郭唯

(深州市医院检验科，河北 深州 053800)

HBsAg灰区在Maglumi4000化学发光分析仪上的建立

郭唯

(深州市医院检验科，河北 深州 053800)

灰区；低浓度HBsAg；化学发光；ELISA；胶体金；中和确证实验

目前检测乙肝的方法主要有ELISA、胶体金和化学发光，化学发光与前两种方法相比具有灵敏度高、样本不需要稀释、能定量等优点，对于位于窗口期和隐性感染的人群能够更好的检出，因而定量检测对于临床输血、流行病学研究、动态观察和治疗具有非常重要的意义。但是化学发光灵敏度的增高，检测下线的降低[1]，使一些弱阳性标本在定性的判读上出现一些问题，而弱阳性结果给临床的分析和解释工作带来了不便。确定实验室所使用化学发光仪器的灰区，并对灰区结果进行正确解读，成为必需。

本实验室通过ELISA、胶体金、中和确证实验对Maglumi4000测出的三组不同低浓度HBsAg进行检测比对，建立Maglumi4000化学发光仪在本实验室HBsAg的灰区，从而对临床结果的解释更具科学性，避免了医疗纠纷。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2013年1月至2015年6月我院使用Maglumi4000化学发光仪进行乙肝定量检测的低浓度HBsAg患者243例，其中标本浓度1～10 index/ mL 72例，11～30 index/mL 108例，31～40 index/mL 63例。Maglumi4000化学发光仪乙肝HBsAg的正常值为0～1 index/mL。

1.2 试剂与仪器 深圳新产业Maglumi4000化学发光仪及配套试剂；深圳汇松MB-580酶标仪；上海荣盛公司生产的ELISA酶联免疫试剂盒；厦门英科新创科技有限公司生产的胶体金乙型肝炎表面抗原测定试剂盒；珠海丽珠公司生产的HBsAg中和确证实验试剂盒。

1.3 方法 对化学发光三个浓度值内的标本分别用ELISA、胶体金和中和确证试剂进行验证，操作严格按照说明书。ELISA法当Cut off值为S/CO≥1时判为阳性，＜1时判为阴性，并参考本实验室SOP文件，实际0.8～1.2之间为可疑；胶体金法按说明书对照线和检测线位置出现两条紫红色线为阳性，试纸只在对照线位置出现一条紫红色为阴性；中和确证实验标本与证实试剂反应的COI标本与对照试剂反应的COI＜50%确认阳性，标本与证实试剂反应的COI标本与对照试剂反应的COI＞50%确认阴性，标本与对照试剂反应的COI＜1.0不确定(可疑)。三种实验结果以确证实验为准。

2 结 果

三组低浓度梯度标本，随浓度的增加，三种方法的阳性率逐渐上升。1～10 index/mL组，Maglumi4000假阳性率为93.2%(68/73），11～30 index/mL组，Maglumi4000阳性率为62%(67/108），31～40 index/mL组，Maglumi4000阳性率为95.2%(60/63），见表1。

表1 三组不同低浓度HBsAg标本用ELISA、胶体金、中和确证实验验证结果分布情况（例）

3 讨论

本研究结果显示，1～10 index/mL的低浓度组72例，ELISA和胶体金完全不能检出，中和实验检出1例阳性，可疑3例，且均集中在浓度接近于10 index/mL的地方，假阳性率高达93.2%，在这一区间国产Maglumi4000的阳性结果意义很小，同时也说明国产发光在这一区域内的精确度存在问题。在11～30 index/mL这个浓度区间，ELISA与胶体金检出比率很小，但确证实验却高达67例阳性，阳性率为62%，说明这一区域Maglumi 4000测出的阳性标本价值很高，化学发光的高灵敏度主要体现这一区域。31～40 index/mL浓度区的63例标本，ELISA和胶体金与化学发光的符合率很高，阳性率为95.2%。以上实验中ELISA和胶体金阳性标本均能够被中和实验确证阳性。灰区设立的目的是找出ELISA和胶体金等方法无法测出的真阳性标本占大多数的区间，11～30 index/mL范围正好符合上面要求。通过控制灰区范围内的标本，达到控制临界阳性标本的目的[2]，通过以上检测分析，建立起我室HBSAg在Maglumi4000上的灰区为11～30 index/mL。

我国是乙肝的高发区，低浓度乙肝的检测一直是乙肝检测的一个热点。近年来化学发光定量检测乙肝使得检出下限大大降低，但高灵敏度的同时也带来了另一个问题，怎样确定化学发光的灰区，以排除定量低浓度阳性样本中的假阳性，并对真阳性低浓度人群进行临床合理解释。在国外ELISA试剂通常定义一段“灰区”的检测范围，结果报告可疑，而国内无论是ELISA、胶体金，还是发光试剂的厂家，都没有对HBsAg的灰区进行设定[3]。随着检验医学的发展，国内一些实验室开始尝试建立自己实验室的灰区。

本实验室通过几种方法的联合检测，基本确定了Maglumi4000检测灰区，并在检验中对这一区域内的标本进行严格登记、解释，建议患者定期复查乙肝和肝功，以观察HBsAg的转归。事实证明这一区域内的真阳性患者，一部分慢慢成为真正的乙肝患者，一部分病毒清除，产生了抗体，灰区的设立有效提高了弱反应标本检测中的临床价值[4]。

Maglumi4000灰区设置的原因，缘于定量实验对结果进行定性解释时所遇到的问题，事实上从量变到质变不是一个实验给出的一个数字就能决定的，在乙肝表面抗原的判定上到现在还没有一个统一的医学决定水平。

[1]吴子安,徐宁,邱智詠,等.乙肝表面抗原ELISA试剂盒检测灰区的探讨[J].实用医学杂志,2013,29(10):1679-1682.

[2]吴伟健,郭如华.ELISA试验灰区设置方法的探讨[J].中国生物制品学杂志,2008,21(10):911.

[3]陈霞,黄丽,姜标.ELISA法检测HBsAg灰区设置的探讨[J].临床输血与检验,2011,13(1):63-64.

[4]姚家奎,丁德坤,张素华,等.EIecsysHBsAg确证试验在灰区及弱反应性标本检测中的应用[J].现代检验医学杂志,2013,28(6): 106-109.

R446.6

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1003—6350（2017）03—0504—02

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.03.055

2015-12-21)

郭唯。E-mail：2636904142@qq.com