FSH对泌乳期云岭牛诱导发情的影响

2017-03-08张继才和占星李天平金显栋杨凯亐开兴詹靖玺付美芬王安奎黄必志

中国牛业科学 2017年6期

张继才，和占星，李天平，金显栋，杨凯，亐开兴，詹靖玺，付美芬，王安奎，黄必志

(云南省草地动物科学研究院，云南昆明 650212)

[目的]为提高CIDR+PG法对云岭牛的诱导发情效果。[方法]采用CIDR+PG法和CIDR+FSH+PG法分别对产后40～60 d带犊云岭牛母牛进行了诱导发情的效果比较。[结果]CIDR+PG法的发情率和妊娠率分别为76.5%和58.8%，CIDR+FSH+PG法的发情率和妊娠率分别为90.0%和80.0%；且发情时间更集中，比CIDR+PG法提前19 h，FSH诱导发情效果极好，差异显著(P<0.01)。[结论]利用FSH刺激静止卵巢恢复正常机能，促进卵泡发育的作用，能有效提高CIDR+PG法的诱导发情效果。

云岭牛；诱导发情；CIDR+PG法；FSH

*通讯作者：黄必志(1964-)，云南腾冲人,研究员,主要从事草地畜牧业研究。

随着人民生活水平的日益提高，牛肉、牛乳需求量逐渐增加，集约化、规模化的肉牛、奶牛场发展迅速。在肉牛、奶牛养殖生产中，为追求高产、高效目标，在一定程度上牺牲或限制了母牛繁殖性能的发挥，各种原因引起的不孕不育母牛数量增加，牛群的受胎率降低，养殖的经济效益受到了一定的影响，因此，提高规模化养殖场母牛繁殖力就显得尤为重要。

诱导发情通常指使用外源激素或采取物理措施，使处于休情期或生理乏情阶段的母畜出现正常发情排卵的方法。诱导发情不仅可以延长母畜的繁殖年限，还可以通过缩短产犊间隔和增加产仔(犊)数来提高母畜的繁殖力。所以，采用激素或药物以促进母牛发情的各种措施和方法，在规模养殖场中越来越得到重视。

上世纪70年代，科学家通过对母牛发情周期中内源生殖激素和卵巢活动的变化规律研究发现，黄体产生的孕酮借助负反馈机制的抑制作用来控制母牛的发情和排卵，同期发情技术得到了快速发展和应用，极大的提高了诱导发情的效果和效率，并由此产生了缩短黄体寿命和延长黄体寿命两种同期发情方法。尽管两种方法所用的激素和作用不同，但处理结果完全相同，均能达到让处理牛只在短期内出现集中发情的目的。目前，以CIDR+PG法在同期发情中应用最为广泛，能够获得较高的发情率，但是受胎率偏低。为此，本试验在哺乳母牛的诱导发情过程中利用FSH刺激静止卵巢恢复正常机能，促进卵泡发育，以期提高牛群的受胎率。

1 材料与方法

1.1 试验动物及分组

根据母牛的档案和产犊记录，在云南省草地动物科学研究院舍饲母牛群中共选出37头泌乳(带犊)母牛进行试验，牛只及分组情况见表1。

1.2 药物和器械

CUE-MATE孕酮阴道栓(CIDR)：由Bioniche Animal Health Pty. Ltd.生产，每支含1.56 g P4。

氯前列烯醉注射液：丹东绿丹和华动物有限公司生产，规格2 mL，每支含PG 0.2 mg。

FSH：中国科学院动物研究所生产，规格：10 mg/瓶。使用时用20 mL生理盐水稀释，现配现用，剩余药物置于冰箱在0～4℃保鲜区保存，在下次优先使用。

便携式B超仪：日本本田电子产品有限公司生产，型号：HS-101V。

1.3 试验方法

诱导发情方法：对照组试验牛的诱导发情采用CIDR+生理盐水+PG法，试验组试验牛采用CIDR+FSH+PG法。具体操作方法：发情当天除外，在母牛发情周期的任一天进行CIDR阴道栓埋置，以埋置当天按0 d计，于第5、6、7 d对试验牛每头按3.5 mg剂量的FSH用递减法，一天两次肌肉注射给药，对照组用与试验组等体积的生理盐水一天两次肌肉注射。所有牛只在第7 d的最后一针FSH或生理盐水完成后，进行撤栓和肌肉注射0.4 mg PG。在对牛只进行肌肉注射给药时尽量用小号长针头，在拔出针头的同时用干燥无菌棉对针眼处紧按5 sec以上，防止药物从针眼溢出。

发情观察和人工输精：撤栓12 h后对所有试验牛进行发情观察，每4 h进行1次，每次不少于1 h，认真记录牛只发情表现。以牛只出现稳定站立接受爬胯或在阴道内流出大量清亮透明粘液(俗称“吊线”)的时间为发情时间。对于在撤栓后72 h内出现发情的牛只，分别在发情后12 h和24 h，进行2次人工输精。对于未见到发情的牛只在撤栓后72 h和84 h，进行2次人工输精。

妊娠检查：人工输精后40 d左右，用直肠检查结合B超仪对试验牛进行妊娠检查，判定牛群的妊娠情况。

体况评分方法：按照英国5分制的评分标准[1]执行。

1.4 数据及处理

诱导发情效果主要根据有效同期发情率和妊娠率两个指标进行判定，数据运用SPSS 13.0软件对差异显著性进行分析。有效同期发情率是在撤栓后72h内的发情牛数占试验牛数的百分比，妊娠率为妊娠母牛数占试验牛数的百分比。

2 结果与分析

2.1 试验牛选择及分组结果

影响母牛诱导发情效果的因素较为复杂。在本试验中，为尽量减少母畜年龄、体况和产后时间对本试验结果的影响，在云南省草地动物科学研究院舍饲母牛群内，根据母牛的档案和产犊记录，共选出37头带犊母牛进行试验，对试验牛的条件进行了一定的限制，要求供试牛只年龄在5～6岁，产后时间40～60 d，体况在2.5～4.0分。为此，选择了带犊母牛试验组20头，对照组17头。试验牛选择的具体情况见表1。

表1 试验牛情况

2.2 诱导发情的处理效果

对照组17头牛中，13头观察到静止站立接受爬跨，3头观察到爬跨发情牛但不接受其它牛的爬跨，在牛只静卧休息时见阴门流出少量粘液，1头没有观察到任何发情表现。试验组20头牛中，18头出现静止站立接受爬胯，1头未见到发情表现，1头见有粘液。由此可见，试验组的发情率和妊娠率均明显优于对照组(表2)。

表2 FSH对云岭牛的诱导发情效果

注：同列上肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，未标字母表示差异不显著(P>0.05)；以下同。

通过妊娠检查，对照组和试验组中未见明显发情表现的各有1头牛妊娠，这一结果说明，在诱导发情过程中牛群中会存在发情表现不明显，但仍会出现排卵情况的牛只。所以，对未见发情表现牛只进行输精(配种)，在一定程度上能帮助提高诱导发情的妊娠率。在实际生产上也是值得的，毕竟与犊牛价值相比，多浪费点冻精是可以忽略不计的，同时还能降低犊牛生产成本，提高母牛繁殖力。

2.3 两种处理方法的同期发情效果比较

对照组的13头发情牛中，6头是在撤栓后的24～48 h内发情，7头在48～72 h发情，有效同期率为76.5%。FSH处理组发情的18头牛中，1头在撤栓后的12～24 h内发情，12头在24～48 h内发情，5头是在48～72 h发情。试验表明，试验组的同期发情效果明显优于对照组，试验组牛群发情时间更集中，且较对照组提前19 h(P<0.05)。

表3 不同时间段云岭牛的发情情况

2.4 诱导发情牛只排卵效果

在结束人工输精后的40 d左右，通过直肠触摸卵巢、结合B超仪检查方法对妊娠母牛卵巢上的黄体分布情况进行检查，根据功能性黄体存在位置判断每头母牛左右卵巢的排卵情况，结果表明，对照组10头妊娠母牛中，4头在左侧卵巢排卵，6头在右侧排卵，无两侧排双卵的情况。试验组妊娠母牛中，11头出现排1个卵，其中5头是左侧卵巢排卵，6头是右侧卵巢排卵，有4头出现排双卵和1头出现排3卵的情况。仅从排单卵情况看，右侧卵巢排卵的机率要高于左侧卵巢，但两侧并没有显著差异(P>0.05)。

3 讨论

3.1 带犊母牛乏情的原因

母牛产后乏情期的长短直接影响母牛的繁殖率及养牛业的经济效益[2]。引起产后母牛乏情的原因复杂，其中哺乳是一个最重要因素。在产后早期，由于垂体前叶的LH贮存耗竭，导致LH脉冲性释放的降低，虽与哺乳无关[3]，但随LH贮存量的恢复，哺乳对LH的脉冲性释放可产生抑制作用。哺乳行为对乳头的刺激使乳头的感受器兴奋，冲动信号通过传入神经传递到下丘脑，传入神经元末梢分泌神经递质，使下丘脑神经元对雌激素的负反馈作用的敏感性增加，从而降低脉冲发生器的功能，GnRH分泌受抑制，使FSH、LH处于低水平，卵泡发育受阻，造成母牛乏情[4]。

3.2 FSH功能

卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone，FSH)是由动物垂体前叶嗜碱性细胞合成和分泌的一种糖蛋白类促性腺激素，它能促进颗粒细胞增生，刺激类固醇生成，调节配子细胞的发育和成熟，是下丘脑-垂体-性腺轴中的主要激素之一[12]。FSH在雌性动物可促进子宫内膜生长、排卵、刺激多卵泡发育。FSH还可直接作用于卵巢，刺激卵巢生长，增加卵巢重量。FSH对雄性动物可刺激精子的发生，能刺激曲细精管上皮和次级精母细胞的发育，在LH和雄激素的协同下使精子发育成熟。同时，FSH还能促进其它糖蛋白激素的合成，并可反馈调节下丘脑-垂体-性腺轴，调节性腺激素的合成和分泌，维持动物正常的繁殖性能；成为在动物繁殖，特别是在胚胎移植和超数排卵中应用较为广泛的外源生殖激素之一，有效提高动物繁殖效率。在采用活体采卵进行体外胚胎生产中，用外源生殖激素FSH对供体牛处理，可获得较高的卵泡数和胚胎数，效果优于PMSG[12]。在超数排卵中，郭志勤用FSH对553头供体牛进行处理生产体内胚胎，获得头均生产可用胚胎6.15枚的满意效果[13]。

3.3 CIDR+PG诱导发情的效果

CIDR+PG法的原理是利用埋置CIDR内持续性释放黄体酮(P4)，有效促进母牛卵巢上的小卵泡快速发育，同时抑制大卵泡成熟，使处理牛的卵巢保持在相对一致的生理期。撤出CIDR后使血液中的外源P4水平迅速降低，同时肌注的外源PG使功能性黄体快速溶解，进一步降低血液中内源P4的释放，卵泡成熟的抑制因子作用减弱，卵泡快速进入成熟排卵期，从而实现处理牛在短时间内集中发情。CIDR和律胎素(PGF2α类似物)联合应用对患有卵巢静止和卵巢囊肿的奶牛有较好的疗效，能获得50%和60%受孕率[4]。王昆等利用该方法对胚胎移植的受体黄牛进行诱导发情，发情时间集中在CIDR取出后的40～50 h，与2次PG法[5]相比较，发情时间更集中，同期发情率为76.7%，黄体合格率为76.1%，受体移植的妊娠率为45.7%[6]。该方法对不同地区、不同品种的母牛诱导发情效果确实[7-11]。不同品种、不同季节、不同药品、不同处理时间和母牛体况的差异是造成上述诱导发情效果差异的主要原因[12]。

3.4 FSH对泌乳母牛诱导发情的效果

在本试验对供试动物的品种、年龄、体况等方面进行了严格筛选，均采用同一批次的材料，由专人负责操作，基本保持试验条件的一致性，减少因材料、方法、应激等因素对试验结果造成的影响。虽然对试验牛的条件进行了严格限制，牛只数量偏少，但试验结果足以反映出FSH对带犊母牛进行诱导发情中的作用和影响。对照组的同期发情率和妊娠率分别为76.5%和58.8%，略低于其它科研工作者的试验结果，但无明显差异[7-11]。在试验中所选用的牛只是产后40～60 d内带犊的云岭母牛，受带犊哺乳的影响，多数母牛的卵巢处于静止状态，是造成诱导发情效果差的主要原因[12,13]；而试验组对母牛处理过程中使用的外源激素FSH激活了试验牛卵巢的正常机能，使诱导发情效果显著高于对照组，也还增加了母牛怀双胎(多胎)的几率，在很大程度上能提高母牛繁殖力[14]。采用PVP包埋FSH能有效减少因多次驱赶牛群和多次注射引起的应激，提高超排和诱导发情效果[15]，有待今后试验进行验证。