甘翠红

（天河妇幼保健院检验科，广东 广州 510630）

基因检测对G6PD酶活性临界女性临床诊断价值的探讨

甘翠红

（天河妇幼保健院检验科，广东 广州 510630）

目的 探讨分子诊断在G6PD酶活性临界的女性中的临床应用价值。方法 采用PCR和导流杂交技术，检测酶活异常以及酶活处于临界状态临床样本的14种常见突变。结果 100%（60/60）酶活阳性组样本G6PD基因检测均异常，纯合和杂合突变比例分别13.3%和86.7%。96.4%（53/55）酶活临界组的基因检测发现异常，除1例为纯合变异外，其余均为杂合子变异。共检测出7个位点的变异，分别为95A＞G、392G＞A、871G＞A、1024C＞T、1311C＞T、1376G＞T及1388G＞A，其中最常见的3种基因型分别为1376杂合（30.4%）、1388杂合（24.4%）、95杂合（10.4%）。结论 相比于传统的酶活检测方法，分子诊断对于需进一步鉴别诊断的G6PD缺乏女性灵敏度更高。

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶；女性杂合子；分子诊断

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（glucose-6-phosphate dehydrogenas，G6PD）缺乏症是最常见的遗传性酶缺陷疾病，可导致急性溶血性疾病、新生儿高胆红素血症和慢性非球形红细胞溶血贫血等疾病。全球约有4亿多人受其影响，在地中海沿岸、亚洲、非洲等区域具较高的发病率。在我国主要分布在长江流域以南，广东省是G6PD缺乏症高发区[1]。

目前诊断G6PD缺乏症普遍采用酶活测定手段，该方法对G6PD正常、女性纯合子及男性半合子检测的灵敏度和特异度均很高，但由于女性杂合子患者的G6PD活性往往正常或临界值，现有的临床检测方法对女性杂合子的检测存在漏诊现象[2]。而女性杂合子应该尽早发现并被视为完全缺乏G6PD[3]，所以建立一种高效准确的G6PD缺陷筛查方法，对于指导优生优育、预防出生缺陷显得极为重要。本研究旨在探讨分子诊断在G6PD酶活性临界女性中的临床应用价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取我院2015年10月～2016年10月进行婚检的女性G6PD直接测定法确诊为G6PD缺乏症的样本60例，及G6PD酶活处于临界值的样本55例。G6PD缺乏症阳性组G6PD酶活＜1300 U/L；临界组G6PD酶活介于1300～2000 U/L。

1.2 方法

1.2.1 样本处理

采用广东凯普生物科技股份有限公司生产的血液基因组提取试剂盒，按照说明书对采集的样本进行检测。

1.2.3 导流杂交检测

采用广东凯普生物科技股份有限公司生产的G6PD缺乏症基因突变检测试剂盒，按照说明书检测样本6个外显子上常见的14种突变： 95A＞G、392G＞A、 487G＞A、493A＞G、592C＞T、871G＞A、1004C＞T、1024C＞T、1311C＞T、1360C＞T、1376G＞T、1381G＞A、1387C＞T和和1388G＞A。

2 结 果

2.1 导流杂交检测结果

对115例临床样本进行检测，芯片膜条探针位置。见图1。

图1 芯片膜条探针示意图

女性样本G6PD酶活阳性组（G6PD酶活＜1300U/L）：N=60，临界组（G6PD酶活1300～2000U/L）：N=55。100%酶活阳性组样本基因检测均异常，其中纯合和杂合突变分别比例分别13.3%和86.7%。96.4%（53/55）临界组样本的基因检测发现G6PD异常，除1例为纯合变异外，其余均为杂合子变异。共检测出7个位点的变异，分别为95A＞G、392G＞A、871G＞A、1024C＞T、1311C＞T、1376G＞T及1388G＞A，其中最常见的3种基因型分别为1376杂合（30.4%）、1388杂合（24.4%）、95杂合（10.4%）。见表1。

2.2 特殊样本测序结果

71号样本95N及95M探针均未显色，推测该样本95A＞ G位点或附近序列发生其他变异。扩增产物测序发现，该样本发生89A＞G纯合突变，氨基酸变化为GAT（Asp）-GGT（Gly），其酶活检测结果1341 U/L。见图2。

3 讨 论

国内外研究早就证实G6PD基因突变杂合子是可以发病的[4]。G6PD杂合子女性平时无症状，因食用蚕豆、服用或解除某些药物、感染等因素，诱发急性溶血反应。如在孕期可能会因为以上因素诱发急性溶血性贫血，造成胎儿流产或死胎。对孕前、孕妇夫妇进行G6PD缺乏症产前筛查，可及早发现杂合子型女性，有利于指导临床医生对该类孕妇正确用药，避免医源性损伤，有利于医生对该类孕妇提供必要的饮食指导，有助于安全度过妊娠期。因此G6PD缺乏症女性杂合子的检测具有重要意义。

表1 女性115例临床标本检测结果统计（n，%）

图2 71号样本检测结果图A 71号样本导流杂交结果；图B 71号样本95A＞G位点测序图

常用的G6PD活性筛查的方法有高铁血红蛋白还原实验、硝基四唑氮蓝纸片法、荧光斑点法以及G6PD/6PGD比值法等。这些方法易受到操作人员、实验条件，仪器设备等因素的影响，且不同实验室间的结果判定标准不一致，对于临界值较难判断。并且，由于女性杂合子的酶活性变化范围大，加大了检出的难度[5]。全世界超过180多种G6PD基因突变与G6PD缺乏症有关，中国已发现35种点突[6]。本实验采用导流杂交技术检测样本G6PD基因6个外显子上14个常见突变位点。G6PD酶活阳性组全部样本基因检测均异常，其中纯合子和杂合子突变比例分别为13.3%和86.7%。96.4%（53/55）临界组样本的G6PD基因检测发现异常，除1例为纯合变异外，其余均为杂合子变异结果，提示应用传统酶活检测女性杂合子漏检严重。共检测出7个位点的变异，其中最常见的3种基因型分别为1376杂合、1388杂合、95杂合，与文献报道一致[7]。本研究结果提示，基因检测可以显著提高女性杂合子G6PD缺陷症的检出率。同时，本研究还发现一例突变89A＞G，国内外未见报道。

低密度芯片导流杂交技术是较为成熟的基因检测技术，尤其在检测同一基因存在多个位点突变方面具有较大优势，广泛应用于耳聋、地贫及复杂病原微生物或者病原微生物分型检测。本研究提示分子诊断方法可以有效的检出女性杂合子，具重要临床应用价值。

[1] 张 玲,潘建华,曾征宇.广东省4个地区葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症筛查结果分析.国际检验医学杂志,2017,38(3)∶378-380.

[2] 朱冬林,朱远航,陈亚琼.2种检测女性杂合子G6PD活性的方法比较和探讨中国卫生检验杂志,2016,26(3)∶386-388.

[3] Peters AL,Van Noorden CJ.Glucose-6-phosphate dehydrogenase defciency and malaria∶cytochemical detection of heterozygous G6PD defciency in women.J Histochem Cytochem 2009,57∶1003-11.

[4] Kaplan M,Hammerman C,Vreman HJ,et al.Acute hemolysis and severe neontatal hyperbilirubinemia in glucose-6-phosphate dehydrognenase heterozygotes.J Pediatr,2001,139(1)∶137-140.

[5] 何天文,钟志成,黄滨梅.广东地区育龄人群葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症筛查结果分析.国际检验医学杂志,2016,37(1)∶103-104.

[6] 林 芬,杨 辉,杨立业.我国葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症的分布特征和基因突变.分子诊断与治疗杂志,2016,8(2)∶73-77.

[7] 赵学峰,李毅坚,蔡 甜.佛山地区孕产妇G6PD基因缺陷调查及干预模式研究.检验医学与临床,2016,13(9)∶1172-1176.

本文编辑：赵小龙

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ISSN.2095-8242.2017.35.6872.02