα在胆囊腺癌中的表达及临床意义[J].南昌大学学报(医学版)，2017，57(1)：30-34.

[5] 程苒，崔军威，刘晓岭，等.不同化疗药物对三阴乳腺癌亚型的作用效果研究[J].中国妇幼保健，2016，31(17)：3609-3612.

[6] 叶新青，蒋奕，刘鹏，等.乳腺癌蒽环类药物化疗疗效与TOPOⅡα、HER-2的关系[J].诊断病理学杂志，2015，22(1)：38-40，44.

[7] 魏丽，邓为民.雌激素受体β亚型在乳腺癌内分泌治疗耐药中的作用[D].天津：天津医科大学,2015.

[8] 柴其翔，王季石.调控血红素加氧酶-1诱导K562A02细胞增殖、凋亡及耐药机制研究[D].贵阳：贵阳医学院，2015.

[9] 尹新红，曹翠丽.HER2、VEGF、Ki67、TOPOⅡα在乳腺良恶性疾病中表达部位的比较[D].石家庄：河北医科大学，2016.

[10] 马士辉，凌飞海.乳腺癌组织中HER-2、TOPOⅡα、Ki-67的表达及临床意义[J].哈尔滨医药，2016，36(5)：504-506.