侯凤香 金俊杰 李培德 金大春 钱锦铭（温州科技职业学院动物科学学院（温州市农业科学研究院）325006）

不同养殖模式鸭肠道大肠杆菌耐药性分析

侯凤香 金俊杰 李培德 金大春 钱锦铭*（温州科技职业学院动物科学学院（温州市农业科学研究院）325006）

为对比不同养殖模式下，鸭大肠杆菌的耐药性，本文针对传统平养与网床圈养2种不同养殖模式下的临床健康鸭群，分离鉴定出47株大肠杆菌，选用20种抗生素对其进行耐药性测定分析。结果显示，传统平养的鸭场其耐药性、耐药普均较网床圈养严重的多，在20种抗生素中，传统平养对3种药物敏感，网床圈养对7种药物敏感；对其他药物的耐药率，除链霉素的耐药率外，传统平养的鸭场均高于网床圈养；多重耐药方面，传统平养的24株菌中有2株对所有20种受试抗菌药物均敏感，网床圈养的23株菌中有6株对所有20种受试抗菌药物均敏感，网床圈养有2R、4R、6R、8R；传统平养的耐药普较广，2R-12R均存在，在两种模式中，3R以上菌株网床圈养占34.78%，传统平养的79.17%。结果表明：网床圈养养殖可以减缓耐药性产生。

养殖模式；鸭；耐药性

大肠埃希氏菌 (E.coli）通常被称为大肠杆菌，是Escherich在1885年发现的，在相当长的一段时间内，一直被当作正常肠道菌群的组成部分，认为是非致病菌。直到20世纪中叶，才认识到大肠杆菌为条件下致病菌，非致病性大肠杆菌容易获得致病性大肠杆菌的毒力因子而转变为致病菌，引起动物和人的多种疾病[1]，尤其对婴儿和幼畜 (禽），常引起严重腹泻和败血症。20世纪50年代禽致病性大肠杆菌几乎没有耐药性产生，而60年代的分离株对链霉素、四环素产生了耐药性。

伴随着畜牧业的规模化发展，在畜禽的养殖过程中，抗菌药物被广泛地用于疫病的治疗与预防，导致细菌的耐药性逐渐增强，特别是禽源性大肠杆菌，其耐药菌株越来越多，多重耐药菌株也在不断增加，有的分离株对一些尚未推广使用的新型抗生素也具有很强的耐药性[2-3]，同时，也有文献报道，细菌的耐药性可以通过动物源、食物源传染给人类[4-5]，而使许多抗生素在治疗人的细菌性疾病时无效，从而严重威胁人类的健康。

鸭大肠杆菌病是由大肠杆菌引起的一种急性败血性传染病，各年龄均可感染，以2～6周龄的小鸭为主。特征是发病急、死亡快。剖检变化以败血症为主，肝脏肿大，呈胆汁状的铜绿色或是青铜色；脾脏肿大，呈紫黑色斑纹状；肺有淤血或水肿；卵巢出血；肝被膜、心包膜和气囊壁表面等附有黄白色纤维素性渗出物；全身浆膜呈急性渗出性炎症，对养鸭业的危害很大。本文通过对传统平养与网床圈养两种不同养殖模式，采集临床健康鸭泄殖腔拭子，分离出大肠杆菌，选取20种抗生素，进行耐药性检测，并进行对比分析，以降低对养殖业的危害，减少菌株耐药性的传播，保障公共卫生安全，为制定有效的用药方案及控制大肠杆菌耐药性发展提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验菌株

47株菌株分别采集自温州3家传统平养与3家网床圈养鸭场内的临床健康鸭群；大肠埃希菌质控菌株ATCC25922购自温州康泰生物科技有限公司。

1.1.2 培养基

Kary-Blair运送培养基购自青岛海博生物技术有限公司；麦康凯、伊红美蓝、营养琼脂、MH平皿培养基均购自温州康泰生物科技有限公司。

1.1.3 细菌微量生化反应管与药敏纸片

肠杆菌科微量生化反应管、链霉素 (S）、卡那霉素(K）、庆大霉素 (CN）、阿米卡星 (AK）、妥布霉素 (TOB）、大观霉素 (SH）、复方新诺明 (SXT）、氨苄西林 (AMP）、头孢唑林 (KZ）、头孢曲松 (CRO）、头孢噻肟 (CTX）、头孢哌酮/舒巴坦 (SCF）、阿莫西林/棒酸 (AMC）、诺氟沙星(NOR）、氧氟沙星 (OFX）、环丙沙星 (CIP）、恩诺沙星(ENR）、四环素 (TE）、多西环素 (DO）、氟苯尼考 (FFC）药敏纸片均购自杭州天和微生物试剂有限公司。

1.2 方法

1.2.1 菌株分离、鉴定

采集临床健康鸭群泄殖腔拭子样品，移入Kary-Blair运送培养基内，于12h内划线接种至麦康凯平皿培养基中，37℃培养18h。挑取麦康凯平皿培养基上粉红色单个菌落，划线接种至伊红美蓝平皿培养基内，37℃培养18h。挑取伊红美蓝平皿培养基上深紫色、带金属光泽单个菌落，划线接种至营养琼脂平皿培养基内，37℃培养18h[6]。将待检菌接种至肠杆菌科微量生化反应管中，37℃培养培养24～96h，观察并记录生化反应结果，按说明书予以判定。

1.2.2 药敏试验

按照临床和实验室标准协会 (Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）推荐的K-B药敏纸片法进行药敏试验，每次测定均以质控菌株ATCC25922为参照。根据CLSI 2016标准判定结果[7]。

2 结果与分析

对52份鸭泄殖腔拭子样品进行大肠杆菌分离培养，经菌落形态观察、氢氧化钾拉丝试验、革兰染色、生化鉴定得到47株大肠杆菌，分离率为90.4%。其中传统平养鸭场26份样品，分离鉴定得到24株大肠杆菌，网床圈养鸭场26份样品，分离鉴定得到23株大肠杆菌。

2.1 药物敏感性结果

传统平养养鸭场分离到的24株大肠杆菌对阿米卡星、大观霉素、头孢哌酮/舒巴坦三种药物敏感，耐药率为0；对剩余的17种药物均具有不同的耐药率，对卡那霉素、链霉素、新诺明、氟苯尼考、多西环素、氨苄西林、阿莫西林/棒酸七种药物具有较高的耐药性 (41.67～79.17%）；对四环素对四环素的耐药性最高，高达83.33%。相对比下，网床圈养养鸭场分离到的23株大肠杆菌对阿米卡星、大观霉素、头孢唑林、头孢噻肟、头孢哌酮/舒巴坦、氧氟沙星、环丙沙星七种药物敏感，耐药率为0；对剩余的13种药物均具有不同的耐药率，对其中的新诺明、多西环素、四环素、链霉素、氨苄西林具有较高的耐药率72.73%，为最高；对新诺明、链霉素、氟苯尼考、氨苄西林、诺氟沙星、阿莫西林/棒酸、多西环素7种药物具有较高的耐药性 (43.24%～75.68%）。药敏试验结果见附表。

2.2 多重耐药性结果

在47株鸭肠道大肠杆菌分离株中，传统平养的24株菌中有2株对所有20种受试抗菌药物均敏感，网床圈养的23株菌中有6株对所有20种受试抗菌药物均敏感；两种养殖模式均是0株对1种抗菌药物耐药；网床圈养的6株对2种抗菌药物耐药 (2R），传统平养的3株对2种抗菌药物耐药(2R）；网床圈养0株对3，5，7，9-20种抗菌药物耐药，传统平养的22株均存在不同程度的多重耐药，耐药性最为严重的1株对12种抗菌药物耐药 (12R）；在分离菌株中，3R以上菌株网床圈养占34.78%，传统平养的79.17%。多种耐药结果见附图。

3 讨论

本研究显示，传统平养的鸭场其耐药性、耐药普均较网床圈养严重的多，在20种抗生素中，传统平养对3种药物敏感，网床圈养对7种药物敏感；对其他药物的耐药率，网床圈养除链霉素的耐药率高于传统平养的鸭场外，其他耐药率均低于传统平养的鸭场；在多重耐药方面，传统平养的24株菌中有2株对所有20种受试抗菌药物均敏感，网床圈养的23株菌中有6株对所有20种受试抗菌药物均敏感，网床圈养有2R、4R、6R、8R；传统平养的耐药普较广，2R-12R均存在，在两种模式中，3R以上菌株网床圈养占34.78%，传统平养的79.17%，由此可见，网床圈养养殖可以减缓耐药性产生。

传统的平养模式即设置水池或是提供水槽，供鸭洗浴嬉戏，粪污直接排泄于地面、水中，污染环境、水体、鸭体，增加鸭与各种病原体接触的机率，导致发病。鸭大肠杆菌病的发生与鸭的饲养环境与饲养方式密切相关，带菌的鸭在其活动范围内也可通过排泄的粪便污染当地的食物、草场、水源或其他水体及场所，造成交叉污染和感染，危害极大。网床圈养模式

鸭在网床上面自由活动，网下粪便被直接收集，该模式提高了鸭养殖的卫生水平，减少疫病的传播，李花柚等[8]研究报道，蛋鸭生态网床圈养技术可以使蛋鸭大肠杆菌病发病率下降90%左右，兽药使用亦下降90%，大大降低饲养成本。

大肠杆菌病的发病率和死亡率较高，每年给世界养禽业带来严重损失。同时，禽类是人源肠外致病性大肠杆菌的一个传播媒介，加强中国禽致病性大肠杆菌的防制和监控，对养禽业发展及公共卫生安全具有重要意义[9]。伴随着禽致病性大肠杆菌耐药性的加剧，使禽大肠杆菌病上升为危害养禽业最棘手的疾病之一。减缓耐药性的产生或是消除耐药性已成为当前重要课题，有研究表明，中草药对大肠杆菌的防治具有很好的作用，不仅可以抑菌治病，还可以消除耐药性，同时安全无毒副作用[10]。改变传统养殖模式，走生态化养殖之路，也可以减缓耐药性产生，对促进畜牧业的转型升级具有重要作用。本文为制定有效的用药方案及控制大肠杆菌耐药性问题提供参考及理论依据。

附表 两种养殖模式鸭肠道大肠杆菌分离株药敏试验结果

附图 两种养殖模式鸭肠道大肠杆菌对20种抗菌药物的多重耐药性分布

[1]何敏,易本驰,陈敏.猪大肠杆菌对杭生素耐药性的研究进展[J].黑龙江畜牧兽医,2011(3):27-30.

[2]岳秀英,葛荣,吴晓岚,等.四川省猪、鸡源大肠杆菌对抗生素耐药性研究[J].中国兽医杂志,2017,53(1):93-94.

[3]宿志民,孙燕.泰安地区鸡源致病性大肠杆菌流行病学调查与耐药性分析[J].山东畜牧兽医,2016,37:36-37.

[4]Guerra B,Junkar E,Schroeter A,et al.Phenotypic and genotypic characterization of antimicrobial resisitance in German Escherichia coli isolates from cattle.swine and poultry[J].Journa of Antimicrobial Chemotherapy,2003,52:489-492.

[5]Wite W.Ecological impact of antibiotic use in animals on different complex microflora:environment[J].Intemational Journal of Antimicrobial Agents,l 2000,14:321-325.

[6]陈东科,孙长贵.实用临床微生物学检验与图谱[M].北京:人民卫生出版社,2011:314-319.

[7]Committee for Clinical Laboratory Standard.Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing；26th edition[S].Wayne,PA:CLSI,2016.

[8]李花柚,陈培赛.蛋鸭生态网床圈养技术推广效果调查[J].养殖与饲料,2015(4):19-20.

[9]邓伯雄,刘情,邓安元,等.鸭致病性大肠杆菌分离鉴定及其相关致病性分析[J].中国畜牧兽医,2016,43(1):235-241.

[10]胡宇莉.中草药防治禽大肠杆菌病的研究进展[J].山东家禽,2003(4):36-38.

温州市公益性科技计划项目 （N20140038）；温州市2015年农业丰收计划项目。

侯凤香 （1982-），女，山东省郓城县人，硕士，讲师，主要从事动物传染病学研究工作。

*通讯作者：钱锦铭 （1961-），男，浙江省温州市人，副教授，主要从事生态畜牧业研究工作。