肖跃华

鼻腔鼻窦鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma of nasal cavity and paranasal sinuses,SNSCC)是临床比较常见的1种恶性肿瘤，在鼻腔鼻窦恶性肿瘤中占比约为80%，该病的发生发展有着多因素以及多阶段特点[1]。在肿瘤恶化的过程当中涉及到人体凋亡机制的紊乱以及癌基因的活化，其中Survivin是凋亡抑制蛋白(IAP)家族当中最强的1种，在大部分的肿瘤组织当中广泛表达，但是在健康组织当中低表达或者不表达[2]。研究人员发现Survivin与肿瘤的发生以及患者预后有重要联系，同时可以作为治疗癌症的重要靶点。临床上对Bcl-2的研究比较深入，与人体细胞的凋亡存在直接的联系[3]。当前关于Survivin以及Bcl-2在SNSCC中的表达及其相关性还缺乏深入的研究，本研究应用免疫化学法检测SNSCC患者的Survivin以及Bcl-2表达，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取2013年1月至2013年12月我院收治的SNSCC患者35例，其中男性19例、女性16例，年龄29～56岁，平均(41.2±2.3)岁，其中高分化患者9例、中分化患者16例、低分化患者10例。同时选取鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤(SNIP)患者35例，男性20例、女性15例，年龄26～59岁，平均(39.1±2.2)岁；并选取下鼻甲黏膜患者35例，男性22例、女性13例，年龄26～57岁，平均(42.9±2.3)岁。3组患者资料完整，术前均未进行放化疗，一般资料有可比性(P>0.05)。

1.2 方法

本研究使用Survivin兔抗人抗体、Bcl-2鼠抗人抗体、DAB显色剂以及免疫化学试剂盒(中杉金桥公司生产)。具体实验步骤方面，全部标本使用甲醛固定，使用石蜡包埋，切片的厚度为3 μm。使用免疫组织化学法对切片进行脱蜡以及脱水处理，孵育15 min。标本添加Survivin孵育20 min，浓度为1∶100。使用磷酸盐缓冲液当作阴性对照。然后滴加Envision孵育20 min后进行DAB显色，复染、脱水之后封片，显微镜条件下进行观察[4]。

1.3 判断标准

标本在300倍视野下观察，选取5个视野，单个视野选取100细胞，计算阳性细胞百分比。表达阴性(-)：计数阳性细胞占比<10%；表达弱阳性(+)：计数阳性细胞数占比<30%；表达中度阳性(++)：计数阳性细胞占比30%～60%；表达强阳性(+++)：计数阳性细胞数占比>60%，同时染色为棕黄色[5]。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 3组患者Survivin及Bcl-2阳性表达比较

SNSCC患者以及SNIP患者的Survivin表达率分别为86.6%(31/35)、68.6%(24/35),显著高于下鼻甲黏膜组0%(0/35)(χ2=6.9532、5.2531，P均<0.05)；SNSCC及SNIP患者之间对比无明显差异(P>0.05)。SNSCC患者的Bcl-2表达率为77.1%(27/35)，显著高于SNIP患者的51.4%(18/35)以及下鼻甲黏膜组患者的37.1%(13/35)，三者两两差异均有统计学意义(χ2=6.1593、4.8462、5.1843，P均<0.05)。

2.2 不同分化SNSCC患者Survivin、Bcl-2表达的比较

在不同分化SNSCC患者的组织当中，肿瘤分化越高，患者的Survivin表达越低，但差异无统计学意义(P>0.05)；在不同分级SNSCC患者的组织当中，肿瘤分化越高，患者的Bcl-2表达越低，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 不同分级SNSCC患者Survivin及Bcl-2表达对比/例

3 讨论

研究人员于二十世纪末首次使用细胞蛋白酶受体通过杂交筛选分离得到Survivin，并且将其定位在17q25，是IAP家族成员当中最小的一种，有着抗凋亡功能以及有丝分裂调节的功能[6]。相关研究的结果显示，IAP家族当中，Survivin的抗凋亡效果最为显著[7]。Survivin在正常的人体组织当中低表达甚至不表达，但是在肿瘤组织当中表达广泛，例如乳腺癌、肺癌、前列腺癌、结肠癌、胰腺癌、胃癌晚期淋巴瘤以及神经纤维瘤等[8-9]。Survivin在肿瘤组织当中的表达处于失控状态，这一问题意味着肿瘤在进展的过程当中广泛存在着凋亡抑制问题。截止到目前为止，Survivin的抗凋亡作用途径还不够明确，部分研究人员认为Survivin能够直接作用到细胞凋亡过程当中终末效应酶从而发挥细胞凋亡的调节效果，同时参与到细胞周期调控以及肿瘤血管生成过程当中[10]。

本研究使用免疫化学法检测SNSCC患者当中Survivin的表达率阳性率，结果显示阳性率为88.6%，与此同时下鼻甲黏膜患者当中均未见表达，这表明Survivin在人体肿瘤组织当中的表达有着特异性，意味着Survivin参与到SNSCC发生发展的过程当中，同时有着促进肿瘤发展的效果。Survivin在人体肿瘤当中的表达特异性，导致Survivin可以当作基因治疗肿瘤的新靶点。本研究发现SNSCC患者随着组织分化程度的下降，Survivin表达的阳性表达率上升，不过差异无统计学意义(P>0.05)。SNIP患者当中的Survivin蛋白表达显著高于下鼻甲黏膜患者，同时差异有统计学意义(P<0.05)，同时染色的范围以及强度也跟SNSCC患者不同，这意味着SNIP患者有着持续生长以及恶化的发展趋势。除此之外，Survivin在SNIP患者到SNSCC患者当中的表达越来越高。有研究人员发现，Survivin表达在初发SNSCC患者以及SNIP患者、复发SNSCC患者以及SNIP患者之间有明显的区别，这意味这Survivin在SNSCC患者的恶变过程当中有着不容忽视的重要影响[11]。

Bcl-2作为细胞凋亡的重要抑制剂参与到细胞死亡的过程当中，能够抑制各种病理因素以及生理因素诱发的细胞凋亡，在肿瘤形成的过程当中有着重要的影响[12-14]。本研究的结果显示，SNSCC患者当中Bcl-2表达阳性率高达77.1%，下鼻甲黏膜患者当中的阳性率仅为37.1%，二者之间有明显区别(P<0.05)。随着SNSCC患者分化程度的下降，Bcl-2阳性表达率也越来越高，差异有统计学意义(P<0.05)。这意味着Bcl-2通过抑制肿瘤凋亡而参与到SNSCC发生发展的过程当中。Survivin同Bcl-2都属于凋亡抑制蛋白，不过二者抑制凋亡的作用途径存在区别。Bcl-2主要是借助于干扰细胞色素从线粒体当中释放从而抑制细胞凋亡。SNSCC患者当中Survivin以及Bcl-2 2种不同抗凋亡的机制能够发挥协同效果，从而进一步增强抗凋亡作用，促进SNSCC出现。Survivin在SNSCC患者组织当中高表达但是在正常下鼻甲组织当中不表达的特征，为临床上SNSCC患者的基因治疗提供可靠的依据。

综上所述，Survivin及Bcl-2表达与SNSCC的发生发展有重要的联系，可以作为基因治疗的靶点。

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