李小锋 杜剑松 康兴东（江西普正制药有限公司吉安331409）

●中西药苑●

杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的提取工艺研究

李小锋 杜剑松 康兴东
（江西普正制药有限公司吉安331409）

目的：确定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的最佳提取工艺，为全杜仲胶囊的生产工艺优化提供参考依据。方法：采用正交试验法，以松脂醇二葡萄糖苷的提取率为评价指标，筛选杜仲的最佳提取工艺。结果：正交试验结果显示，提取次数对松脂醇二葡萄糖苷的提取率有明显的影响，结合大生产工艺的实际情况，最终确定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的最佳提取工艺为6倍量水、提取2次、提取时间2 h/次。结论：本提取工艺研究结果为全杜仲胶囊的生产工艺优化提供了试验参考依据。

杜仲；松脂醇二葡萄糖苷；提取工艺；正交试验

杜仲为杜仲科植物杜仲Eucommia ulmoides Oliv.的干燥树皮[1]，是常用的滋补药材，在《神农本草经》中被列为上品，具有补肝肾、强筋骨、安胎、降压的功效。全杜仲胶囊是杜仲的单方制剂，具有补肝肾、强筋骨、降血压的功效，用于肾虚腰痛、腰膝无力；高血压见上述症状者。药典中记载的其提取工艺是先用85%乙醇加热回流提取2 h，药渣再加水煎煮2次，2 h/次[1]。现代研究结果显示，杜仲中的木脂素类化合物是其主要有效成分之一，是杜仲降压的主要组分[2]。松脂醇二葡萄糖苷是杜仲中含量最丰富的木脂素类化合物之一，也是《中国药典》控制全杜仲胶囊及杜仲药材质量的指标性成分。本研究以松脂醇二葡萄糖苷的提取率为评价指标，对杜仲的提取工艺进行了探讨性研究，为全杜仲胶囊的生产工艺优化提供了参考依据。先报告如下：

1 材料与仪器

1.1 药材杜仲药材购于江西樟树，由江西普正制药有限公司吴永忠副研究员鉴定为杜仲。破碎成小段后作为实验用样品。

1.2 仪器高效液相色谱仪：Waters2695型高效液相色谱仪；色谱柱：Hypersil C18柱（4.6 mm×250 mm×5μm）（美国Waters公司）；JK-100型超声波清洗器（合肥金尼克机械制造有限公司）；SHB-ⅢS型循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；E-5203A型旋转蒸发仪（上海振捷实验设备有限公司）；HHS-24型电热恒温水浴锅（上海东星建材实验设备有限公司）；SZ-93自动双重纯水蒸馏器（上海雅荣生化设备仪器有限公司）。

1.3 试剂及试药松脂醇二葡萄糖苷对照品（中国药品生物制品检定研究院，批号111537-201204，纯度90.6%），乙腈、甲醇为色谱纯，水为双重蒸馏水，其余试剂为分析纯。

1.4 方法

1.4.1 色谱条件色谱柱：Hypersil C18柱（4.6 mm×250 mm×5μm）（美国Waters公司）；流动相：乙腈-水（13∶87）；检测波长：277 nm。理论板数按松脂醇二葡萄糖苷峰计算应不低于1 000。分别取对照品及样品溶液10μl进样，通过外标法计算松脂醇二葡萄糖苷的含量。

1.4.2 对照溶液的制备精密称取松脂醇二葡萄糖苷5.30 mg，置50 ml容量瓶中，加甲醇适量使之溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为106.0μg/ml的对照品溶液。

1.4.3 提取溶剂的选择取杜仲4份，每份各30 g。按照设计方案进行试验，分别测定提取液中松脂醇二葡萄糖苷的转移率。提取方案设计见表1。

表1 提取溶剂的选择试验设计表

1.4.4 杜仲提取工艺正交设计试验分别取杜仲药材30 g，共9份，按L9（34）正交设计表进行9组试验，提取液合并定容至2 000 ml，得供试品溶液1～9，分别测定溶液中松脂醇二葡萄糖苷的含量，计算松脂醇二葡萄糖苷的提取率。正交试验的因素水平参数见表2。

表2 杜仲水提正交试验因素水平表

2 结果

2.1 提取溶剂的选择试验结果结果表明“6倍水，提2次，2 h/次”的提取率最高，85%乙醇提取2次的提取率最低。这说明以水为溶剂对松脂醇二葡萄糖苷的提取效果最好。见表3。

表3 杜仲提取溶剂选择实验结果

2.2 杜仲提取工艺正交设计试验结果由松脂醇二葡萄糖苷提取率结果可知，3个因素对松脂醇二葡萄糖苷提取率影响的大小为：提取次数＞提取时间＞加水倍数，主要影响因素为提取次数，且方差分析有显著性差异；而第3次的提取率小于10%，考虑到成本等因素，最终选择提取2次；直观分析结果表明，加8倍量水提取率最高，但与加6倍量水、10倍量水提取率相差不大，考虑到生产成本，最终选择加6倍量水。结果还表明，提取2 h的提取率最高，故最终确定提取时间为2 h；最终确定的最佳提取工艺为6倍水，提取2次，2 h/次。见表4。

表4 杜仲提取工艺正交设计试验结果

3 讨论

松脂醇二葡萄糖苷是杜仲的主要活性成分，全杜仲胶囊以松脂醇二葡萄糖苷作为质量控制的指标性成分[1]，因此本研究以松脂醇二葡萄糖苷作为指标性成分对提取工艺进行评价是可行的。杜仲提取溶剂选择实验结果显示，用水作为提取溶剂比用乙醇溶液提取效果更好。杜仲中的木脂素类成分在乙醇中的溶解性较在水中好，根据相似相溶的原理，用乙醇溶液进行提取，提取率应更高，但本研究结果显示水提的效果更好，这可能与杜仲中含有大量的杜仲胶成分有关。

相关文献报道中，多以超声提取、微波提取为主，提取溶剂多采用不同浓度的乙醇来提取[3～6]。而本研究基于全杜仲胶囊现有的提取工艺，结合大生产工艺的实际要求，经过溶剂选择实验和正交试验，最终确定杜仲的最佳提取工艺为“加6倍水，提取2次，2 h/次”，这为全杜仲胶囊的生产工艺优化提供了试验参考依据。

[1]国家药典委员会.中国药典2015年版:一部[S].北京:中国医药科技出版社,2015.165,862

[2]吴卫华.杜仲抗高血压有效部位的制备及降压效应研究[D].广州:中南大学,2007

[3]潘亚磊,郭玲丽,谢培,等.杜仲松脂醇二葡萄糖苷的提取工艺优化[J].化学与生物工程,2016,33(2):42-45

[4]吕强.杜仲总木脂素及松脂醇二葡萄糖苷的提取纯化研究[D].吉首:吉首大学,2013

[5]郑雪,刘泽纬,丁来欣,等.杜仲叶中松脂醇二葡萄糖苷的提取分离及含量测定[J].食品科学,2012,33(6):166-170

[6]孙曦晓.从杜仲皮中制备松脂醇二葡萄糖苷及多糖工艺的研究[D].哈尔滨:东北林业大学,2014.8-14

R284.2

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10.13638/j.issn.1671-4040.2017.08.102

2017-06-21）