李 杨,赵 野,梁海英,贾玉玺*

(1 杭州市第三人民医院 皮肤科,浙江 杭州310000;2.吉林大学中日联谊医院 a.皮肤科;b.输血科,吉林 长春130033)

复方倍他米松对小鼠白癜风模型抗氧化的影响

李 杨1,赵 野2a,梁海英2b,贾玉玺2a*

(1 杭州市第三人民医院 皮肤科,浙江 杭州310000;2.吉林大学中日联谊医院 a.皮肤科;b.输血科,吉林 长春130033)

白癜风是一种常见的皮肤或粘膜色素脱失性疾病，近年来研究表明黑素细胞的缺失在白癜风的发病机制中扮演着至关重要的角色[1]，相关研究结果显示氧化应激可能是导致黑素细胞变性的始动因素，与白癜风的发生和发展有着密切的关系[2]。本研究通过分析复方倍他米松注射液对小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽氧化酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)活力及含量的影响，以阐明复方倍他米松在抗氧化作用方面治疗白癜风的作用机制。

1 材料与方法

1.1样品来源

复方倍他米松(商品名：得宝松国药准字J20140160,进口药品注册证号H201301888批号6BBKADAC03)。过氧化氢 (开原化学试剂一厂 批号20161109)。

1.2试剂

GSH试剂盒，批号：20120213；SOD试剂盒，批号：20120223；MDA试剂盒，批 号：20122213；均为南京建成生物工程制品研究所生产。

1.3小鼠白癜风模型的制作

取C57BL/6小鼠40只，体重17.5-20.5 g，雌雄均等，由吉林大学基础医学院动物实验中心提供，合格证号：SCXK(J2016-0003)。采用随机数字表法各取10只为正常对照组、模型对照组、阳性对照组(复方卡力孜然酊)、实验组(复方倍他米松)。所有小鼠电动剃毛刀剃去背部黑色短毛约2 cm×2 cm作为实验区。除正常对照组外，模型对照组、阳性对照组、实验组小鼠均在皮肤实验区涂抹5%过氧化氢0.5 ml，每天2次，平均每日剃毛1次，连续50天。正常对照组在实验区涂抹等量蒸馏水，每天2次，平均每日剃毛 1次，连续50天。模型对照组、阳性对照组、实验组自第11天开始给药，阳性对照组涂抹等量0.5 ml复方卡力孜然酊，模型组涂抹等量0.5 ml蒸馏水，实验组皮损局部用二氧化碳点阵激光造孔后外涂复方倍他米松0.5 ml，每周1次。于治疗第50天，以3%水合氯醛10 ml/kg腹腔注射麻醉，摘除眼球取血，测量血清中的SOD、GSH-Px、MDA含量。

1.4检测方法

采用亚硝酸盐法测定血清SOD活力；硫代巴比妥酸法测定血清MDA的含量；硫代二硝基苯甲酸直接法测定GSH-Px活力。

1.5统计学方法

2 结果

模型组小鼠血清中SOD、GSH-Px含量比正常对照组明显降低，而MDA含量明显升高，复方卡力孜然酊组和复方倍他米松组小鼠血清中SOD、GSH-Px含量明显升高， MDA含量明显降低。表明复方卡力孜然酊和复方倍他米松具有治疗白癜风的作用。见表1。

表1 得宝松对白癜风小鼠血清中SOD、GSH-Px、MDA的影响

注：与模型对照组比较*P<0.05，**P<0.011

3 讨论

白癜风是一种获得性色素脱失性皮肤病，病因及发病机制尚未明确，研究表明其与氧化应激、黑素细胞自毁、遗传因素、自身免疫状态、酪氨酸缺乏等因素有关[3]。白癜风治疗相对困难，常见传统的治疗方法有糖皮质激素、免疫调节治疗、准分子光、UVB治疗、中医疗法、手术等，部分患者经上述系统用物后仍不能取得满意疗效，推测其皮损局部免疫可能处于异常状态。笔者采用5%过氧化氢化学脱色法制备白癜风的小鼠模型，模型对照组肉眼观察及切片镜下结果均符合白癜风患者临床和病理特征。氧化应激在致黑素细胞变性中起着至关重要的作用[4-6]，表皮内活性氧族过度聚集使黑素细胞膜脂质合成及循环紊乱，导致黑色素细胞的凋亡和破坏，抗氧化剂如谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、MDA 是脂质发生过氧化反应的终产物，为氧化应激发生的指标。Yildirim M等[7]研究发现白癜风患者皮损活体组织中MDA含量较正常人皮肤中的含量明显升高，推测白癜风患者体内氧化应激的失衡导致活性氧族过度产生，继而介导脂质过氧化，诱导黑色素细胞的凋亡。

复方倍他米松注射液是一种长效类糖皮质激素，由倍他米松磷酸二钠及二丙酸倍他米松组成，其中倍他米松磷酸二钠溶于水，在体内可被迅速吸收而起效,二丙酸倍他米松微溶于水，在体内可缓慢释放而维持疗效具有抑制炎症反应、降低毛细血管通透性、抑制免疫反应及减轻脂质过氧化反应等作用[8]。有研究表明糖皮质激素可以改善急性睾丸扭转复位后睾丸抗氧化能力及精子的活力[9]，本实验发现，复方倍他米松注射液可显著增加小鼠血液中SOD、GSH-Px的含量，降低可致细胞损伤的脂质过氧化分解产物MDA的含量。说明复方倍他米松注射液具有清除氧自由基的抗氧化作用，对白癜风可以起到治疗作用。

总之，本研究表明复方倍他米松注射液改变了实验性白癜风小鼠的某些抗氧化参数，推测氧化应激在白癜风的发病机制中可能起重要作用，然而，尚需要进一步研究，以验证通过抗氧化治疗是否能作为治疗白癜风患者有效方法，并进一步阐明其发病机制。

[1]Le Poole IC,Das PK,van den Wijngaard RM，et al．Review of the tiopathomechanism of vitiligo:a convergence theory[J]． Exp Dermatol，1993，2(4):146.

[2]蔄茂强，PETER M． Elias，氧化应激与表皮通透屏障功能降低性皮肤病[J]．中国皮肤性病学杂志，2013，27(4):408.

[3]Abu Tahir M，Pramod K，Ansari SH，et al.Current remedies for vitiligo [J].Autoimmun Rev，2010，9(7)：516.

[4]陈惠英，许爱娥.白癜风表皮微环境研究进展[J].中国皮肤性病学杂志，2008，22(2)：113.

[5]刘邦民，坚 哲，李春英，等.抗氧化应激中药在白癜风治疗中的潜在应用[J].中国美容医学，2012，21(8)：1 363.

[6]Farahi-Jahromy A,Fallahzadeh MK,Ashkani-Esfahani S，et al．Decreased glucose-6-phosphate dehydrogenase levels in vitiligo patients: further evidence of oxidative stress[J]．Advanced Biomedical Research,2014，3(1):1.

[7]Yildirim M，Baysal V，Inaloz HS，et al.The role of oxi-dants and antioxidants in generalized vitiligo at tissue level[J].J Eur Acard Dermatol Venereol，2004，18(6)：683.

[8]Almodhen F，Loutochin O，Jednak R，et al． Protective role of hypothermia on ischemia of prepubertal rodent testicle[J]．Urology，2011，77(3):762.

[9]朱 江，李颖毅，张 辉.局部亚低温联合糖皮质激素对急性睾丸扭转复位后睾丸抗氧化能力与精子活力的影响[J].中国性科学，2016，25(8)：16.

吉林省科技厅项目(3D515P033430)

*通讯作者

1007-4287(2017)12-2185-02

2017-02-05)