许宏俊，周春山，黄楚丽，陈兰香

（广东普宁华侨医院，广东 揭阳 515300）

高血压伴颈动脉粥样硬化患者血清ANGPTL2的表达及临床价值

许宏俊，周春山，黄楚丽，陈兰香

（广东普宁华侨医院，广东 揭阳 515300）

目的探索高血压患者血清血管生成素样蛋白2（ANGPTL2）水平与颈动脉粥样硬化（CAS）斑块、颈动脉中膜厚度（IMT）之间的关系。方法 自2014年6月～2015年6月，选择我院127例高血压患者和59例健康体检者作为研究对象。收集各自的血清标本并采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测血清中ANGPTL2的水平。颈动脉粥样硬化程度根据斑块风险高低及IMT厚度来进行评价。结果 根据斑块风险高低分为无斑块组（47例）、低风险斑块组（38例）及高风险斑块组（42例）；根据IMT厚度分T1组（＜0.9 mm，46例）、T2组（0.9～1.1 mm，44例）、T3组（＞1.1 mm，37例）。吸烟史（P=0.042）和总胆固醇（P=0.029）与高风险斑块显著相关；总胆固醇（P＜0.001）、低密度脂蛋白（P=0.018）、甘油三酯（P=0.026）和尿酸（P=0.011）与IMT厚度显著相关。高血压患者血清ANGPTL2水平显著高于健康对照者（1944.8±195.3比979.7±155.3，P＜0.001）；不同斑块风险组及IMT厚度组患者与对照组血清ANGPTL2水平有显著差异（均P＜0.001），且随斑块风险升高及IMT变厚，血清ANGPTL2表现逐渐升高趋势。Spearman相关性分析显示血清ANGPTL2水平和总胆固醇（r=0.468，P=0.016）、甘油三酯（r=0.551，P＜0.001）和低密度脂蛋白（r=0.527，P＜0.001）正相关。结论 血清中ANGPTL2的表达水平同高血压患者血脂指标密切相关，其水平的改变可一定程度反映颈动脉粥样硬化斑块的发生发展。

颈动脉粥样硬化；高血压；血管生成素样蛋白2；血清

颈动脉粥样硬化（CAS）的形成是一种慢性炎症过程，贯穿于脂质条纹的出现到斑块的形成的全过程，它已被确定为缺血性脑血管疾病的高危因素[1]。血管生成素样蛋白（ANGPTL）是近年来发现的与血管发生关系紧密的糖蛋白，目前研究发现主要由内脏脂肪细胞表达分泌的血管生成素样蛋白2（ANGPTL2）在调节脂肪组织慢性炎症反应、脂质代谢等过程均发挥重要作用[2-3]；动物实验也证实高水平的ANGPTL2可以明显增加动脉粥样硬化斑块面积[4]。目前高血压患者血清ANGPTL2同颈动脉粥样硬化之间的关系的研究尚无权威文献报道。因此，本研究将基于血清层面对ANGPTL2与CAS斑块形成及颈动脉中膜厚度（IMT）之间的关系进行探索。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2014年6 月～2015年6月间选择就诊于我院的伴有颈动脉粥样硬化的原发性高血压患者127例为研究对象，其中男性72例，女性55例，平均年龄（61±13.8）岁，年龄31～77岁。所选患者均符合我国2010年修订版的高血压诊断标准。患者入选标准需排除继发性高血压、各种慢性炎症、肿瘤、急性冠脉综合征及免疫系统疾病等。另选取同期我院健康体检者59名作为对照组，其中男35例，女24例，年龄30～75岁，平均年龄（57.89±11.3）岁。血糖、血脂及肝肾功能等均无明显异常。本研究通过我院伦理委员会审核，所有研究对象均签署知情同意书。

1.2 研究方法

1）样本收集

收集所有研究对象清晨空腹时外周静脉血液标本。本院检验科测定血清血糖、尿酸、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白及高密度脂蛋白等指标含量。另外每个研究对象再留取全血约4 mL，4℃促凝管下保存2 h后，3000 r/min×10 min条件下进行血清分离，去沉淀，取上层血清转移至信的1.5 mL无酶EP管内，保存于-80℃冰箱内，待测ANGPTL2含量。

2）颈动脉超声检查

患者取仰卧位，头部向后仰并偏于检测面对侧，以充分暴露检查区域。采用PHILIPS IE33彩色多普勒超声诊断仪，探头频率7～12 MHz。依次取纵断和横断切面，由下到上依次探查颈总动脉、颈动脉窦部、颈外及颈内动脉颅外段。仔细探查管腔狭窄和斑块形成情况，尤其要注意斑块部位、表面特征及回声特点等。我们界定血管内表面光滑，无突起定义为无斑块；表面平滑规则、等回声、高回声的钙化的斑块定义为低风险斑块；而对于那些表面明显不规则低回声、混合回声的斑块定义为高风险斑块。IMT厚度测量选取颈总动脉后壁的内-中膜最厚区域测量内膜内表面至中层表面间的距离。一般选择理想测量部位是颈总动脉远端距离分叉部1 cm处，注意测量时候避开有斑块的部位。根据测量的IMT值分为三分位数，分别为T1组（＜0.9 mm）、T2组（0.9～1.1 mm）和T3组（＞1.1 mm）。

3）血清ANGPTL2含量的检测

采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测血清中ANGPTL2的水平。实验操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。

1.3 统计学方法

实验数据的分析是采用SPSS 13.0统计学软件进行。计量资料以平均数±标准差表示。两组间比较采取t检验或卡方检验。率的比较采取卡方检验、等级资料运用秩和检验。运用秩相关的Spearman方法分析ANGPTL2和血糖、血脂等指标间的相关性。P＜0.05为两组间差异具有统计学意义。

2 结 果

2.1 不同斑块风险、颈动脉内中膜厚度的CAS患者临床资料特点

本研究所有对象根据斑块风险和IMT将127例患者分别分为三组，结果显示吸烟史（P=0.042）、总胆固醇（P=0.029）尿酸（P=0.033）和斑块风险程度间显著相关；而IMT厚度差异同总胆固醇（P＜0.001）、低密度脂蛋白（P=0.018）、甘油三酯（P=0.026）及尿酸（P=0.011）等血清指标水平显著相关。未发现年龄、性别、体重指数及糖尿病史等因素与斑块风险、IMT厚度之间的相关性。见表1。

表1 以斑块风险及IMT为标准分组的临床资料特点

2.2 不同斑块风险、IMT厚度和血清ANGPTL2水平的关系

本研究实验组高血压患者血清ANGPTL2的含量显著高于健康对照组，差异具有统计学意义（1944.8±191.4比979.7±155.3，P＜0.001）。不同的斑块风险组血清水平比较：无斑块组、低风险及高风险斑块组均显著高于健康对照组，差异有统计学意义（P＜0.001）；其中低风险和高风险斑块组较无斑块组血清含量要高，高风险组与低风险组比较，差异均具有统计学意义（P＜0.05）。同理，不同IMT厚度血清水平比较：＜0.9 mm组、0.9～1.1 mm及＞1.1 mm组均显著高于健康对照组，差异有统计学意义（P＜0.001）；其中0.9～1.1 mm及＞1.1 mm组较＜0.9 mm组血清含量要高，0.9～1.1 mm与＞1.1 mm组比较，差异均具有统计学意义（P＜0.001）。见表2。

表2 不同斑块风险、IMT厚度患者血清ANGPTL2结果比较

2.3 血清ANGPTL2含量与血糖、血脂等指标的相关性

Spearman相关分析结果显示：CAS患者血清ANGPTL2水平与总胆固醇正相关（r=0.468，P=0.016），与甘油三酯正相关（r=0.551，P＜0.001），与低密度脂蛋白正相关（r=0.527，P＜0.001）。而同年龄、血糖、尿酸及高密度脂蛋白等指标间未发现明显相关性（P＞0.05）。见表3。

3 讨 论

IMT厚度增加及粥样硬化性斑块的形成是高血压靶器官损害的常见原因之一，是心脑血管疾病风险重要的预测指标[5-6]。临床上高血压伴有CAS的发病率高，探索该类疾病密切相关的血清标志物对风险评估、预后判断意义重大。目前对CAS的病理生理机制研究的主流观点认为是血管组织内持续的慢性炎症反应，其过程涉及到细胞增殖、胞外基质降解、微血管病变及内皮细胞功能失调等因素[7-8]。ANGPTL2作为心血管系统疾病中研究热点，目前多项研究证实它不仅广泛参与上述环节，还可以通过诱导促炎反应、调节血脂代谢（如升高总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇水平）等方面促进粥样硬化的病变进程[2，7]。因此，本研究以伴有CAS的高血压患者为研究对象，基于血清层面探索血清中ANGPTL2的临床价值。

本研究首先依据斑块风险及IMT厚度对其与CAS患者临床资料间关系做一分析。我们观察到斑块风险形成、IMT厚度均与总胆固醇、尿酸含量密切相关，而与性别、糖尿病病史等因素无明显相关性；此外，我们还发现低密度脂蛋白及甘油三酯等指标同IMT厚度高度相关。本研究观察到的高尿酸和高风险斑块之间的相关性和Takayama等[9]研究结果较一致，目前对其机制分析是CAS斑块内的炎症反应是导致斑块去稳定性的重要因素，而尿酸刚好也参与血管平滑肌细胞内的促炎反应途径的调节过程。

表3 血清ANGPTL2水平与血糖、血脂等指标相关性分析

ANGPTL2是内皮细胞炎症反应和CAS疾病中斑块演变的重要调节因子，Farhat等[4]从动物实验模型上也观察到高表达的ANGPTL2可以大大地增加CAS斑块的面积，从而显著地增加发生心脑血管事件的风险。本研究从血清层面分析ANGPTL2与上述各亚组患者之间的关系，结果显示CAS患者血清中ANGPTL2不仅显著高于健康对照组，而且其表达含量的差异与不同斑块风险组、不同IMT厚度间存在关联。高风险斑块组及IMT厚度增加明显的CAS患者血清ANGPTL2含量均显著高于其他各亚组。据我们所知这是首个报道高血压伴有CAS患者血清中ANGPTL2与斑块风险、IMT厚度之间关系的研究。C-反应蛋白（CRP）是动脉粥样硬化风险的重要标志物，徐索文等[10]研究者发现ANGPTL2蛋白水平与血清CRP水平呈正相关。类似地，Farhat等[2，11]研究者在观察冠状动脉疾病（CAD）中循环ANGPTL2的变化规律时发现，CAD患者ANGPTL2的含量不仅明显高于健康受试者，而且其表达含量升高的幅度和冠脉病变的严重程度成正相关。综上结果我们认为血清ANGPTL2或可作为理想的标记物去监测伴有CAS高血压患者斑块形成的进展和预后的判断。

本研究观察到影响CAS患者血清ANGPTL2表达水平的相关因素有总胆固醇、低密度脂蛋白和甘油三酯等指标。近年来研究发现血管病变与血管外周脂肪组织（PVAT）密切相关，PVAT分泌的促炎和抗炎因子均可直接影响动脉粥样硬化的发生发展[12]。实验证明PVAT的旁分泌ANGPTL2可以参与血管的重建以及血管损伤诱导的内膜增生的过程[13]。粥样斑块的慢性炎症反应过程中，ANGPTL2参与其中发挥生物学效应主要依赖整合素受体，从而促进细胞间粘附因子的表达上调和介导炎性反应。这点和上述报道的研究者观察到的结论类似，他们证实了ANGPTL2介导的炎症反应可以升高血浆总胆固醇、低密度脂蛋白的水平，从而加重粥样硬化的进程。

综上所述，伴有CAS的高血压患者血清中ANGPTL2的表达水平同血脂指标密切相关，其水平的改变可一定程度反映颈动脉粥样硬化斑块的发生发展。ANGPTL2参与粥样硬化发生发展的深入机制还有待后续研究，另外，本研究观察到血清ANGPTL2的临床价值还有待更多前瞻性研究给以证实和明确。

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ObjectiveTo explore the relationship between serum vascular angiopoietin-like protein 2(ANGPTL2) in hypertension patients with carotid atherosclerosis (CAS) and plaques,carotid intima-media thickness(IMT).Methods From June 2011 to June 2012,serum ANGPTL2 expression was investigated in 127 patients with CAS and 59 healthy nornlal controls by using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) technique.The assessment of the degree of carotid atherosclerosis was based on the risk of plaques and IMT thickness.Results According to the plaque risk,all patients were divided into three groups: non-plaque group (47 cases),lowrisk plaque group (38 cases) and high-risk plaque group (42 cases).According to IMT thickness,all patients were also divided into three groups: T1 group (＜0.9mm,46 cases),T2 group (0.9-1.1mm,44 cases),T3 group (＞ 1.1mm,37 cases).High-risk plaque was signi fi cantly associated witha history of smoking (P = 0.042),uric acid (P = 0.033) and total cholesterol (P = 0.029); IMT thickness was significantly correlated with total cholesterol (P ＜0.001),LDL (P= 0.018),triglycerides (P = 0.026) and uric acid (P = 0.011).Serum ANGPTL2 levels in hypertension patients were signi fi cantly higher than in healthy controls (1944.8 ± 195.3 vs.979.7 ± 155.3,P ＜0.001); There were significant differences betweenfidderent plaque groups,IMT group and control group according to the serum ANGPTL2 levels (all P ＜0.001).With an increased risk of plaque and IMT thickening,serum ANGPTL2 showed gradually increasing trend.Spearman correlation analysis showed that serum ANGPTL2 levels were positively correlated with total cholesterol (r= 0.468,P = 0.016),triglycerides (r = 0.551,P ＜0.001) and LDL (r = 0.527,P ＜0.001).Conclusion The expression levels of serum lipid levels in hypertension patients with CAS are closely related ANGPTL2,the change of serum ANGPTL2 may reflect the development status of carotid atherosclerotic plaques.

Carotid atherosclerosis;Hypertension;Angiopoietin-like protein 2;Serum

R544.1

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ISSN.2095-8242.2017.065.12748.04

本文编辑：吴玲丽