崔连艳，杨昭婷，倪卫东，玄延花*

(1.延边大学医学院 2013级口腔医学专业，吉林 延吉133002；2.延边大学医学院病理学教研室)

SOX9在食管鳞癌中的表达及临床病理学意义

崔连艳1，杨昭婷2，倪卫东2，玄延花2*

(1.延边大学医学院 2013级口腔医学专业，吉林 延吉133002；2.延边大学医学院病理学教研室)

目的 观察性别决定区Y框蛋白9 (sex-determining region Y box protein 9，SOX9)在食管鳞癌组织中的表达情况，并探讨其在食管鳞癌中的临床病理学意义。方法 在177例食管鳞癌组织中通过免疫组织化学染色法观察了SOX9、P21、CyclinD1、p-AKT-Thr308和 CyclinE的表达情况，并分析研究了SOX9的表达与食管鳞癌患者的性别、年龄、肿瘤大小、原发肿瘤分期、淋巴结转移、临床TNM分期、组织学分级、放疗、化疗和预后的关系。结果 SOX9在食管鳞癌组织中表达与T分期(P=0.026)、TNM分期(P=0.030)、淋巴结转移(P=0.035)和总生存率(P<0.001)密切相关。此外，食管鳞癌中过表达的SOX9和细胞周期相关因子p-AKT-Thr308(P=0.032)、P21(P=0.021) 和Cyclin D1 (P=0.028)阳性表达呈正相关。结论 SOX9与食管鳞癌的发生发展、转移及预后密切相关,SOX9可能成为治疗食管鳞癌的一个重要靶点。

食管鳞癌；SOX9;预后

(ChinJLabDiagn,2017,21:0386)

在中国，食管鳞癌的发病率占全部食管癌的60%-70%并且其预后较差，五年生存率仅仅只有15%[1]。判断识别有效的预后因子对于靶向治疗食管鳞癌具有重要的临床价值。人性别决定区Y框蛋白9 (sex-determining region Y box protein 9，SOX9)是转录因子SOX家族的一个重要成员，它包含着DNA高突变的结合位点。有研究报道过表达的SOX9可增加前列腺癌的侵袭性，促进前列腺癌移植瘤中肿瘤的生长、血管生成和浸润等[2,3]。本论文通过免疫组织化学染色法研究SOX9在食管鳞癌组织中的表达情况，探讨其与食管鳞癌之间的关系。

1 材料与方法

1.1 材料

本研究选取韩国首尔三星医疗中心病理科1998-2008年的食管鳞癌组织存档蜡块标本157例和20例手术切缘处正常食管黏膜组织。食管鳞癌组织中男150例，女7例；年龄小于65岁40例，大于65岁117例。依据美国癌症联合会(AJCC)食管鳞癌TNM分期(2010年)标准：118例无远处转移，39例有远处转移；47例无淋巴转移，110例有淋巴转移；TNM分期I期14例，Ⅱ-Ⅳ期143例；组织学分级Ⅰ级13例，Ⅱ级116例，Ⅲ级28例。所有病例术前未经任何放化疗治疗。所有病例随访5年以上。

1.2 免疫组织化学染色

免疫组织化学染色采用EnVision法,免疫组化EnVision检测试剂盒购自DAKO公司,SOX9抗体购自Abnova公司，p-AKT-Thr308抗体、P21抗体、CyclinD1抗体和CyclinE抗体均购自北京中杉金桥公司。染色步骤按免疫组化染色常规操作步骤进行。 为证明免疫组化检测的特异性,实验中应用了兔IgG代替一抗作为对照,结果为阴性。

1.3 染色结果判定标准

以阳性染色细胞数所占的百分比作为主要分类依据,阳性细胞数超过10%为阳性，阳性细胞数低于10%为阴性。

1.4 统计学方法

统计学分析采用SSPS19.0软件进行，实验数据之间的参数比较采用χ2检验，同时应用Kaplan-Meier法绘制SOX9的表达与患者术后生存时间曲线的关系图，P<0.05的差异有统计学意义。

2 结果

SOX9、p-AKT-Thr308、P21和CyclinD1均主要表达于食管鳞癌组织的细胞核中(图1)。SOX9在食管鳞癌组织中的表达与T分期(χ2=4.966，P=0.026)、淋巴结转移(χ2=4.449，P=0.035)和TNM分期(χ2=4.691，P=0.030)有关；而与患者性别、年龄、远处转移、肿瘤大小、组织学分级及化疗、放疗均无显著关系(表1)。

此外，SOX9与p-AKT-Thr308(χ2=4.590，P=0.032)，P21(χ2=5.306，P=0.021)和CyclinD1(χ2=4.810，P=0.028)阳性表达呈正相关，而与CyclinE(χ2=0.005，P=0.946)阳性表达无关(表2)。Kaplan-Meier 分析表明,SOX9表达阳性组与食管鳞癌患者总生存率(χ2=14.765，P<0.001)显著相关，而与无病生存率(χ2=2.712，P=0.100)无关(图2)。

表1 SOX9在食管鳞癌组织中的表达与临床病理参数的关系

表2 SOX9在食管鳞癌组织中的表达与细胞周期相关因子的关系

图1 食管鳞癌组织中SOX9(A),P21(B),CyclinD1(C)和pAKT-Thr308(D)的表达,EnVision法

图2 SOX9蛋白表达分别与食管鳞癌患者总生存率(A)、无病生存率(B)的关系

3 讨论

SOX9 在乳腺癌、结直肠癌、胃癌中均异常表达，并与其发生发展、侵袭转移、增殖分化及凋亡等密切相关，但SOX9 与食管鳞癌的关系尚不清楚。本研究结果发现，SOX9在食管鳞癌组织中与T分期、TNM分期、淋巴结转移和肿瘤细胞增殖密切相关。因此，对 SOX9与食管鳞癌关系的研究有利于进一步了解食管鳞癌发生、发展及转移机制，为靶向治疗提供新途径。

在Barrett食管或食管腺癌的早期阶段SOX9的表达均具有重要的意义[4]。本研究结果示，SOX9表达率在食管鳞癌T1期比T2-4期显著增高，说明SOX9参与食管鳞癌的进展过程。在食管鳞癌细胞与神经胶质瘤U251细胞中，过表达SOX9均显著增加肿瘤细胞的迁移和侵袭能力[5]。邵长明等[6]报道，在胃癌中SOX9的表达与肿瘤的Lauren分型、浸润深度、淋巴结转移、远处转移、临床TNM分期和患者的5年生存率有关。此结果与我们研究结果类似，表明SOX9可能在食管鳞癌进展及预后过程中起重要的作用。SOX9对神经纤维瘤、髓母细胞瘤、胰腺癌以及前列腺癌预后具有重要的参考价值[7]。本研究结果也发现SOX9高表达与食管鳞癌患者预后密切相关，提示SOX9是评价食管鳞癌患者预后的一个关键因素。

大多数恶性肿瘤细胞中均存在着细胞周期功能异常,从而导致肿瘤细胞恶性增殖[8]。Jiang 等[9]发现SOX9 在肺腺癌组织中高表达，通过影响细胞周期调节分子 P21的表达促进肿瘤细胞增殖。Wang等[10]研究结果显示，SOX9还能促进前列腺癌的增殖和侵袭。在食管鳞癌中SOX9的表达与p-AKT-Thr308、P21和CyclinD1阳性表达呈正相关。说明SOX9可通过影响细胞周期,促进食管鳞癌细胞的增殖，具体的调节机制尚有待进一步的深入研究。

[1]Conteduca V,Sansonno D,Ingravallo G,et al.Barrett’s esophagus and esophageal cancer:an overview[J].International journal of oncology,2012,41:414.

[2]Wang H,Leav I,Ibaragi S,et al.SOX9 is expressed in human fetal prostate epithelium and enhances prostate cancer invasion[J].Cancer Res,2008,68:1625.

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[4]Darlavoix T,Seelentag W,Yan P,et al.Altered expression of CD44 and DKK1 in the progression of Barrett’s esophagus to esophageal adeno-carcinoma[J].Virchows Archiv:an international journal of pathology,2009,454:629.

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[8]Lange CA,Yee Killing D.The second messenger:targeting loss of cell cycle control in endocrine-resistant breast cancer[J].Endocr Relat Cancer，2011，18(4):C19.

[9]Jiang SS,Fang WT,Hou YH,et al.Upregulation of SOX9 in lung adenocarcinoma and its involvement in the regulation of cell growth and tumorigenicity[J].Clin Cancer Res,2010,16(17):4363.

[10]Wang H,Leav I,Ibaragi S et al.SOX9 is expressed in human fetal prostate epithelium and enhances prostate cancer invasion[J].Cancer Res,2008,68:1625.

The clinical pathologic significance of SOX9 expression in esophageal squamous carcinoma

CUILian-yan,YANGZhao-ting,NIWei-dong,etal.

(2013OralMedicineSpecially,YanbianUniversityCollegeofMedicine,Yanji133002,China)

Objective To observe the expression of sex-determining region Y-box 9 (SOX9) proteins and explore the clinicopathologic significance in human esophageal squamous cell cancer (ESCC).Methods The relationship of the expression of SOX9 with sex,age,size,tumor (pT) stage,lymph node metastasis,TNM stage,grade,chemotherapy，radiotherapy and prognosis were examined,respectively.Moreover,we also investigated the SOX9,P21,CyclinD1,CyclinE and p-AKT-Thr308 expression using immunohistochemistry in 177 tissue specimens from ESCC patients.Results The results found that the SOX9 overexpression in ESCC was positively correlated with pT stage (P= 0.026),lymph node metastasis (P=0.035) and TNM stage (P=0.030) and shorter overall survival (P<0.001) markedly.In addition,SOX9 overexpression was positively association with cell cycle-related factors p-AKT-Thr308 (P=0.032),P21(P=0.021) and CyclinD1(P=0.028).Conclusion SOX9 expression was invovled in tumorigenesis,metastasis and prognosis of ESCC and SOX9 maybe a key targeted therapy of ESCC.

esophageal squamous cell cancer;SOX9;prognosis

国家自然科学基金(81460390)；延边大学大学生创新创业训练计划项目基金(ydbksky2016169)

1007-4287(2017)03-0386-04

R735.1

A

2016-12-15)

*通讯作者