张晓凤，梁建登

（1.中山大学药学院，广东 广州 510006；2.广东药科大学， 广东 广州 510006）

用高效液相色谱法测定盐酸氨基葡萄糖片中有关物质的结果

张晓凤1，梁建登2

（1.中山大学药学院，广东 广州 510006；2.广东药科大学， 广东 广州 510006）

目的：探讨用高效液相色谱法测定盐酸氨基葡萄糖片中有关物质的结果。方法 ：用高效液相色谱法测定盐酸氨基葡萄糖片中的有关物质，即以Inertsil NH2(250 mm×4.6 mm, 5µm)为色谱柱，以0.02mmol/L磷酸铵溶液（磷酸调PH值至7.0）—乙腈（30：70）为流动相，将流速设为1.0ml/min，将柱温 设为35℃，将检测的波长设为195nm，将进样的体积 设为20µl。结果：盐酸氨基葡萄糖的主峰与杂质峰的分离度均良好，并检测到3个杂质。结论：用高效液相色谱法测定盐酸氨基葡萄糖片中有关物质的准确度高，可很好地检测出其中的杂质。且此检测方法的操作简单、快速。

高效液相色谱法；盐酸氨基葡萄糖片；有关物质

氨基葡萄糖类药物主要用于治疗骨性关节炎。常用的氨基酸葡萄糖类药物包括硫酸氨基葡萄糖胶囊、盐酸氨基葡萄糖片等。在英国药典[1]中，对氨基葡萄糖中的有关物质进行了研究。而在我国关于氨基葡萄糖中有关物质的研究则较少。为了进一步探讨对盐酸氨基葡萄糖片中的有关物质进行检测的最佳方法，笔者在英国药典中相关研究的基础上，并参考大量的文献[2-4]后，采用高效液相色谱法 对盐酸氨基葡萄糖片中的有关物质进行了检测，取得了很好的效果。

1 仪器、试剂及样品

1）本次研究使用的仪器为：岛津LC-15C高效液相色谱仪和紫外检测器。2）本次研究使用的试剂为：乙腈为色谱纯，磷酸和磷酸铵为分析纯。3）本次研究使用的样品为：（1）盐酸氨基葡萄糖片，市售，由四川绿叶宝光药业股份有限公司生产。（2）D- 盐酸氨基葡萄糖，由中国食品药品检定研究院提供。（3）果糖嗪 和2,5-脱氧果糖嗪，由加拿大TLC公司提供。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

1）色谱柱：Inertsil NH2（250×4.6mm，5µm）。2）流动相：0.02mmol/L 磷酸铵溶液（PH7.0）：乙腈=30：70。3）流速：1.0ml/min。4）柱温：35℃。5）检测波长：195nm。5）进样体积：20µl。6）稀释液：浓度为65%的乙腈溶液。

2.2 溶液制备

1）取1.0mg的果糖嗪对照品，精密称定，加入稀释液配制成浓度为50µg/ml的对照溶液。2）取1.0mg 的2,5-脱氧果糖嗪对照溶品，精密称定，加入稀释液配制成浓度为50µg/ml的对照溶液。3）取盐酸氨基葡萄糖片，研磨成粉末，精密称量适量（约相当于40mg的盐酸氨基葡萄糖），置于10ml的容量瓶中，加入适量的稀释液溶液进行超声溶解并定容，摇匀，作为供试品溶液。4）精密量取1.0ml的供试品溶液，置于100ml的量瓶中，加稀释液进行定容，摇匀，作为对照品溶液。

2.3 系统适用性考察

1）分离度试验：精密量取2.2项下的对照溶液各20µl注入液相色谱仪中，记录色谱图。2）结果：各杂质峰与主峰的分离度均能够达到有效分离；主峰与2,5-脱氧果糖嗪的相对保留时间为0.40；与果糖嗪的相对保留时间为0.47；理论塔板数不小于2000。结果见图1。

图1 杂质和盐酸氨基葡萄糖片溶液图（2,5-脱氧果糖嗪；果糖嗪；盐酸氨基葡萄糖片）

2.4 专属性实验

1）取盐酸氨基葡萄糖片研磨成粉末，取适量（约相当于40mg的盐酸氨基葡萄糖），精密称定，置于10ml的容量瓶中，共计6份。按照以下条件进行试验：（1）未破坏实验：加入稀释液进行超声溶解并定容。（2）酸破坏实验：加入2ml的 0.1N盐酸溶液进行超声溶解，在室温中放置2个小时，再加入0.1N氢氧化钠溶液进行中和，然后加入稀释液进行定容。（3）碱破坏实验：加入2ml的0.1N氢氧化钠溶液进行超声溶解，在室温中放置2个小时，再加入0.1N盐酸溶液进行中和，然后加入稀释液进行定容。（4）高温破坏实验：加入 稀释液进行超声溶解并定容，摇匀，在100℃的水浴中加热2个小时。（5）光照破坏实验：加入稀释液进行超声溶解并定容，摇匀，在4500XL光照2天。（6）氧化破坏实验：加入2ml 浓度为3%的H2O2溶液，放置2个小时，然后加入稀释液进行定容，摇匀。将上述溶液均取适量进行过滤，然后取上清液。2）结果：在进行酸、碱、高温、光照等破坏实验时，盐酸氨基葡萄糖均产生新杂质，进行氧化破坏实验时其未产生新杂质；各种条件下杂质峰之间的分离度均大于1.2，杂质峰与主峰之间的分离度均大于2.0，表明拟定的色谱条件专属性强。结果见图2。

图2 专属性试验图（由左往右为：未破坏；酸破坏；碱破坏；高温破坏；光照破坏；氧化破坏）

2.5 线性实验

2.5.1 2,5-脱氧果糖嗪线性实验 精密称量1.0mg的对照品，加入稀释液配制成浓度为2.0ug/ml、9.0ug/ml、18.0ug/ml、36.0ug/ml、45.0ug/ml和54.0ug/ml的对照溶液。各取20µl注入液相色谱仪，记录色谱图，计算线性方程。线性曲线是：Y=17052.2+4453.7，r=0.9996。结果表明：2,5-脱氧果糖嗪对照溶液在2.3ug/ml～54.0ug/ml的范围内呈线性。

2.5.2 果糖嗪线性实验

精密称量1.0mg的对照品，加入稀释液配制成浓度为0.25ug/ml、2.0ug/ml、8.0ug/ml、16.0ug/ml、20.0ug/ml和24ug/ml的对照溶液。各取20µl注入液相色谱仪，记录色谱图，计算线性方程。线性曲线是：Y=22953.0781+546.7419，r=0.9995。结果表明：果糖嗪对照溶液在0.255ug/ml～24ug/ml的范围内呈线性。

2.6 精密度实验

1）按照2.2的方法配制供试品溶液。精密量取20µl注入液相色谱仪中，分别进样6针，以自身对照法计算。2）结果：盐酸氨基葡萄糖片溶 液主要杂质及总杂质的RSD分别为，2,5脱氧果糖嗪为1.46%，果糖嗪为1.56%，总杂质为1.26%。这说明，精密度符合要求。

2.7 重复性实验

1）按照2.2的方法配制6份供试品溶液。精密量取上述溶液各2 0µl注入液相色谱仪中。2）结果：在盐酸氨基葡萄糖片溶液中，2,5脱氧果糖嗪RSD为1.35%，果糖嗪为1.89%，总杂质的RSD为1.87%。

2.8 稳定性实验

1）取重复性项下的供试品溶液，分别于0、1、2、4、6、8小时，各取 20µl的供试品溶液注入液相色谱仪中。2）结果：2,5脱氧果糖嗪RSD为1.23%，果糖嗪为1.75%，总杂质的RSD为0.67%。这说明，供试品溶液在8小时内稳定。

2.9 回收率试验

1）按照2.2的方法制备2,5-脱氧果糖嗪和果糖嗪对照溶液。取盐酸氨基葡萄糖片，研磨成粉末，称量约相当于40mg的盐酸氨基葡萄糖粉末，分别加入3.0ml、3.5ml、4.0ml上述对照溶液配制成浓度为80%、100%和120%的溶液，按照2.2的方法配制供试品溶液。精密量取上述溶液各20µl注入液相色 谱仪中，计算果糖嗪和2,5-脱氧果糖嗪的含量。取上述对照溶液按照100%的浓度配制成对照混合溶液。2）结果：2,5-脱氧果糖嗪和果糖嗪的平均回收率分别为：98.3%和98.6%，RSD分别是0.29%和0.22%。

3 讨论

盐酸氨基葡萄糖的吸 收波长为195nm，且干扰的因素很多，如在流动相中使用磷酸盐会干扰检测，醋酸盐会使峰形歪斜，而磷酸铵对检测则无干扰，因此应选择磷酸铵作为流动相的水相。高效液相色谱法具有快速、简便的特点，此检测方法的专属性强、线性范围广，且精密度、稳定性、重复性及回收率均符合要求，表明此方法不仅适 用于对盐酸氨基葡萄的有关物质进行检测，也适用于对盐酸氨基葡萄的含量进行检测。

[1] EUROPEAN PHARMACOPOEIA 8.0[S]：2338～2340.

[2 ] 湖北爱普注册标准[S]：YBH08072009.

[3] 王培,黄哲苏,李海生.盐酸氨基葡萄糖胶囊含量测定条件的改进.天津药学[J].2008,20 (3):13-14

[4] 杨华良,雷勇胜.HPLC 法测定盐酸氨基葡萄糖颗粒中盐酸氨基葡萄糖的含量.天津药学[J].2011,23(6):17-19.

Study result of high performance liquid chromatography for measure related substance of glucosamine hydrochloride tablets

Zhang Xiaofeng1 Liang jiandeng2
(1 School of Pharmaceutical,Sun Yat-sen University 2 Guangdong Pharmaceutical University)

∶ Objective To study high performance liquid chromatography for measure related substance of glucosamine hydrochloride tablets. Method Use Inertsil NH2(250 mm × 4.6 mm, 5µm)as chromato bar, use 10mmol/L ammonium phosphate solution PH7.0–Acetonitrile (30：70 ) for Mobile phase ,set flow rate in 1.0ml/min,set column temperature as 35℃, set detection wavelength as 190nm,set injection as 20µl.Result The peaks of Glucosamine Hydrochloride Tablet and impurities are well separated,3 kinds impurities was be measured. Conclusion High performance liquid chromatography for measure related substance of glucosamine hydrochloride tablets has a high accuracy and it can measure impurities in tablets well. This method is simple and quick.

∶ RP-HPLC; Glucosamine Hydrochloride; related substance.

R917

A

2095-7629-（2017）7-0028-02