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(浙江省乐清市人民医院妇产科，浙江 乐清 325600)

子宫内膜异位症患者异位及在位内膜组织中BCAR1的表达及其意义

何海美，潘晔

(浙江省乐清市人民医院妇产科，浙江乐清325600)

目的观察子宫内膜异位症(EMS)患者异位和在位内膜组织中抗雌激素药物耐药性基因1(BCAR1)表达，并分析其临床意义。方法选取2016年2月至2016年12月在浙江省乐清市人民医院接受治疗的100例EMS患者为研究对象(EMS组)，同时选取同期在浙江省乐清市人民医院接受体检筛查的100例健康成年人作为对照组。观察两组内膜组织中BCAR1的表达和血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、癌抗原125(CA125)水平，比较EMS患者异位内膜及在位内膜组织中BCAR1的差异，分析子宫内膜异位症患者BCAR1表达与VEGF、TNF-α、IL-1β、CA125水平的相关性。结果EMS组患者组织中的BCAR1阳性表达率为85.00%，明显高于对照组(χ2=106.676，Plt;0.001)；EMS组患者血清VEGF、TNF-α、IL-1β、CA125水平分别为228.72±12.35ng/L、46.33±5.96pg/mL、165.82±13.02ng/L、332.46±12.13U/mL，明显高于对照组(t值分别为-39.764、-41.339、-24.083、-97.792，均Plt;0.001)；EMS患者异位内膜中BCAR1阳性表达率为95.0%，明显高于在位内膜中BCAR1阳性表达率(χ2=15.686，Plt;0.001)；子宫内膜异位症患者BCAR1阳性表达率与血清VEGF、TNF-α、IL-1β、CA125水平明显正相关(r值分别为0.587、0.612、0.542、0.598，均Plt;0.05)。结论EMS患者的异位内膜组织中BCAR1阳性表达率较高，且与患者血清VEGF、TNF-α、IL-1β、CA125水平正相关，可作为临床监测的重要指标。

子宫内膜异位症；雌激素；血管生长因子；炎症因子；抗雌激素药物耐药性基因1

子宫内膜异位症(endometriosis，EMS)的病情进展可以导致患者痛经症状的加剧，并可以促进异位症病灶对于正常卵巢功能的破坏，导致继发性脏器功能的损害。流行病学研究显示，EMS的发病率可达(455～566)/10万人，且在具有盆腔慢性疾病的人群中，其发病率更高[1-2]。在探讨EMS的发病机制的过程中发现，细胞生物学相关因子的改变，可以通过影响到EMS患者的异位症病灶组织中腺体细胞的侵袭、转移或者分化等生理功能，进而促进患者腺体细胞对于正常组织的浸润，加剧异位症病灶的持续性进展。抗雌激素药物耐药性基因1(breast cancer anti-estrogen resistance 1，BCAR1)的高表达，可以通过影响腺体细胞或者间质细胞的侵袭能力，进而促进其对于卵巢上皮或者输卵管上皮组织的浸润，加剧病情的进展[3-4]。为了进一步揭示BCAR1在EMS患者病情发生发展过程中的作用，本次研究选取2016年2月至2016年12月在浙江省乐清市人民医院接受治疗的EMS患者为研究对象，探讨了BCAR1的异常表达及其与患者其他血清学生物因子的表达关系，报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料

选取2016年2月至12月在浙江省乐清市人民医院接受治疗的EMS患者为研究对象。纳入标准：①年龄≥18周岁；②符合子宫内膜异位症的诊断标准；③无其他系统严重疾病者。排除标准：①临床资料不全者；②合并免疫功能障碍者。根据纳入排除标准共选择EMS患者100例为EMS组，年龄33～65岁，平均48.15±3.21岁。对照组纳入标准：年龄≥18周岁，无其他系统严重疾病，共100例，年龄34～64岁，平均48.17±3.25岁。两组的年龄等一般资料比较无差别(Pgt;0.05)，具有可比性。本项研究经医院伦理委员会评审通过，且所有患者均知情同意。

1.2方法

1.2.1检测方法

所有患者均于入院24h内采集空腹静脉血约5mL并分作两份，一份自然抗凝后以3 000r/min离心10min，取上清液采用酶联免疫吸附法测定血清中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha，TNF-α)水平，检测试剂盒购自北京中杉金桥生物有限公司，具体检测步骤严格按照试剂盒说明书进行操作；另一份置于枸橼酸钠抗凝管内，加入白介素-1β(interleukin-1 beta，IL-1β)、癌抗原125(cancer antigen 125，CA125)检测试剂盒后，利用胶体金法检测IL-1β、CA125水平，试剂盒购自上海奥普生物医药有限公司，具体检测步骤严格按照试剂盒说明书进行。

采用石蜡切片脱蜡至水，采用离子水进行反复洗涤，加入牛奶液体封闭抗体，封闭时间为5min，加入BCAR1抗体(鼠来源，ABCUM公司)， 37℃ 孵育 2h，采用磷酸盐缓冲液洗涤3次，滴加荧光染色标记的二抗抗体(购自abcum公司)，37℃ 孵育 30min，加入磷酸盐缓冲液进行洗涤，采用南京凯基生物制剂公司生产的显色剂进行显色，封片，镜下观察。

1.2.2评价指标

观察两组内膜组织中BCAR1的表达和VEGF、TNF-α、IL-1β、CA125水平，比较EMS患者异位内膜及在位内膜组织中BCAR1的差异，分析EMS患者BCAR1表达与VEGF、TNF-α、IL-1β、CA125水平的相关性。BCAR1阳性判断标准：细胞颗粒着色为微黄色，阳性细胞率分为4级。-：阴性，无阳性着色或着色颗粒细微浅黄，阳性细胞数lt;10%；+：弱阳性，浅黄色细颗粒，阳性细胞数10%～30%；++：中度阳性，黄色颗粒较粗，阳性细胞数31%～60%；+++：强阳性，棕黄色粗大颗粒，阳性细胞数gt;60%。阳性=弱阳+中度阳性+强阳性。

1.3 统计学方法

采用SPSS 11.5软件进行统计学分析。计数和计量资料分别采用例和均数±标准差表示。VEGF、TNF-α、IL-1β、CA125水平的比较采用t检验进行分析，EMS患者异位内膜及在位内膜组织中BCAR1的比较采用卡方检验进行分析，采用Pearson相关分析法分析EMS患者BCAR1表达与VEGF、TNF-α、IL-1β、CA125水平的相关性，Plt;0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1两组内膜组织中BCAR1的表达差异

EMS组患者内膜组织中的BCAR1阳性表达率为85.00%，明显高于对照组(Plt;0.001)，见表1。

2.2两组VEGF、TNF-α、IL-1β、CA125水平的比较

EMS组患者血清VEGF、TNF-α、IL-1β、CA125水平明显高于对照组(均Plt;0.001)，见表2。

表1 两组内膜组织中BCAR1的表达[n(%)]

表2 两组VEGF、TNF-α、IL-1β、CA125水平的比较

2.3 EMS患者异位内膜及在位内膜组织中BCAR1的比较

EMS患者异位内膜组织中BCAR1阳性表达率为95.0%，明显高于在位内膜组织中BCAR1阳性表达率(Plt;0.001)，见表3。

2.4 EMS患者BCAR1表达与VEGF、TNF-α、IL-1β和CA125水平的相关性

EMS患者BCAR1阳性表达率与血清VEGF、TNF-α、IL-1β和CA125水平明显正相关(均Plt;0.05)，见表4。

2.5两组患者内膜组织染色的比较

如图1所示，左图为阴性染色结果，无明显阳性着色；右图为阳性染色结果，棕黄色粗大颗粒，阳性细胞数gt;60%。

表3 EMS患者异位及在位内膜组织中BCAR1的比较[n(%)]

表4 EMS患者BCAR1表达与VEGF、TNF-α、IL-1β和CA125水平的相关分析

图 1 BCAR1在子宫内膜中的表达(左：阴性表达；右：阳性表达)

3讨论

3.1 EMS的治疗预后背景研究

EMS的发生发展，可以导致患者多种不良临床结局的发生，特别是在具有盆腔慢性疾病病史或者合并有其他卵巢良性或者交界性增生性疾病的患者中，EMS的临床预后更差。长期的临床随访研究显示，现阶段临床上EMS的总体治疗效果较差，治疗后的疾病的病情进展率较高。而通过对于EMS发病过程中相关生物学机制的研究，一方面可以为EMS的疾病预后评估提供新的实验室参考指标，同时也可以为揭示临床上EMS患者的发病机制提供理论基础。

3.2 BCAR1能影响多种生理病理机制促进EMS的进展

BCAR1等细胞生物学因子可以通过影响子宫内膜腺体或者间质细胞的增生或者异常凋亡的过程，加剧细胞的侵袭能力或者转移风险的增加，促进增殖期细胞对于卵巢或者输卵管等上皮组织的浸润，促进疾病的进展[5]；BCAR1是促进微血管形成的重要因素，BCAR1的异常表达的上升，可以在促进新生血管形成或者提高局部异位症病灶组织细胞的血流供应的同时，加剧异位症病灶细胞的持续性进展，导致病变细胞的增殖速率的增加[6]。近年来相关基础领域的研究也显示，BCAR1的高表达不仅可以影响雌激素抗体的敏感性或者耐药性，同时可以通过对于EMS病情组织中的雌激素受体的上调，进而加剧病灶组织细胞的增殖活性的增强，促进病情的进展[7-9]。已有的相关研究揭示BCAR1的异常表达情况，但缺乏对于BCAR1在异位症病灶组织或者子宫内膜组织中的表达差异性的对比研究。

3.3 BCAR1在EMS患者体内的异常表达及其与患者血清学相关指标的关系

本次研究发现，在EMS患者的异位症病灶组织中BCAR1阳性率明显高于对照组，差异具有统计学意义，提示BCAR1可能参与了EMS的病情进展，BCAR1的高表达可以通过影响局部氧化应激损伤或者加剧患者的异位症病灶组织炎症损伤等，进而促进EMS患者的病情进展。庄梦斐等[10]、宁丽等[11]通过探讨不同临床分期或者病情严重程度不同的 EMS患者的发病机制，BCAR1的阳性表达率可平均上升25%～66%，且患者的异位症病灶的侵袭程度越高，卵巢功能的破坏越严重，相关BCAR1的阳性表达率越高。血清学相关指标的研究可见， VEGF、TNF-α、IL-1β、CA125等均呈现出明显的高表达趋势，从机制上考虑不同的血清学生物指标的高表达可以影响到下列几个方面的因素，进而促进EMS患者病情的进展[12-13]：①VEGF、TNF-α等的表达，促进了异位症病灶组织中新生血管的形成，促进了患者的异位症腺体细胞对于盆腔内脏器或者腹膜上皮细胞的浸润能力；②IL-1β、CA125等的高表达，能够影响患者的异位症病灶组织的线粒体损伤，或者促进腺体细胞的黏附能力的增加，从而增加了其对于基底膜层上皮组织的突破作用。在不同病灶组织中，可以发现的是，EMS患者异位内膜中BCAR1阳性表达率为95.0%，明显高于在位子宫内膜病灶组织中BCAR1的阳性表达率，这主要考虑与异位症病灶组织中细胞的侵袭能力较强、病灶的浸润程度较深等有关。最后，本次研究发现BCAR1阳性表达率与血清学相关生物学因子的表达具有密切的关系，提示BCAR1可能通过影响VEGF等的表达，进而促进患者的病情发展。

本次研究的创新性在于探讨了异位症病灶组织及在位子宫内膜病灶组织中的BCAR1阳性表达差异，这有利于分析异位症病灶组织的发病机制。综上所述，EMS患者的异位内膜组织中BCAR1阳性表达率较高，且与患者血清VEGF、TNF-α、IL-1β、CA125水平正相关，可作为临床监测疾病进展的重要指标。

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[专业责任编辑：张冠军]

ExpressionandsignificanceofBCAR1inectopicendometriumandeutopicendometriuminpatientswithendometriosisy

HE Hai-mei, PAN Ye

(DepartmentofObstetricsandGynecology,YueqingMunicipalPeople’sHospitalofZhejiangProvince,ZhejiangQingshi325600,China)

ObjectiveTo investigate the expression of breast cancer anti-estrogen resistance 1 (BCAR1) in ectopic endometrium and eutopic endometrium in patients with endometriosis (EMS) and to analyze its clinical significance.Methods100 EMS patients treated in Yueqing Municipal People’s Hospital of Zhejiang Province from February to December in 2016 were selected as subjects, and healthy adults who underwent physical examination in the hospital were selected as controls. Expression of BCAR1 and levels of vascular endothelial growth factor (VEGF), tumor necrosis factor alpha (TNF-α), interleukin-1β (IL-1β), and cancer antigen 125 (CA125) were observed in two groups. BCAR1was compared between ectopic endometrium and eutopic endometrial in EMS patients, and analysis was conducted on correlation of BCAR1 expression in patients with EMS and levels of VEGF, TNF-α, IL-1β and CA125.ResultsPositive expression rate of BCAR1 in eutopic endometrium of EMS group was 85.00%, which was significantly higher than that of the control group (χ2=106.676,Plt;0.001). Levels of serum VEGF, TNF-α, IL-1β and CA125 in EMS group of patients were 228.72±12.35ng/L, 46.33±5.96Pg/ml, 165.82±13.02ng/L, 332.46±12.13U/ml, respectively, which were significantly higher than those in the control group (tvalue was -39.764, -41.339, -24.083 and -97.792, respectively, allPlt;0.001). Positive expression rate of BCAR1 was 95.0% in EMS patients with ectopic endometrium, and it was significantly higher than that in eutopic endometrium (χ2=15.686,Plt;0.001). A significant positive correlation was found between positive expression rate of BCAR1 and serum levels of VEGF, TNF-α, IL-1β and CA125 (rvalue was 0.587, 0.612, 0.542 and 0.598, respectively, allPlt;0.05).ConclusionPositive expression rate of BCAR1 in ectopic endometrium of EMS patients is relatively high, and it is positively corralted with the serum levels of VEGF, TNF-α, IL-1β and CA125. So it can be used as an important index for clinical monitoring.

endometriosis (EMS); estrogen; vascular growth factor (VGF); inflammatory factor; breast cancer anti-estrogen resistance 1(BCAR1)

10.3969/j.issn.1673-5293.2017.11.034

R711.74

A

1673-5293(2017)11-1418-04

2017-05-23

何海美(1980—)，女，主治医师，主要从事妇产科临床工作。

潘 晔，副主任医师。