Ki-67在T1期非肌层浸润性膀胱癌中的表达及意义

2017-05-08陈倩倩杜君林瑞李宏蕾杨庆

中国肿瘤临床 2017年7期

陈倩倩杜君林瑞李宏蕾杨庆

·临床研究与应用·

陈倩倩杜君林瑞李宏蕾杨庆

目的：检测Ki-67在T1期非肌层浸润性膀胱癌（non-muscle invasive bladder cancer，NMIBC）组织中的表达，并探讨其与肿瘤复发和进展的关系。方法：回顾性分析2011年6月至2013年10月天津医科大学肿瘤医院102例T1期NMIBC患者的临床病理资料，利用免疫组织化学方法检测组织中Ki-67的表达，分析Ki-67表达与患者临床病理特征的关系，探讨其对T1期NMIBC复发和进展的影响。结果：中位随访时间43（24～57）个月，102例T1期NMIBC患者中20例（19.6%）复发，12例（11.8%）进展，32例（31.4%）Ki-67表达≥25%。Ki-67表达与肿瘤分级相关（P＜0.05），与患者性别、年龄、肿瘤数目、肿瘤大小等无相关性（P＞0.05）。单因素分析结果显示，Ki-67表达与T1期NMIBC的复发无相关性（P＞0.05），Ki-67表达、肿瘤分级、肿瘤数目和既往复发率是影响T1期NMIBC进展的危险因素（P＜0.05），Cox风险回归模型多因素分析结果显示，Ki-67高表达（P=0.043）和既往复发率（P=0.018）是影响T1期NMIBC进展的独立危险因素。结论：Ki-67表达是T1期NMIBC的独立预后因素，检测Ki-67表达有助于预测其进展风险，为采取及时有效治疗提供依据。

T1期非肌层浸润性膀胱癌 Ki-67表达进展独立预后因素

膀胱癌是最常见的泌尿系统恶性肿瘤之一，世界范围内每年有43万例新发病例，同时有16.5万例患者死于该病［1］。其中75%～85%为非肌层浸润性膀胱癌（non-muscle invasive bladder cancer，NMIBC），T1期占20%～25%。虽然经尿道膀胱肿瘤切除术（transurethral resection of bladder tumor，TURBT）及术后膀胱灌注化疗和免疫治疗已成为NMIBC的常规治疗方案，但仍有50%～70%患者出现肿瘤复发，10%～20%患者最终进展为肌层浸润性膀胱癌［2］。T1期NMIBC侵犯固有层，具有高度异质性，部分患者复发率高，很快进展为肌层浸润性膀胱癌，预后极差。因此，寻找有效的预测指标，早期识别这部分患者，及时给予正确的治疗具有重要意义。

近年来，随着分子生物学技术的发展，许多膀胱癌分子标志物逐渐被发现。Ki-67作为细胞增殖标志物已经被证实与多种肿瘤的恶性行为相关。有研究报道，NMIBC组织中Ki-67的过表达与患者不良预后相关［3］，但对T1期NMIBC的研究尚少见。本研究通过检测T1期NMIBC组织中Ki-67表达，探讨其与肿瘤生物学行为及复发进展的关系，以期为其早期诊断和治疗提供依据。

1 材料与方法

1.1 临床资料

回顾性分析2011年6月至2013年10月天津医科大学肿瘤医院102例行TURBT，术后病理证实为T1期NMIBC患者的临床病理资料，其中男性84例、女性18例，年龄24～88岁，中位年龄64岁。肿瘤分期按照国际抗癌联盟TNM分期（2009年第7版），肿瘤分级依据WHO分级（1973年）。

1.2 方法

1.2.1 免疫组织化学方法采用免疫组织化学方法检测病理切片组织中Ki-67的表达。SP试剂盒、兔抗人Ki-67单克隆抗体及DAB显色剂均购于北京中杉金桥生物技术有限公司，实验步骤严格按照试剂说明书进行。Ki-67在膀胱癌组织中以细胞核染色为主，呈棕黄色或棕褐色颗粒。采用双盲法，由2名病理医师分别阅片。在显微镜下随机选取5个不同视野（×400），每个视野计数200个细胞，计算阳性细胞的百分比（阳性细胞数/总细胞数×100%）。利用受试者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲线确定25%为Ki-67表达的最佳临界值。将阳性细胞百分比≥25%定义为Ki-67高表达，阳性细胞百分比＜25%定义为Ki-67低表达。

1.2.2 随访所有患者以膀胱镜检查为主要随访手段，术后前2年每3个月、2年后每6个月行膀胱镜检查。复发进展时间为患者手术时间至肿瘤复发和进展为肌层浸润性膀胱癌的时间。

1.3 统计学分析

采用SPSS 17.0软件进行统计学分析。计数资料采用χ2检验。单因素分析采用Kaplan-Meier法，组间比较采用Log rank检验，多因素分析采用Cox风险模型。以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 患者临床病理特征及Ki-67表达情况

102例患者中32例Ki-67高表达，70例Ki-67低表达。Ki-67表达与肿瘤分级相关，高级别膀胱癌组织中Ki-67表达显著高于低中级别膀胱癌组织中的表达（P＜0.05，表1）。随访时间为24～57个月，中位随访时间43个月，20例患者出现复发，中位复发时间为15.4（4.2～47.9）个月。12例患者进展为肌层浸润性膀胱癌，中位进展时间为21.3（8.5～31.2）个月。

2.2 Ki-67表达与T1期NMIBC患者复发和进展的关系

单因素分析结果显示，Ki-67高表达与复发无相关性，Ki-67高表达、肿瘤数目、肿瘤分级和既往复发率为肿瘤进展的影响因素（P＜0.05，表2）。

表1 Ki-67表达与患者临床病理特征的关系Table 1 Association of Ki-67 expression in stage T1 NMIBC patients with clinical and pathological characteristics

表1 Ki-67表达与患者临床病理特征的关系（续表1）Table 1 Association of Ki-67 expression in stage T1 NMIBC patients with clinical and pathological characteristics

表2 32例患者临床病理特征及复发和进展的单因素分析Table 2 Clinicopathologic data and univariate analysis of recurrence and progression in 32 patients

Ki-67高表达与Ki-67低表达患者的Kaplan-Meier累积生存曲线显示，Ki-67低表达患者具有较高无进展生存率（P＜0.001，图1）。将单因素有意义的指标纳入Cox风险回归模型进行多因素分析，结果显示Ki-67高表达和既往复发率为T1期NMIBC进展的独立性危险因素（P＜0.05，表3）。

图1 Ki-67高表达与低表达患者的累积生存曲线Figure 1 Comparison of progression-free survival between patients with high expression and low expression Ki-67

表3 影响肿瘤进展的多因素分析Table 3 Multivariate analysis of tumor progression

3 讨论

本研究对102例T1期NMIBC患者的分析发现，31.4%（32/102）患者的膀胱癌组织中Ki-67高表达，其表达与肿瘤分级具有相关性，高级别患者的Ki-67表达率较高，Ki-67高表达是肿瘤进展的独立危险因素，但与复发无相关性。Ki-67高表达预示着T1期NMIBC具有较高侵袭性，肿瘤更易进展。

T1期NMIBC具有高度异质性，部分患者短时间内即可进展。研究报道，40%T1期NMIBC患者术后5年内可进展为肌层浸润性膀胱癌，甚至发生远处转移［4］。根治性膀胱切除术是治疗肌层浸润性膀胱癌的标准术式，由于手术时间长、创伤大、术后并发症多，使得许多患者不愿意接受或不能耐受该术式，以致丧失治疗机会。因此，寻找有效指标，早期识别肿瘤高进展风险患者，既可以避免保守治疗导致的疾病进展，又可以避免对肿瘤低进展风险患者的过度治疗。临床常用肿瘤大小、数目、分期、分级、是否伴随原位癌、淋巴血管浸润、生长方式和固有层浸润深度等作为预测T1期膀胱癌进展和死亡风险的指标［5-6］，尽管这些指标在一定程度上能够提供预后分层及治疗指导，但并不能精确识别肿瘤高进展风险患者［7］。随着分子生物学技术的发展，越来越多的分子标志物被用来预测膀胱癌的复发和进展风险，有助于疾病早期治疗。

Ki-67是一种细胞核蛋白，广泛表达于除G0期以外的细胞周期各个阶段，能够反映多种恶性肿瘤的细胞增殖活性，但具体作用机制尚不明确，有研究发现可能与其促进细胞上皮间质转化（epithelial-tomesenchymal transition，EMT），从而增加肿瘤的侵袭和转移能力有关［8-9］。Ki-67表达与乳腺癌、肺癌、肾癌等多种恶性肿瘤的分化程度、浸润、转移及不良预后密切相关［10-11］，但与p53、Survivin等分子标志物相比，在膀胱癌中Ki-67表达的作用还存在不同观点。Ding等［12］研究了332例NMIBC患者的临床病理资料，发现Ki-67阳性表达是NMIBC复发和进展的独立危险因素。Chen等［13］也同样认为Ki-67是膀胱癌复发和进展的独立预后因素。最近一项Meta分析结果显示，Ki-67高表达与膀胱癌高分期、既往复发率、肿瘤大小相关，与患者年龄、性别、吸烟史及肿瘤数目无相关性。该研究的亚组分析显示，在欧美国家膀胱癌患者中，Ki-67高表达具有较差的无复发生存率（recurrence free survival，RFS）、无进展生存率（pro⁃gression free survival，PFS）、总生存率（overall survival，OS）和肿瘤特异性生存率（cancer specific survival，CSS），而在亚洲患者中，Ki-67表达与RFS、PFS、OS、CSS均不存在相关性［14］。Acikalin等［15］随访了68例接受经尿道膀胱肿瘤切除术的T1期NMIBC患者，发现Ki-67表达与肿瘤复发、进展及特异性死亡均无相关性。导致研究结果不完全相同的原因如下：一方面，可能是选择人群不同，大部分研究选择NMIBC患者，包括Ta和T1期，甚至部分选择Ta～T4期患者，而只针对T1期NMIBC患者的研究较少；另一方面，不同研究采用不同的免疫组织化学染色方法以及选用的cutoff值未能统一，也会影响最终结果。

由于部分T1期NMIBC患者具有较高进展风险，预后较差，T1期NMIBC中Ki-67表达的研究尚少见，并且观点不同，因此本研究只进行T1期NMIBC患者的Ki-67表达与其复发和进展关系的分析。本研究结果显示，Ki-67表达与T1期NMIBC患者分级和进展相关，是疾病进展的独立危险因素，高级别患者Ki-67高表达，Ki-67高表达预示着患者具有较高进展风险。因此，Ki-67可作为判定T1期NMIBC恶性程度和进展的有价值指标。将膀胱癌患者的临床病理资料与Ki-67表达相结合，有望更准确预测T1期NMIBC患者的进展风险，筛选高危患者，给予积极有效的治疗，从而更好地指导临床治疗。本研究还存在一些不足，由于本研究为回顾性研究，在患者选择上可能存在偏倚，且样本量少，随访时间短，尚需要大样本、长期的临床研究进一步验证。

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（2017-01-16收稿）

（2017-03-23修回）

（编辑：张亻抿校对：郑莉）

Expression and clinical significance of Ki-67 in stage T1 non-muscle invasive bladder cancer

Qianqian CHEN,Jun DU,Rui LIN,Honglei LI,Qing YANG

Qing YANG;E-mail:13752038627@163.com
Department of Genitourinary Oncology,Tianjin Medical University Cancer Institute and Hospital;National Clinical Research Center for Cancer;Key Laboratory of Cancer Prevention and Therapy,Tianjin;Tianjin's Clinical Research Center for Cancer,Tianjin 300060,China

Objective:To evaluate the immunoreactivity of the Ki-67 protein in stage T1 non-muscle invasive bladder cancer(NMIBC) and determine the predictive role of Ki-67 expression.Methods:A retrospective study was performed on 102 patients with stage T1 NMIBC who underwent transurethral resection at the Tianjin Medical University Cancer Institute and Hospital from June 2011 to October 2013.The expression of Ki-67 was evaluated using immunohistochemical assay and scored for intensity and area of staining.Then, the association between Ki-67 expression and categorical variable was analyzed.The predictive role of Ki-67 expression in tumor recurrence and progression was assessed by univariate and multivariate analyses.Results:Of the 102 patients,20(19.6%)had tumor recurrence and 12(11.8%)progressed to muscle invasive disease,with a median follow-up of 43 months(range,24-57 months).A high expression of Ki-67(determined using receiver operating characteristic curve analysis)was observed in 32(31.4%)cases.This high expression of Ki-67 correlated with tumor grade(P＜0.05)but not with gender,age,tumor number,and tumor size(P＞0.05).Univariate analysis revealed a correlation of tumor progression with Ki-67 expression,tumor grade,tumor number,and prior recurrence rate(P＜0.05)but not between Ki-67 expression and tumor recurrence(P＞0.05).Cox multivariate regression analysis showed that high Ki-67 expression(P=0.043)and prior recurrence rate(P=0.018)are independent risk factors for predicting tumor progression.Conclusion:High Ki-67 expression is an independent prognostic factor for predicting tumor progression.Detection of its expression could predict the risk for progression in stage T1 NMIBC and provide the basis for appropriate treatment.

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