薛 峰,颜 源,何 攀

(四川省妇幼保健院 检验科，四川 成都610041)

血浆sCD40L、sICAM-1及血管内皮损伤相关细胞与子痫前期严重程度的相关性分析

薛 峰,颜 源,何 攀

(四川省妇幼保健院 检验科，四川 成都610041)

目的 探讨血浆白细胞分化抗原可溶性CD40配体(sCD40L)、可溶性细胞间粘附因子-1(sICAM-1)及血管内皮损伤相关细胞与子痫前期严重程度的相关性。方法 选择年龄、BMI、检测孕周等临床一般资料相匹配的重度子痫前期、轻度子痫前期患者以及健康孕妇(对照组)各45例作为研究对象，采用ELISA法检测血浆sCD40L、sICAM-1水平，采用流式细胞仪检测内皮祖细胞(EPC)、血管生成性T细胞(Tang)含量，比较并分析其相关性。结果 子痫前期组的血浆sICAM-1 、sCD40L水平均明显高于对照组(P<0.05) ，同时重度子痫前期组上述指标明显高于轻度子痫前期组(P<0.05) ；重度子痫前期组及轻度子痫前期组EPC、Tang含量均明显低于对照组(P<0.05)，重度子痫前期组和轻度子痫前期组上述指标相比较均无明显差异(P>0.05) ；健康对照组孕妇血浆EPC细胞含量与Tang细胞含量、血浆sICAM-1水平与sCD40L水平均无明显相关性；重度子痫前期组、轻度子痫前期组孕妇血浆EPC细胞含量和Tang细胞含量呈正相关(r=0.654，P<0.05)，且两组孕妇血浆sICAM-1水平与sCD40L水平也呈正相关(r=0.624;P<0.05)。结论 子痫前期孕妇外周血EPC和Tang细胞含量明显降低，而血浆sICAM-1 、sCD40L水平显著升高，二者可能通过诱发内皮细胞损伤进而影响机体免疫和炎症反应参与子痫前期的发病过程。血浆sCD40L、sICAM-1及血管内皮损伤相关细胞水平变化与子痫前期严重程度密切相关。

可溶性细胞间粘附因子-1；可溶性CD40配体；T淋巴细胞亚群；内皮祖细胞；子痫

(ChinJLabDiagn,2017,21:0464)

子痫前期为妊娠期特发疾病，发病率约占全部妊娠的3.9%，可影响机体各器官系统[1]。本病是导致不良母婴结局的重要因素之一，目前关于子痫前期的发病机制尚无确切定论，但已有临床研究证明血管内皮损伤为子痫前期发病的中心环节[2]。近年来，陆续有报道显示，机体的免疫功能异常、炎症反应主要参与了子痫前期病情的发生、发展病理过程[3]。可溶性细胞间粘附因子-1(sICAM-1) 及白细胞分化抗原可溶性CD40 配体(sCD40L) 为重要的免疫炎症介质，sICAM-1、sCD40L的异常表达能够激活机体炎症反应，引起机体免疫功能紊乱、氧化应激，损伤血管内皮细胞功能[4]。血管生成性T淋巴细胞(Tang)及内皮祖细胞(EPC)为血管内皮损伤相关细胞，具有促进组织血管新生、修复血管内皮损伤的功能[5]。本研究对本院收治的子痫前期患者为研究对象，并对患者血浆sICAM-1、sCD40L水平及血管内皮损伤细胞含量进行了检测并予以统计分析，旨在探讨血浆sCD40L、sICAM-1和血管内皮损伤相关细胞与子痫前期严重程度的相关性以及上述指标在子痫前期临床诊断和预后评估中的应用价值。现将结果汇报如下。

1 对象与方法

1.1 对象

选择2013年5月至2015年10月间我院收治的90例子痫前期患者为研究对象，所有患者均符合《妇产科学》中子痫前期的诊断标准[6]，其中重度子痫前期45例记为重度子痫前期组，轻度子痫前期45例记为轻度子痫前期组，同时选取本院45例门诊体检或入院待产晚期健康孕妇作为健康对照组，所有孕妇检测孕周均超过28周。所有研究对象或家属均签署知情同意书。

纳入标准：患者经临床确诊均符合子痫前期的诊断标准；所有患者均为单胎自然受孕且均为初产；所有孕妇均未临产并经产检确认无胎儿畸形病例；所有研究对象均无抽烟、酗酒等不良嗜好；同意本研究方案患者。

排除标准：排除合并严重肝肾功能障碍患者；排除合并有自身免疫性疾病患者；排除慢性高血压疾病以及全身感染性疾病患者；排除合并糖尿病患者。

1.2 方法

入院后收集患者的年龄、BMI、孕周收缩压、舒张压、平均动脉压等临床一般资料，空腹12小时静脉取血(静置2小时，高速离心分离血浆(离心5 min,3 000 r/min)，将分离后血浆保存于4℃冰箱内待检。采用酶联免疫吸附法对孕妇的血浆sICAM-1、sCD40L水平进行测定。试剂盒均购自上海哈灵生物科技有限公司，所有检测操作均严格按照试剂盒说明书进行。采用流式细胞仪对所有孕妇的孕妇外周血浆中Tang 细胞和EPC细胞占淋巴细胞数的百分含量进行测定[7]。注意观察记录并分析比较。仪器:美国Becton Dickinson 公司Accuri C6流式细胞仪。分析比较各组孕妇的一般临床资料、血浆sICAM-1、sCD40L水平、血浆中Tang 细胞和EPC细胞含量的差异，并对血浆sICAM-1与sCD40L水平以及血浆中Tang 细胞含量和EPC细胞含量之间的相互关系进行分析。

1.3 统计学处理

所有数据采用SPSS19.0统计软件进行分析,计数资料以例数(百分数)的形式表示，采用χ2检验对计数资料进行统计分析；计量资料采用(均数±标准差)表示,统计分析采用t检验，多组间比较行方差分析(F检验)；采用Pearson检验对患者血浆sICAM-1、sCD40L水平间相互关系及血浆中Tang 细胞和EPC细胞含量的相互关系进行相关性分析。以P值<0.05认为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般资料比较

重度子痫前期组、轻度子痫前期及对照组患者年龄、BMI、检测孕周等临床一般资料比较，均无显著性差异(P>0.05)；三组研究对象收缩压、舒张压、平均动脉压及分娩孕周比较存在显著差异(P<0.05)，见表1。

表1 三组患者的一般资料比较

注：*P<0.05,表示与对照组相比；#P<0.05,表示与轻度子痫前期组相比。

2.2 三组患者的血浆sICAM-1、sCD40L水平及血管内皮损伤相关细胞EPC、Tang含量比较

重度子痫前期组与轻度子痫前期组的血浆sICAM-1 、sCD40L水平均明显高于对照组(P<0.05) ，同时，重度子痫前期组上述指标显著高于轻度子痫前期组(P<0.05) 。重度子痫前期组及轻度子痫前期组EPC、Tang含量均明显低于对照组(P<0.05)，重度子痫前期组和轻度子痫前期组上述指标相比较差异无统计学意义(P>0.05) 。见表2。

表2 三组患者的血浆sICAM-1、sCD40L水平及血管内皮损伤相关细胞EPC、Tang含量比较

注：与对照组比较，*P<0.05；与轻度子痫前期组比较，#P<0.05

2.3 相关性分析

Pearson相关性检验结果显示，健康对照组孕妇血浆EPC细胞含量与Tang细胞含量及血浆sICAM-1水平与sCD40L水平均无明显相关性；重度子痫前期组、轻度子痫前期组孕妇血浆EPC细胞含量和Tang细胞含量呈正相关(r=0.654，P<0.05)，且两组孕妇血浆sICAM-1水平与sCD40L水平也呈正相关(r=0.624;P<0.05)。

3 讨论

临床研究表明，子痫前期病情的发生和发展与血管内皮损伤、血管活性物质失衡、免疫异常、凝血功能障碍、氧化应激、炎症反应等多种病理因素密切相关。血管内皮细胞功能损伤为其发病机制的重要环节。

CD40L 为机体重要炎症介质，炎症反应激活后通常以sCD40L形式存在，sCD40L参与体内的体液免疫、炎症、血管发生、动脉粥样硬化等多种病理生理过程。sICAM-1为介导黏附反应重要的一个黏附分子，主要通过结合血管内皮细胞对应抗体介导细胞与细胞间或细胞与基质间相互接触和结合，从而参与血管生成、细胞组织生长及分化、炎症反应、免疫应答及肿瘤转移等生理病理过程，sICAM-1 在静息的血管内皮细胞表达水平较低[8]。研究发现，sCD40L与子痫前期患者血管内皮功能损伤密切相关，子痫前期患者早期出现临床症状前一周患者血浆sICAM-1会出现异常增高[9]。本研究对本院收治的子痫前期患者为研究对象，并对患者血浆sICAM-1、sCD40L水平及血管内皮损伤细胞含量进行了检测并予以统计分析，旨在探讨血浆sCD40L、sICAM-1和血管内皮损伤相关细胞与子痫前期严重程度的相关性，研究结果显示，重度子痫前期组、轻度子痫前期及对照组患者年龄、BMI、检测孕周等临床一般资料比较，均无显著性差异(P>0.05)；三组患者收缩压、舒张压、平均动脉压及分娩孕周比较存在显著差异。子痫前期组的血浆sICAM-1、sCD40L水平均明显高于对照组(P<0.05)，同时轻度子痫前期组上述指标明显高于对照组(P<0.05) 。提示随着疾病严重程度增加，孕妇血浆sICAM-1、sCD40L水平显著增高，反映子痫前期孕妇体内存在炎症反应，sICAM-1 、sCD40L水平可能参与了子痫前期的发病，可作为子痫前期疾病严重程度、血管内皮损伤程度的重要监测指标。分析发现sICAM-1、sCD40L的过度表达能通过促进母体体内白介素和肿瘤坏死因子等炎症介质的释放，激活机体炎症反应，同时造成机体局部尤其是胎盘组织免疫失衡致使胎盘组织缺血缺氧形成血管灌注功能障碍，严重损伤血管内皮功能，最终使得患者表现为血管小动脉痉挛，诱发子痫前期。

EPC细胞为血管内皮祖细胞，能够分化成血管内皮细胞，与机体血管损伤密切相关。研究表明，EPC细胞能够促进胚胎血管细胞繁殖增生，同时对于损伤的血管壁具有一定的修复功能[10]。临床实践中，对EPC细胞检测能够为冠心病、缺血性血管病、原发性高血压等血管内皮损伤疾病提供重要的诊疗依据，而子痫前期发病的中心环节为血管内皮损伤，因此，子痫前期病情的发生和发展可能与EPC细胞的衰竭以及异常表达相关。Tang细胞迁移能力较强，通过释放促血管生成因子促进血管新生[11]。此外，相关报道表明，Tang细胞的表达与EPC细胞早期的分化密切相关，二者均与机体血管内皮损伤密切相关[12]。本文研究结果显示，重度子痫前期组及轻度子痫前期组EPC、Tang含量均明显低于对照组(P<0.05)，提示EPC、Tang含量与子痫前期疾病的发生和发展存在密切联系，二者可作为子痫前期的重要临床监测指标。分析认为Tang及EPC细胞减少，血管生成因子表达降低，造成胎盘组织血管密度降低，进而引起血流灌注降低胎盘缺血缺氧，最终致使血管内皮损伤诱发子痫前期。相关报道表明，Tang及EPC细胞的异常表达还会激活母体炎症反应，引起母体免疫系统失衡，使T细胞向Th1型漂移，Th1、Th17含量也升高，从而诱发子痫前期[13]。但重度子痫前期组和轻度子痫前期组上述指标相比较均无明显差异(P>0.05) ，可能由于本文纳入研究样本数量过少所致。

综上所述，子痫前期孕妇外周血EPC和Tang细胞含量明显降低，而血浆sICAM-1、sCD40L水平明显升高，二者可能通过诱发内皮细胞损伤进而影响机体免疫和炎症反应参与子痫前期的发病过程。且血浆sCD40L、sICAM-1及血管内皮损伤相关细胞水平变化与子痫前期严重程度密切相关。

[1]黄启涛,钟 梅,王硕石,等.子痫前期患者血浆晚期氧化蛋白产物水平及其与肾功能的相关性[J].中华妇产科杂志,2014,49(1):52.

[2]卢 琳,胡继芬.血管内皮损伤与子痫前期[J].中国实用妇科与产科杂志,2012,25(4):267.

[3]吴惠芬(综述),王晨虹(审校).血小板反应蛋白与子痫前期的相关性研究[J].国际妇产科学杂志,2013,40(2):126.

[4]吴惠芬(综述),王晨虹(审校).血小板反应蛋白与子痫前期的相关性研究[J].国际妇产科学杂志,2013,40(2):126.

[5]Cornelius DC,Lamarca B.TH17-and IL-17-mediated autoantibodies and placental oxidative stress play a role in the pathophysiology of pre-eclampsia[J].Minerva Ginecol,2014,66(3):243.

[6]谢 幸,苟文丽.妇产科学[M].8版.北京:人民卫生出版社,2013:64-65.

[7]郭叶青,刘佳,曹武占,等.血管生成性T淋巴细胞及内皮祖细胞与子痫前期发病的关系及两种细胞的相关性[J].中华妇产科杂志,2015,50(10):747.

[8]闫东芝,杨海澜.子痫前期炎症免疫过度激活的研究进展[J].中国优生与遗传杂志,2016，24(08):136.

[9]王建波,郑 红,陈 叙,等.乌司他丁对重度子痫前期剖宫产术患者血管内皮细胞损伤的影响[J].中华麻醉学杂志,2015,35(11):1402.

[10]王晓琴,费 何,陈亚萍,等.子痫前期患者血浆中Ghrelin与VEGF、sFlt-1的相关性[J].中国医药导报,2016,13(12):117.

[11]赵大印,辛 虹.血浆sCD40L、sICAM-1变化与子痫前期的相关性研究[J].河北医药,2012,34(15):2295.

[12]Flego D,Severino A,Trotta F,et al.Altered CD31 expression and activity in helper T cells of acute coronary syndrome patients[J].Basic Res Cardiol,2014,109(6):448.

[13]Heimrath J,Paprocka M,Czekanski A,et al.Pregnancy-induced hypertension is accompanied by decreased number of circulating endothelial cells and circulating endothelial progenitor cells[J].Arch Immunol Ther Exp (Warsz),2014,62(4):353.

The analysis of correlation between sCD40L,sICAM-1,EPC and angiogenic T cells with the severity of preeclampsia

XUEFeng,YANYuan,HEPan.

(LaboratoryMedicineofMaternalandChildHealthHospitalofSichuaProvince，Chengdu610041,China)

Objective To explore the correlation between sCD40L,sICAM-1,EPC and angiogenic T cells with the severity of preeclampsia.Methods 45 patients diagnosed with severe preeclampsia( SPE group) ,45 patients diagnosed with mild preeclampsia (MPE group) and 45 healthy pregnant women(Control group) of similar age,BMI and gestational age were selected as the research object.The level of sICAM-1 and sCD40L in the three groups were determinated by ELISA,and the percentage of EPC and Tang were determinated by flow cytometry,then analysed the correlation between sCD40L,sICAM-1,EPC and angiogenic T cells.Results The level of sICAM-1 and sCD40L in preeclampsia group was significantly higher than control group,the above indexes in the SPE group was significantly higher than those in MPE group (P<0.05).The percentage of EPC and Tang cells in MPE group and SPE group were significantly lower than those in the control group (P<0.05),but no difference was found on the above indexes between MPE group and SPE group (P>.05).There was no correlation between the sICAM-1 level and sCD40L level,the percentage of EPC and Tang cells in the control group (P>.05).There was positive correlation between the percentage of EPC and Tang cells in the SPE group and MPE group (P<0.05).And the positive correlation between sICAM-1level and sCD40L level were proved respectively in the SPE group and MPE group (P<0.05).Conclusion The number of EPC and Tang had decreased significantly,while the level of sICAM-1 and sCD40L had increased,it might induce endothelial injury to affects the immune and inflammatory responses in the pathogenesis of preeclampsia.The level of sICAM-1 and sCD40L,the percentage of Tang and EPC had some correlation with the severity of preeclampsia.

sICAM-1；sCD40L；T-lymphocyte subsets；Endothelial progenitor cells；preeclampsia

1007-4287(2017)03-0464-04

R714.24+5

A

2016-04-14)