刘立恒 ， 姚美兰 ， 王 萍 ， 李 麟 ， 吴家斌

(1.江西农业大学动物科学技术学院 ， 江西 南昌 330045 ； 2.江西省吉安市新干县大洋镇农业综合站 ， 江西 新干 331317)

鼠镰形艾美耳球虫致病性试验

刘立恒1， 姚美兰2， 王 萍1， 李 麟1， 吴家斌1

(1.江西农业大学动物科学技术学院 ， 江西 南昌 330045 ； 2.江西省吉安市新干县大洋镇农业综合站 ， 江西 新干 331317)

小鼠作为实验动物，在多种医学科学实验中被广泛应用。其需求量日益增多，并且对质量的要求越来越高[1]。实验动物感染寄生虫可使实验研究受到干扰，甚至影响结论的正确性，从而降低科研的科学性、准确性及稳定性[2]。多发易发的鼠球虫病是由艾美耳球虫寄生于鼠的肠道而引起小鼠消化不良和腹泻甚至死亡症状的寄生虫病，危害较为严重。据报道，寄生于小鼠的艾美耳球虫有12种，其生活史清楚且具有一定致病性的镰形艾美耳球虫(E.falciformis)及蠕形艾美耳球虫(E.vermiformis)两种[3]，为了解小鼠感染E.falciformis虫株后出现的临床症状及寄生部位组织病理变化，笔者进行鼠镰形艾美耳球虫致病性试验，旨为共同提高对小鼠镰形艾美耳球虫病的认识,防制小鼠球虫病的发生，保障实验小鼠质量提供临床理论依据。

1 材料与方法

1.1 卵囊 镰形球虫卵囊由本实验室提供。

1.2 动物 球虫病阴性小鼠40只(南昌某实验动物室提供)。

1.3 药品 饱和食盐水和5%重铬酸钾液(实验室提供)，无水乙醇，二甲苯，福尔马林，H.E.染液。

1.4 器械 离心机，显微镜，电冰箱，生化培养箱，电热恒温干燥箱，KD-1508A 轮转式切片机，生物组织标准摊烤片机，ZT-12J 生物组织自动脱水机，电子天平等全套寄生虫实验常规器皿。

1.5 小鼠分组 虫株复壮、增殖、感染、对照4组各为10只小鼠。

1.6 小鼠饲养 小鼠饲养在专用塑料盒内，标注组别，饲喂新鲜鼠料和洁净清水，常换垫料保持卫生。

1.7 虫株复壮、增殖 清水离心洗净卵囊，经口感染小鼠，第8天收集新鲜粪，用饱和盐水漂浮、离心分离收集卵囊，保存于2.5%重铬酸钾液青霉素瓶内，置28 ℃培养箱内培养24～30 h备用。先复壮收集卵囊再增殖，收集大量的卵囊，以保障足够的卵囊数。

1.8 感染致病 以4×104个孢子化卵囊/只，经口感染小鼠，感染后每天观察小鼠临床症状并于第6～10天每天剖检2只小鼠，观察肠道病变、拍照；取小鼠病变肠段H.E.染色制片，显微镜下观察，记录。

1.9 染色片的制作 手术剪横截长约3 mm的盲(结)肠组织3段，用纱布包好放入烧杯中，自来水冲洗12～24 h取出，经脱水机上梯度乙醇自动脱水后经二甲苯透明，用镊子将组织快速夹于30 ℃恒温箱已制好的小纸盒里溶解的石蜡中。取出蜡盒里凝固的蜡块装在KD-1508A轮转式切片机上，调整8 μm切片厚度，匀速缓慢摇柄切片，切片置生物组织标准摊烤片机45 ℃恒温水槽中，用洁净的载玻片捞取蜡带，再用生物组织标准摊烤片机烤片至干燥。苏木精和H.E.染色[4]，封片。

2 结果

2.1 寄生部位 镰形艾美耳球虫主要寄生于小鼠大肠段的盲肠及结肠。

2.2 感染组小鼠临床表现 感染第5～8天小鼠饮食、活动量逐减，精神沉郁，被毛逆乱，采食量减少，消化不良，稀粪并有大量镰形艾美耳球虫卵囊排出，消瘦，甚至死亡(见中插彩版图1)。

2.3 病变 肉眼观察结肠逐渐萎缩变短，内含大量黏液并有少量干酪样物质；盲肠开始肿胀后盲端萎缩变硬，质地变脆，盲肠黏膜上有粟粒大的灰白色的坏死灶，无出血。

2.4 病理组织 显微镜下观察肠绒毛、肠腺、固有膜及黏膜下层等结构具有相当程度的损伤和破坏； 肠上皮细胞凋亡，绒毛脱落。细胞内可见大量裂殖体、裂殖子的和大小不等的合子，但黏膜下未见出血(见中插彩版图2)。

3 分析与讨论

3.1 镰形艾美耳球虫虫株的一般生物性 卵囊形态类圆形，无色，平均大小22.5×18.2 μm，卵囊壁光滑、两层，无微孔，形状指数1.24，有内外残体，孢子化时间为20～24 h，潜隐期为7 d，寄生部位在盲肠或结肠，有一定的毒性。目前在我国小鼠体内发现的多是镰形艾美耳球虫(E.falciformis)[5],此试验提出镰形艾美耳球虫的致病性，防制小鼠球虫病的发生，对控制小鼠的微生物学质量具有指导意义,

3.2 小鼠感染寄生虫的原因及预防 实验小鼠饲养在窄小的笼具中，排泄物和污浊的空气易造成呼吸道、消化道疾病的传播；物质条件的低劣、食物供应不稳定，使实验鼠体质下降，抵抗力降低。小鼠身体素质下降及实验小鼠管理不当的特点，是小鼠感染寄生虫的主要原因。建议加强饲养管理，合理安排换窝时间，加强垫料消毒管理，减少感染。有条件的可通过生物净化手段引进清洁级以上小鼠并在屏障系统内进行饲养和繁殖；定期对饮水、饲料、垫料及紫外灯、消毒锅等的消毒效果进行检测，对室内落下菌及菌群进行分析，确保实验动物的质量。

[1] 杨晓野，刘珍莲,郭媛华，等. 实验小鼠寄生蠕虫及外寄生虫种类分析[J]. 内蒙古畜牧科学，1994,03:38-40.

[2] 李超，郑安洁,张强，等. 实验小鼠体内寄生虫感染情况调查[J].中国寄生虫病防治杂志，2005，02:163-164.

[3] 徐彩云,张大维,邴国强，等. 实验小动物艾美球虫概述[J]. 中国比较医学杂志,2004,05:318-320.

[4] 刘世新，实用生物组织学技术[ M ]，北京：科学出版社，2004：74-75．

[5] 张西臣，杨举，尹继刚，等.费氏艾美尔球虫(E.ferrisi)某些生物学特性的研究[J]. 上海实验动物科学,1997.17(2):64-66.

S852.72+3

B

0529-6005(2017)08-0035-01

2016-09-29

江西省自然科学基金项目(20151BA204017)

刘立恒(1974-)，男，讲师，博士，从事动物寄生虫学研究，E-mail:lihengliu0714@163.com

吴家斌，E-mail:okwjb123@163.com