李海英

（湖南中医药大学第一附属医院 医学检验与病理中心，湖南 长沙 410007）

0 引言

系统性红斑狼疮(SLE)为一种以青年女性为发病在主体的累及多脏器的自身免疫性炎症性结缔组织病，其诱发因素目前尚未明确，临床医学认为，其为遗传因素、环境因素及雌激素水平等多种因素共同作用下诱发的自身免疫性疾病。肾脏为 SLE的主要侵袭器官，患者的肾脏受累后而引发肾小球肾炎被称为狼疮性肾炎(LN)，对于LN的发病机制目前尚未见确切的报道，该病的病理学改变也呈现出多样化。对于患者而言准确的预测狼疮性肾炎活动性，是提高患者生存质量及预后效果的重要指标[1]。因此为患者寻找可有效评价狼疮性肾炎活动性的临床指标对患者的诊断及治疗均具有重要的现实意义。作者为探讨血清、尿液TWEAK对狼疮性肾炎活动性的预测及其机制，将63例LN患者及15例正常参照者纳入至本次研究中，观察TWEAK于肾组织内的表达，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

将2015年8月至2018年1月至我院接受干预治疗的63例LN患者纳入本次研究中，同时将15例正常参照者作为本次研究的对照数据。63例LN患者中包含男20例，女43例；患者年龄16-49岁，平均（36.2±10.6）岁，入选的狼疮性肾炎患者均符合美国风湿病学会（2009年）修订的SLE分类标准，狼疮性肾炎临床诊断标准：经临床检验（肾活检病理证实、持续性蛋白尿及管型）诊断确诊为SLE患者，入选的狼疮性肾炎患者均接受了肾脏组织活检，患者的病理可分成为Ⅲ型5例、Ⅳ型37例及21例Ⅴ型。同时选取15例体检正常者纳入研究的参照组中，参照组健康体检者均无合并患者高血压、糖尿病及其他慢性疾病，自身抗体检测及各项生化指标检查均显示阴性，其中包含男3例，女12例；患者年龄在19-36岁，平均（28.3±4.2）岁。入选的研究参与者均自愿签署参与研究知情同意书。两组的基本资料间比较无显著的差异性（P＞0.05）。

1.2 方法

（1）收集相关指标：入选的研究对象均接受血沉、血尿常规、免疫球蛋白、抗-dsDNA、肝肾功能、抗核抗体、补体成分C4及补体成分 C3等多项检测。运用间接免疫荧光法（德国欧蒙公司提供试剂盒）对抗核抗体及抗-dsDNA进行半定量检测；由我院人民医院风湿科实验室检测研究对象的自身抗体。根据患者的检测结果及相应的临床表现评价研究对象的疾病活动指数(SLEDAI)评分；对肾穿刺组织检验标本实施Masson 染色、免疫荧光、HE、PAS及PASM，运用光镜及免疫荧光显微镜观察研究入选者的肾组织活检标本，同时根据国际肾脏病协会的病理分类对入选患者进行分型，以Austin 半定量方法判定患者的慢性指数(chronic index，CI)及疾病活动性指数(activity in-dex，AI)。同时运用ELISA 试剂盒检测入选者的血清、尿液内的TWEAK及MCP-1水平。

（2）运用免疫组化活检测入选者的肾组织：运用二甲苯脱蜡处理TWEAK的水平石蜡标本，同时运用酒精水化。对TWEAK标本分别进行微波及高压抗原修复，在其中加入密度为0.3%的H2O2溶液，同时滴加正常的动物血清，静置过夜，然后滴加一抗将其放置到温度为4℃的环境下过夜，最后滴加链霉亲和素（生物素化过氧化物酶复合物）及生物素化二抗；观察DAB，确定显色后，运用苏木精进行复染，最后进行脱水及封片。免疫组的数据分析运用Image Pro-Plus 16.0图像分析软件进行，同时运用高倍镜下累计光密度的平均值表示患者的肾内TWEAK水平。

1.3 统计学处理

收集到的数据均经过 SPSS 21.0软件分析及统计，数据运用±s表示。组间比较运用One Way-ANO-VA进行分析，组间数据对比运用独立样本t检验；同时运用Pearson法对数据进行相关性分析。

2 结果

2.1 狼疮性肾炎患者尿液及血清中的MCP-1及TWEAK水平

63例LN患者血清TWEAK值为（43.68±6.02）μg/L,MCP-1值 为（0.16±0.02）μg/L， 其 尿 液中 的 TWEAK值 为（47.86±12.05）μg/L,MCP-1值为（0.13±0.01）μg/L；15例正常参照者的血清 TWEAK值 为（15.26±2.04）μg/L,MCP-1值 为（0.06±0.02）μg/L， 其 尿 液 中 的 TWEAK值 为（17.15±2.06）μg/L,MCP-1值 为（0.06±0.02）μg/L；由此可见，狼疮性肾炎患者尿液及血清中的MCP-1及TWEAK水平均显著高于正常参照者，两组数据间对比差异性显著（P＜0.05)。

2.2 TWEAK 在肾组织中的表达

正常参照者中的肾脏小管上皮细胞鲜见肾小球表达，但呈现显著的TWEAK表达；LN患者中肾小管呈现显著增强，肾小球的表达明显增加，其肾内TWEAK表达水平与正常参照者相比显著上升(P＜0.05)，Ⅳ型的上升程度更加明显(P＜0.05)；患者血清中的TWEAK水平和狼疮性肾炎患者的活动指数(SLEDAI)评分为正相关性(r=0.565，P＜0.05)，同时和补体C3间为负相关性(r=-0.542，P＜0.05)；狼疮性肾炎患者尿液中的SLE-DAI评分与TWEAK之间呈现正相关性(r=0.843，P＜0.05)，同时和补体C3之间为负相关性(r=-0.584，P＜0.05)。

3 讨论

TWEAK与狼疮性肾炎的病理变化及发生机制之间存在紧密的关系，其在这个过程中发挥着重要的作用，对其进行研究可为临判断及指导狼疮活动的程度提供有价值的参考[2]。本次研究结果显示：正常参照者中的肾脏小管上皮细胞鲜见肾小球表达，但呈现显著的TWEAK表达；LN患者中肾小管呈现显著增强，肾小球的表达明显增加，其肾内TWEAK表达水平与正常参照者相比显著上升(P＜0.05)，Ⅳ型的上升程度更加明显(P＜0.05)[3-5]。为患者进行肾穿刺活检病理检查是临床医学公认的诊断LN和评判疾病活动性的金标准，为最大限度减少穿刺对患者的创伤同时缓解患者的经济压力，临床可运用联合检测血清及尿液TWEAK水平的方法为患者诊断，同时有效抑制患者的TWEAK可能是临床干预治疗LN 患者的一个的新方向[6]。