李安全 周小微1.福建医科大学附属南平市第一医院消化内科，福建南平 353000；2.福建医科大学附属南平市第一医院检验科，福建南平 353000

尿素13C 呼气试验与血清抗体和组织病理学在检测幽门螺旋杆菌感染的比较

李安全 周小微
1.福建医科大学附属南平市第一医院消化内科，福建南平 353000；2.福建医科大学附属南平市第一医院检验科，福建南平 353000

目的 比较检测幽门螺旋杆菌（Hp）感染不同方法的敏感性及特异性。 方法 随机选取200例2014年5月～2015 年12 月在我院住院患者，所选中的病例同步完成病理组织学检查、血清抗体检查和尿素13C 呼气试验检测。病理组织学Hp阳性为诊断标准。最后比较这三种方法的阳性率、敏感性、特异性。结果 尿素13C呼气试验、血清抗体、病理组织学三种检测方法的阳性率分别为81.5%，84.0%，78.5%，差异无统计学意义（χ2=1.998，P＞0.05）。尿素13C呼气试验、血清抗体、病理组织学三种检测方法的敏感性分96.97%，97.64%，95.63%，差异无统计学意义（χ2=3.07，P＞0.05）。尿素13C呼气试验、血清抗体、病理组织学三种检测方法的特异性分别为91.43%，93.33% ， 90.00%，差异无统计学意义（χ2=3.07，P＞0.05）。结论 尿素13C 呼气试验、血清抗体、组织病理学三种不同检查方法在检测幽门螺旋杆菌感染差异小，但尿素13C呼气试验操作简单，无侵入性损伤，无痛苦，患者容易接受，是一种较理想的幽门螺旋杆菌检测方法。

幽门螺旋杆菌；尿素13C呼气试验；病理组织学；血清抗体

幽门螺旋杆菌（helicobacter pylori，Hp）是引起很多消化道疾病的首要致病菌，如消化道溃疡、胃癌、慢性胃炎等主要病因。因此如何快速、敏感的检测出是否感染幽门螺旋杆菌，为进一步对上消化道疾病的诊断、治疗以及预防中具有重要意义。本实验通过3种不同的检测幽门螺旋杆菌感染的方法，比较各种方法敏感性、特异性，发现一种应用于临床工作中即简便又实用方法。本研究通过比较3种检测幽门螺旋杆菌的方法，现报道如下。

1　资料与方法

1.1一般资料

选择2014年5月～2015 年12 月在我院消化内科住院患者200例，其中男108 例，女92 例；年龄15～88岁；平均（59.1±20.5）岁。入选标准：有上腹痛、腹胀、上腹不适、早饱、食欲减退等不同消化道症状，胃镜检查及病理活检检查证实。其中慢性胃炎47例，胃溃疡66例，十二指肠球部溃疡82例，胃癌5例。所有病例均为随机选择，男女不限，年龄≥15岁。排除标准：患口腔能产尿素酶疾病，1个月内因不同原因使用具有抑制或杀幽门螺旋杆菌抗生素、铋剂、质子泵抑制剂。受试者均行胃镜检查，同时内镜下活检胃黏膜组织进行病理组织学，并在结束胃镜检查后行血清抗体、尿素13C呼气试验检测。

1.2材料

1.2.1口服尿素13C胶囊 半衰期为5.15h，尿排泄为主，国家食品药品监督管理局标准YBH06682005，H20110130，深圳市中核海得威生物科技有限公司。尿素13C呼气试验药盒（尿素13C胶囊1粒，铝塑包装；集气袋2个），液闪仪。

首先：受试者应在早上空腹时或禁食2h以上受试。其次：在贴有2个集气袋上，受试者填好所需资料。

受试者维持正常呼吸，按以下步骤操作：（1）受试者取下集气袋盖帽，将气体徐徐吹入集气袋，当气充满后，立即将集气袋盖帽盖紧，这次收集的呼气为0min呼气。（2）受试者先服一粒尿素13C胶囊后饮80～100mL凉开水送服，静坐。然后受试者按收集呼气方法，呼气收集管收集30min的呼气，扭紧呼气收集管盖帽。（3）最后将收集到0、30min的集气袋，在相应的仪器上进行13CO2检测。如果呼气袋出现漏气现象，只需当场重新吹起即可。

常用δ‰来表示测定结果，称为千分差值

公式计算结果=δ‰（30min）-δ‰（0min）。

当时≥4.0±0.4时，判定受试者为Hp 阳性。

1.2.2 血清抗体 HP IgG抗体试剂盒（产品标准编号YZB国4915-2012，国食药监械（准）字2012第3401447号）。主要组成成分（幽门螺旋杆菌抗体检测试剂40人份；一次性塑料吸管）。受试者在早晨空腹时静脉血2mL，分离血清，尽量使用新鲜标本，如无及时检验2～8℃保存3d；操作方法：（1）从原装铝箱中取出试剂。（2）将试剂置于干净平台上，用塑料吸管吸取样板，垂直滴注3滴（约100μL）无空气气泡的血清于试剂的加样孔内。（3）等红色条带的出现，结果应在10～20min内判读。

结果判定。阳性：两条红色条带出现；阴性：仅质控区出现一条红带。

1.2.3病理组织 首先在胃镜下取胃窦、胃体的大小弯黏膜组织各1 块共4块。取得标本浸入10%中性福尔马林中固定12h，分别使用不同浓度乙醇、二甲苯透明组织，透明好注入石蜡包埋，在切片机切片厚度定为3μm连续切片，取适合组织，再使用甲苯胺蓝法染色：（1）石蜡切片二甲苯常规脱蜡；（2）滴1%甲苯胺蓝液染色5～8min；（3）接着蒸馏水洗；（4）急速分化使用95%乙醇；（5）无水乙醇脱水2min，二甲苯透明，中性树胶封片。阅片均由指定的一位具有丰富经验的病理科医师阅片。判定标准是按照全国慢性胃炎研讨会共识意见和胃及十二指肠黏膜活检病理判定。

1.3统计学方法

运用SPSS17.0软件进行数据录入及统计分析，各组间比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计意义。

2　结果

2.1阳性率比较

通过三种不同检测方法检测200例患者感染Hp的阳性率结果见表1，尿素13C呼气试验、血清抗体、病理组织学三种检测方法的阳性率分别为81.5%，84.0% ，78.5%，三种方法阳性率比较差异无统计学意义（P＞0.05）。

表1　3种不同检测方法所测定的结果比较

2.2敏感性和特异性比较

以病理组织及13C呼气试验均阳性判为真阳性。Hp诊断的敏感性、特异性在三种不同方法检测结果见表2。尿素13C呼气试验、血清抗体、病理组织学三种检测方法的敏感性分别为96.97%，97.64%，95.63%，差异无统计学意义。尿素13C呼气试验、血清抗体、病理组织学三种检测方法的特异性分别为91.43%，93.33%， 90.00%，差异无统计学意义（P＞0.05）。

3　讨论

幽门螺旋杆菌是一种弯曲、螺旋形或S形的革兰染色阴性微需氧杆菌。1979年澳大利亚学者Warren及Marshall[1]首次从胃黏膜分离培养出幽门螺杆菌，随后发现消化性溃疡和慢性胃炎的首要病因是幽门螺旋杆菌，国际癌肿研究机构认为幽门螺旋杆菌引起胃癌第I类致癌原[2]，十二指肠溃疡大约90%～100%和胃溃疡大约80%～90%存在Hp 感染，慢性胃炎患者约80%～95%的存在幽门螺杆菌感染[3]，甚至是心脑血管疾病危险因素[4]。本实验研究表明，Hp在慢性胃炎的感染率为57.45%，胃溃疡为87.5%，十二指肠球部溃疡93%，胃癌60%，除了慢性胃炎感染率较低外，其他与上述结果相似。本实验慢性胃炎感染Hp比较低可能与地域感染水平低有一定关系。幽门螺旋杆菌定植到胃后，首先通过细菌菌膜表面的尿素酶，尿素酶能分解尿素产生氨，形成氨云围绕在菌体周围，并能分泌不受中性粒细胞杀伤的过氧化物歧化酶和过氧化氢酶，是幽门螺旋杆菌能够存活在人体胃内主要原因。幽门螺旋杆菌通过黏附素，牢牢地与上皮细胞连接在一起。幽门螺旋杆菌通过胃泌素水平升高促进胃酸分泌增加，高酸度可以使胃黏膜形成溃疡。高胃酸通过胃的蠕动到达十二指肠，通过的高胃酸可引起十二指肠黏膜损伤，使十二指肠黏膜变成胃上皮化生。幽门螺旋杆菌具有分泌细胞毒素、炎症介质、免疫、泌酸、氧化均为致病因素，参与致病因子有毒力因子、细胞因子、自由基、毒力基因等[5]。尿素酶、带鞭毛的动力、黏附素、超黏附因子、脂多糖、磷脂酶A 的过氧化氢酶等毒力因子[6]引起消化道疾病。因幽门螺旋杆菌可引起炎症反应，其中DNA 的片段转移及其代谢产物对胃十二指肠黏膜的转化等作用最终可能导致消化道肿瘤的发生[7]。

表2　三种方法对Hp诊断的结果比较

组织病理学检测是通过单独使用苏木素和署红即可识别组织中的幽门螺旋杆菌。组织病理学检测是幽门螺旋杆菌检测金标准之一，原位荧光杂交技术可应用于甲醛固定的活组织标本中幽门螺旋杆菌及其耐药性的检测， 其敏感性为92.4%[8]。该方法受感染水平高低及“局灶”胃窦、胃体黏膜分布，同时受内镜医师经验临床取材局限性，病例切片，病理诊断医师的认真态度及水平等多因素干扰，更多是取材过小过浅甚至活检到坏死组织等，造成假阴性，提高阳性率可多处活检。有研究报道， 活检胃窦、角切迹和胃体3 处标本判断Hp 感染的准确率近100%[9]。组织病理学检测与其他2种方法比较特异性、敏感性稍差，与本实验敏感性95.63%，特异性90%表现相符。比较三种方法结果显示差异无统计学意义（P＞0.05）。组织病理学检测属于有创检查，不适合Hp根治后复查及普查，因此，一种新的替代金标准的方法对于临床筛选与疗效观察非常重要[10]。

因幽门螺旋杆菌能产生尿素酶的特性，予受试者口服尿素13C胶囊后，胃内幽门螺旋杆菌能产生尿素酶，尿素酶迅速将尿素分解为NH3和CO2，CO2经血液进入肺而排出体外，将排出的CO2收集后在仪器上测量，13C呼气试验就是根据该原理进行检测Hp感染。目前国际公认的检测幽门螺杆菌的金标准之一是13C 尿素呼气试验，它既适用于诊断也适用于对根除治疗的监测[11]。本实验结果其敏感性为96.97%，特异性为91.43%，表明该实验确敏感性、特异性均非常高，比较三种方法结果显示，无统计学意义（P＞0.05）。特异性较敏感性稍低，不排除部分患者未漱口，口腔存在其他杆菌能产生尿素酶有关，同时部分患者有口服抑制Hp药物，甚至因近期进食含有抗生素的肉类，间接服用抗Hp药物可能。有研究显示，经鼻进行试验的结果可能会稍改善[12]。因13C 是稳定性核素，不存在放射性污染，对儿童， 孕妇尤为适用[13]。同时13C呼气试验又属于无创性检测，非常适合用于诊断、根治幽门螺旋杆菌后复查及健康人群普查。

血清中幽门螺旋杆菌抗体检查具有特异性高、敏感性强及稳定性好等特点。幽门螺旋杆菌菌体表面存在多种抗原组可激发宿主的免疫应答诱导抗体产生。不同抗体种类由不同细菌的类型产生，分为分泌型和无分泌型，并可预测胃病的严重程度及耐药性[14]。通过本实验表明血清抗体敏感性、特异性均高，但比较三种方法结果显示差异无统计学意义（P＞0.05）。但人体感染幽门螺旋杆菌后数周血中才会出现特异抗体， 且根除Hp后血清中抗体能够维持6个月以上[15]。根据此特性，幽门螺旋杆菌抗体阳性不能判断是否存在Hp活动性感染，同样阴性不能排除初期的感染， 故该项检查适用于流行病学的筛检，不适用于临床诊断。

综上所述，侵入性检查和非侵入性检查是目前幽门螺旋杆菌检查两种方法，其中侵入性检查主要有：活检组织快速尿素酶试验、病理组织学、细菌培养法及血清抗体等方法；非侵入性检查主要有：尿素13C呼气试验、尿素14C 呼气试验、幽门螺旋杆菌抗体及同位素示踪法等。通过对各种方法比较，发现各有优缺点。尿素13C呼气试验既无侵入性检查的创伤性及放射性损伤，同时操作较简便相对Hp抗体测定、Hp 抗原测定、同位素示踪法。尿素13C呼气试验以其无创伤，无放射性损伤，安全准确，简便快捷，敏感性和特异性均较高等特点获得相对优势，在临床工作中应用较为理想。

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Comparison of13C urea breathe test, serum antibody and histopathology in detection of Helicobacter pylori infection

LI Anquan ZHOU Xiaowei
1.Department of Gastroenterology, Nanping First Hospital Affiliated to Fujian Medical University, Nanping 353000, China; 2.Clinical Laboratory, Nanping First Hospital Affiliated to Fujian Medical University, Nanping 353000, China

Objective To compare the sensitivity and specificity of three methods in detection of helicobacter pylori (Hp) infection. Methods 200 patients admitted in our hospital from May 2014 to May 2015 were selected randomly. These patients finished simultaneously the detecting of13C urea breath test, serum antibody and histopathology. Positive result on histopathology in detecting H. Pylori was viewed as the diagnostic criteria. Finally the positive rate, sensitivity and specificity of the three tests were calculated. Results The positive rate of13C urea breath test,serum antibody and histopathology was 81.5%, 84.0% and 78.5% respectively. There was no statistically significant difference of the three tests (χ2=1.998, P＞0.05). The sensitivity of13C urea breath test, serum antibody and histopathology was 96.97%, 97.64% and 95.63% respectively. The three tests had no significant difference(χ2=3.07, P＞0.05). The specificity of13C urea breath test, serum antibody and histopathology was 91.43%, 93.33% and 90.00% respectively. No significant difference was observed in the three tests (χ2=3.07, P＞ 0.05). Conclusion There is no significant difference of the three tests in detecting H. pylori infection.13C urea breath test is a simple, noninvasive and painless test. It is an ideal tool to detect helicobacter pylori.

Helicobacter pylori;13C urea breathe test; Histopathology; Serum antibody

R44

B

2095-0616（2016）17-208-04

（2016-03-31）