黄峥 姜新华 吴小明

尿液巨细胞病毒核酸检测结合全血细胞计数在小儿巨细胞病毒感染诊断中的应用

黄峥 姜新华 吴小明

目的 调查儿童人巨细胞病毒（HCMV）感染状况，探讨HCMV DNA、白细胞计数与分类的联合检测在小儿HCMV感染诊断与治疗中的应用价值。方法 采用FQ-PCR方法检测518例不明原因支气管炎、上呼吸道疾病、发热等患儿尿液中的HCMV DNA含量，同时采集EDTA抗凝全血，进行全血细胞计数，统计分析患儿具体信息、诊断和检测结果。结果 HCMV DNA阳性率49.2%，男患儿在1～≤3岁年龄段的检出率最高，女患儿阳性检出率则随年龄增长逐年下降；淋巴细胞计数与比例、单核细胞计数在治疗前后与正常对照比较，差异有统计学意义（P＜0.01），而中性粒细胞比例则较正常对照显著下降（P＜0.01）；儿童HCMV感染主要累及肺脏，引起疾病复杂多样并以呼吸道疾病为主；经1周治疗后，HCMV DNA病毒载量与发病初期比较，差异有统计学意义（P＜0.01）。结论 不同年龄组儿童间HCMV感染率不同，HCMV感染与性别有关，HCMV感染可导致WBC数量异常增高，尿HCMV DNA定量测定与WBC计数和分类的联合检测在不明原因呼吸道感染患儿的早期病因诊断与抗病毒治疗动态监测及疗效判断中有参考价值。

HCMV DNA 白细胞 支气管炎 呼吸道感染 儿童

巨细胞病毒 （Human cytomegalovirus，HCMV）是世界范围内常见的导致新生儿产后感染和儿童病毒性感染的病原微生物［1］。活动性HCMV感染，其临床表现复杂多样，病情轻重不一，易漏诊、误诊；在免疫功能低下的人群中，可被激活而发生显性感染和再次感染，累及多脏器、多系统，或可造成严重伤害［2］。本文探讨HCMV DNA、白细胞计数与分类的联合检测在小儿HCMV感染诊断与治疗中的应用价值。现报道如下。

1 临床资料

1.1 一般资料 2011年6月至2016年3月衢化医院儿科收治的疑似呼吸道病毒感染患儿518例，男326例，女192例；年龄2个月～14岁。以同期体检的健康儿童94例为正常对照。

1.2 方法 采用FQ-PCR方法检测患儿晨尿中的HCMV DNA含量，试剂盒由杭州艾康生物技术有限公司提供，仪器采用罗氏cobas z 480荧光定量PCR仪；白细胞（WBC）计数与分类应用Sysmex XE-2100五分类血液分析仪，sysmex原装配套试剂。治疗1周后复查。以HCMV-DNA＞500IU/ml为阳性。

1.3 统计学方法 采用SPSS18.0统计软件。计量资料用t检验，计数资料用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 518例疑似呼吸道病毒感染患儿中，HCMV DNA阳性255例，阳性率接近50%。见表1。

表1 不同性别与各年龄段患儿HCMV-DNA阳性检出情况［n（%）］

2.2 合并HCMV-DNA阳性的相关疾病分析，见表2。

表2 HCMV-DNA阳性的相关疾病所占比例（n）

2.3 治疗前后HCMV DNA定量、WBC计数与分类结果的变化 见表3。

表3 治疗前后HCMV DNA定量、WBC计数与分类结果的变化（x±s）

3 讨论

HCMV侵入人体后，可产生持续性感染，引起严重疾病，对优生优育及儿童的健康影响较大［3］。本资料结果表明，＜7岁儿童是活动性HCMV感染的高发人群，在各年龄段男患儿的检出率均高于女患儿，表明其感染与性别有一定关系，这一结果与武汉地区［1］的报道存在区别，这可能是地域差异导致，也可能是检测方法灵敏度不同引起。在不明原因的支气管炎、上呼吸道疾病、发热等症状的＜3岁患儿中，56.8%的男患儿和49.1%的女患儿是因HCMV感染而发病，阳性检出率54.0%，显著高于其他年龄组（P＜0.01）。总体阳性检出率49.2%，与湖南（46.3%）［4］、辽宁（45.0%）［5］等地报道结果相近。HCMV具有潜伏-活化的生物学特性，仅在个体免疫系统出现问题、免疫力低下时，才易致病［6］。在本资料中，随着年龄增长，不论男女患儿的HCMV DNA阳性检出率均逐渐下降，＞7岁降为0，这与儿童的机体免疫力随年龄增长不断增强有关。

HCMV感染于胎儿和新生儿可表现为中枢神经系统损害和先天畸形，而在婴幼儿则多表现为器官疾病，可影响多个脏器，缺乏特异性［7］。本资料显示，衢化地区＜14岁儿童感染HCMV后主要以呼吸道疾病为主，与国内其他文献［8］报道结果相似，其中支气管炎所占比例最大（39.9%），其次为上呼吸道疾病（12.0%）、肺炎（9.3%）；感染主要累及的器官是肺脏，与陈平［8］等报道一致。此外，HCMV感染还可导致儿童胃肠炎、肝功能异常、惊厥等，有资料显示，HCMV感染与难治性溃疡性结肠炎存在关系［9］，而HCMV肝炎则可引起婴幼儿胆汁性肝硬化，加重肝脏损害［10］，提示如临床症状不典型伴有上述症状表现又无明确原因，应考虑HCMV感染存在的可能。

WBC计数作为细菌和病毒感染最常用的指标，通常认为细菌感染时增高而病毒感染时降低，但本资料结果显示，255例HCMV感染患儿中有75%在发病初期WBC异常增高，即使治疗1周后，仍有65%异常增高，其余则在正常范围，未发现异常降低的患儿，且发病初期与治疗1周后WBC计数值均显著高于正常对照（P＜0.01）。分析WBC分类结果，则符合病毒感染的临床表现，淋巴细胞数量与比例、单核细胞比例在发病初期与治疗1周后均较正常对照显著增高（P＜0.01），而中性粒细胞比例则显著低于正常对照（P＜0.01）。FQ-PCR检测HCMV-DNA，在儿童HCMV感染早期诊断中的应用已获得广泛认可［11］，检测所需的尿液标本取材方便、无创，易被家长和小儿接受。检测原理是HCMV最易侵犯婴幼儿管道上皮细胞，尿液中可检测出HCMV是由于HCMV侵袭肾小球及肾小管上皮所致，其排毒的多少与尿液中受感染的上皮细胞含量有关。有文献报道［12］，该法灵敏性和特异性均高于pp65抗原检测法和CMV-IgG法。但其在疗效判断中的应用价值报道甚少。本资料结果显示，HCMV感染患儿经1周治疗后，HCMV DNA病毒载量较发病初期下降显著（P＜0.01），表明治疗的有效性；与正常对照比较，无论发病初期还是1周治疗后，HCMVDNA病毒载量的差异均有统计学意义（P＜0.01），提示病毒受到抑制但并未彻底清除，HCMV感染的治疗周期至少＞1周。

综上所述，FQ-PCR对HCMV-DNA定量测定可作为病毒活动性感染的一种敏感、特异、快速的检测方法，临床诊断WBC增高时不能排除HCMV感染的可能，结合WBC分类与HCMV DNA量化结果有助于评价感染状态，是判断药物治疗效果的有效手段。

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Objective To investigate the status of HCMV infection in children，combined detection of DNA and white blood cell count and classif i cation in the application value in the diagnosis and treatment of HCMV infection in children. Methods HCMV DNA content in urine of 518 patients with unexplained bronchitis，upper respiratory tract disease and fever were detected by FQ-PCR. EDTA anticoagulant blood was collected for CBC，analysis of children with specif i c information，diagnostic and statistical results. Results The positive rate of HCMV DNA was 49.2%，the male patients in the highest detection rate of 1～ is less than or equal to 3 years of age，the positive rate of female children decreased year by year；compared with the control group，there was significant difference in the percentage of lymphocyte count and the proportion of mononuclear cells（P＜0.01），while the proportion of neutrophils decreased signif i cantly（P＜0.01）. HCMV infection in children was mainly involved in the lung，resulted in a variety of diseases，including respiratory diseases；after a week of treatment，HCMV DNA viral load compared with the initial stage，the difference was statistically signif i cant （P＜0.01）. Conclusion HCMV infection rates are different among children of different age groups，HCMV infection is related to sex. HCMV infection can lead to abnormal increase in the number of WBC，the quantitative detection of urinary HCMV DNA combine the detection of WBC count and classif i cation in the early diagnosis of children with respiratory infection of unknown origin have reference value，also take effect for the dynamic monitoring and evaluation of therapeutic eff i cacy of antiviral therapy.

Human cytomegalovirus DNA Leucocyte Bronchitis Respiratory tract infection Children

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