赵利敬+李沛+张仲博+陈艳伟+史鹏博+巴正

【摘 要】目的：探讨理筋手法对炎症性疼痛大鼠的局部镇痛作用及其机制。方法：将24只SPF级健康雌性SD大鼠随机分为空白组、模型组、手法组，每组8只。除空白组外，其他2组在大鼠足底皮下注射0.1 mL弗氏完全佐剂，建立佐剂性外周炎性痛模型，通过在疼痛局部施以理筋手法，观察手法对大鼠炎症反应、疼痛阈值及局部腺苷含量的影响。结果：造模后，大鼠出现致炎侧足跛行、舔爪、红、肿及热痛敏等反应。造模局部组织可见炎性细胞浸润，肌纤维的萎缩等。手法能抑制弗氏佐剂导致的大鼠缩足、舔爪等自发痛行为，提高炎性痛大鼠的疼痛阈值（P < 0.05）；且能提高大鼠足底病灶局部腺苷含量，手法组局部腺苷含量与空白组、模型组比较，差异有统计学意义（P < 0.05）。结论：理筋手法局部镇痛效果显著，其局部镇痛作用可能通过局部腺苷释放而起作用。

【关键词】 理筋手法；完全弗氏佐剂；炎性痛；镇痛作用；腺苷；大鼠

Experimental Study on the Local Analgesic Effect of Tendon-Soothing Manipulation on Rats with Periphery Inflammatory Pain and Its Mechanism

ZHAO Li-jing，LI Pei，ZHANG Zhong-bo，CHEN Yan-wei，SHI Peng-bo，BA Zheng

【ABSTRACT】Objective：To investigate the local analgesic effect of tendon-soothing manipulation on rats with periphery inflammatory pain and its mechanism.Methods：Twenty four healthy female SD rats were randomly divided into a blank group，a model group and a manipulation group，with 8 rats in each group.Except the blank group，the other two groups were given subcutaneous injection of 0.1 mL Freund's adjuvant in the plantar to establish models with adjuvant peripheral inflammatory pain.Tendon-soothing manipulation was used to observe its effect on their inflammatory reaction，pain threshold and local content of adenosine.Results：After modeling，rats had the following reactions：claudication on the inflammatory side，licking claws，red，swollen and heat hyperalgesia.Inflammatory cell infiltration and atrophy of muscle fibers were seen in the local tissue for modeling.Manipulation could inhibit Freund's adjuvant caused spontaneous pain behaviors such as curling up legs and licking claws and lift their pain threshold（P < 0.05）.It also could improve the content of adenosine in rats plantar lesions.The difference of the content of adenosine between the manipulation group，the blank group and the model group was statistically significant（P < 0.05）.Conclusion：The tendon-soothing manipulation has an obvious local analgesia，whose function may be played by locally released adenosine.

【Keywords】 tendon-soothing manipulation；complete Freund's adjuvant；inflammatory pain；analgesic effect；adenosine；rats

理筋手法是中医骨伤科治疗筋伤的常用方法，具有活血止痛、消散瘀肿、理顺筋脉、解除筋肉痉挛、使筋出槽、骨错缝得以纠正至正常的作用[1]。其在缓解疼痛方面疗效突出，但是长期以来关于理筋手法缓解疼痛的作用机制研究相对较少。本实验模拟临床的理筋手法治疗，观察手法对佐剂性炎症大鼠的镇痛作用，探讨手法缓解慢性炎症痛的作用机制，为临床理筋手法局部镇痛作用提供理论依据。

1 实验材料

1.1 实验动物 选取SPF级健康雌性SD大鼠

24只，体质量（210±20）g，2～3月龄，由郑州大学医学实验动物中心提供，动物许可证号：SCXK（豫）2010-0002。大鼠独立通气笼（IVC），12/12 h昼夜交替节律下进行饲养。适应性喂养，并进行基础痛阈筛选。检测方法[2]：恒温水浴锅调节至51 ℃，热板预热10 min，使后足底接触热板，记录大鼠从放上热板到出现舔右后足痛反应的时间。整个测试环节保持安静，室温20～25 ℃，每次检测后休息5 min，进行下次检测。共测定3次，取测量平均值纳入统计数据。测定值位于8～30 s之间的大鼠纳入实验。

1.2 仪器及设备 弗氏完全佐剂（美国Sigma公司，F5881）；大鼠腺苷酶联免疫试剂盒（上海朝瑞生物科技有限公司）；HWS-26电热恒温水浴锅（上海齐欣科学仪器有限公司）；BX61型万能显微镜（Olympus）；酶标仪（Thermo，Multisan FC）等。

2 方 法

2.1 动物分组及处理 将24只SD大鼠随机分为空白组、模型组、手法组，每组8只。空白组不造模，也不治疗，在安静环境中，固定大鼠，使动物处于清醒状态，固定20 min；模型组参照Raghavendra[3]的造模方法，于实验第1天，在大鼠右后足垫部皮下注射0.1 mL弗氏完全佐剂致炎，建立大鼠佐剂性炎症疼痛模型，不给予治疗，其他处理与空白组相同。手法组造模方法同模型组，造模后第4天

在大鼠右足底涌泉穴（取后肢脚掌心前正中）[4]给予中指点压法手法[1]治疗，时间20 min。通过测量大鼠右后脚掌周径对模型进行评价[5]，分别在造模前、造模后、治疗后测试各组大鼠的热疼痛阈值。测量完毕后，立刻脱臼处死，取大鼠右侧足底肌肉组织。

2.2 手法选择 用手指在所选择的合适穴位上进行点穴按压，又称之为穴位按摩[1]。本实验采用中指点压法，按照点压法相应的操作要领进行，根据中医“以痛为腧”的原则，对大鼠足底涌泉穴处进行手法操作。

2.3 组织切片制作及指标检测 大鼠足底肌肉组织经质量分数为10%的甲醛固定，经不同浓度梯度的乙醇逐级对组织进行脱水，石蜡包埋，切片，进行苏木素-伊红（HE）染色，用Olympus万能显微镜观察组织病理变化；腺苷检测采用Elisa法。

2.4 统计学方法 采用SPSS 19.0软件进行统计分析。计量资料以表示，符合正态分布且方差齐，用单因素方差分析；组内治疗前后比较，采用配对样本t检验；不符合正态性检验及方差齐性检验，则采用秩和检验。以P < 0.05为差异有统计学意义。

3 结 果

3.1 大鼠一般情况 空白组大鼠精神状态好，喜动，反应灵敏，饮食正常；模型组和手法组造模后，大鼠精神萎靡，少活动，致炎侧足部不敢着地、跛行、舔足等；致炎侧足部出现红肿，且在24 h左右达到高峰。这些表现持续3 d后逐渐减轻。见图1。

3.2 各组大鼠造模前后右足脚掌周径比较 造模前，各组大鼠右足脚掌周径比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。造模后，模型组和手法组大鼠右足脚掌周径较造模前增加（P < 0.05），与空白组比较，差异有统计学意义（P < 0.05）。见表1。

3.3 组织病理学 模型组大鼠肌肉组织可见炎性细胞浸润，肌纤维的萎缩，肌纤维间隙增宽，小血管增生等病理改变。见图2。

3.4 各组大鼠造模前后及治疗后热疼痛阈值比较 造模前，各组大鼠热痛阈值比较，差异无统计学意义（P > 0.05）；造模后，模型组、手法组与空白组比较，疼痛阈值均有明显降低（P < 0.05）；模型组与手法组比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。治疗后，手法组热痛阈值与造模后相比明显升高

（P < 0.05）；模型组、手法组与空白组比较，差异有统计学意义（P < 0.05）；模型组与手法组比较，差异有统计学意义（P < 0.05）。见表2。

3.5 各组大鼠治疗后腺苷浓度比较 治疗后，空白组与模型组腺苷浓度比较，差异无统计学意义

（P > 0.05）；手法组大鼠外周组织腺苷含量明显升高，与空白组及模型组比较，差异有统计学意义（P < 0.05）。见表3。

4 讨 论

关于理筋手法缓解疼痛的理论思想早在《黄帝内经·素问》[6]举痛论中记载：“按之则热气至，热气至则痛止矣。”说明手法可以使机体产生热效应，而这种热效应可以镇痛，这也是本课题的理论依据所在。

腺苷即腺嘌呤核苷，由腺嘌呤与戊糖相结合而形成，是一种广泛存在于周围和中枢神经系统的神经递质[7]。有研究显示，腺苷对神经源性疼痛、炎性痛和术后痛均具有镇痛作用[8-10]。Goldman等[11]通过研究发现，针刺的镇痛作用可能是通过局部释放腺苷作用于腺苷A1受体而实现。Takano等[12]则进一步提出了针刺在人体受试者是否也会引起间质性腺苷浓度的增加。他们通过测量受试者在针刺之前、针刺过程中及针刺30 min后足三里的腺苷浓度，发现针刺过程中腺苷浓度显著升高，并持续到针刺后30 min，进一步证实了腺苷在针刺镇痛的关键作用。

笔者在大鼠足底局部皮下注射弗氏完全佐剂，成功建立了大鼠炎性痛模型，结果显示：造模后大鼠精神萎靡，少活动，致炎侧足部不敢着地、跛行、舔足等，且热缩爪潜伏期明显缩短，表现为痛觉过敏，与空白组比较，差异有统计学意义（P < 0.05）。病理结果显示：模型大鼠造模部位肌肉组织可见炎性细胞浸润，肌纤维萎缩，肌纤维间隙增宽，小血管增生等，与空白组比较，这种差异十分明显，这与相关文献报道[13]一致。《黄帝内经·灵枢集注》中有“以痛为腧，随其痛处而即为所取之俞穴也”之论述，对大鼠足部涌泉穴进行手法治疗，是基于中医学“以痛为腧”理论的研究，证明了按压涌泉穴能够缓解炎症痛大鼠的疼痛，与研究报道一

致[14]。 在给予大鼠手法治疗后，其局部腺苷浓度，空白组与模型组之间进行比较，差异无统计学意义（P > 0.05）；手法组大鼠外周组织腺苷含量明显升高，与空白组、模型组比较，差异有统计学意义（P < 0.05）。以上说明理筋手法局部镇痛效果显著，其可能通过局部腺苷释放而起作用。

5 参考文献

[1] 樊粤光，詹红生.中医骨伤科学[M].北京：人民卫生出版社，2014：39-44.

[2] 曹丽娟，韩超，王双华.金铃子散及单味药镇痛抗炎作用的比较[J].天津药学，2012，24（1）：9-11.

[3] Raghavendra V，Tanga FY，DeLeo JA.Complete Freunds adjuvant-induced peripheral inflammation evokes glial activation and proinflammatory cytokine expression

in the CNS[J].Eur J Neurosci，2004，20（2）：467-473.

[4] 华兴邦，李辞荣，周浩良，等.大鼠穴位图谱的研

制[J].实验动物与动物实验，1991（1）：1-5.

[5] 李娜.针刺缓解小鼠完全弗氏佐剂性外周慢性炎症痛的作用及其机制[D].上海：复旦大学，2008.

[6] 黄帝内经素问[M].北京：人民卫生出版社，

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[8] Balasubramanyan S，Sharma SS.Protective effect of adenosine in diabetic neuropathic pain is mediated through adenosine A1-receptors[J].Indian J Physiol Pharmacol，2009，52（3）：233-242.

[9] Yamaoka G，Horiuchi H，Morino T，et al.Different analgesic effects of adenosine between postoperative and neuropathic pain[J].J Orthop Sci，2013，18（1）：130-136.

[10] Zahn PK，Straub H，Wenk M，et al.Adenosine A1 but not A2a receptor agonist reduces hyperalgesia caused by a surgical incision in rats：a pertussis toxin-sensitive G protein-dependent process[J].Anesthesiology，2007，107（5）：797-806.

[11] Goldman N，Chen M，Fujita T，et al.Adenosine A1 receptors mediate local anti-nociceptive effects of acupuncture[J].Nat Neurosci，2010，13（7）：883-888.

[12] Takano T，Chen X，Luo F，et al.Traditional Acupuncture Triggers a Local Increase in Adenosine in Human Subjects[J].J Pain，2012，13（12）：1215-1223.

[13] 李培培，解国雄，宋珊珊，等.大鼠佐剂性关节炎型表现特征及评价指标[J].中国免疫学杂志，2012，28（5）：453-457.

[14] 杨琳，高秀来，刘霞，等.经皮神经电刺激大鼠涌泉穴的fMRI表现和对痛阈的影响[J].放射学实践，2005，20（12）：1087-1089.

收稿日期：2016-07-13；修回日期：2016-11-03