朱 颖 史 达南京市食品药品监督检验院药品所，江苏南京 210038

UPLC 同时测定复方三七胶囊中人参皂苷Rg1、Re、Rb1和三七皂苷R1

朱 颖 史 达▲
南京市食品药品监督检验院药品所，江苏南京 210038

目的 建立同时测定复方三七胶囊中人参皂苷Rg1、Re、Rb1和三七皂苷R1的UPLC方法。方法 采用UPLC，ACQUITY BEH C18色谱柱（2.1mm×100mm， 1.7μm），乙腈-水为流动相梯度洗脱，流速为0.45mL/min，检测波长为203nm，柱温为25℃。结果 人参皂苷Rg1、Re、Rb1和三七皂苷R1分别在19.61～392.2μg/mL（r=0.9997）、4.813～96.26μg/mL（r=0.9998）、19.92～398.4μg/mL（r=0.9998）和4.850～97.00μg/mL（r=0.9999）线性关系良好，平均加样回收率（n=9）分别为100.00%、99.78%、99.92%和99.83%， RSD分别为0.30%、0.45%、0.29%和0.54%。结论 方法快速有效，适用于测定复方三七胶囊中人参皂苷Rg1、Re、Rb1和三七皂苷R1含量。

超高效液相色谱；复方三七胶囊；人参皂苷

复方三七胶囊由三七、土鳖虫、白芷、川芎、当归、乳香（制）、红花和没药（制）八味药组成，具有化瘀止血、消肿止痛的功效，用于跌打损伤所致的淤血肿痛，具有很好的临床应用价值[1]。目前该制剂质量标准含量测定项下仅测定方中三七所含的人参皂苷Rg1[1]，其它皂苷类成分的测定国内尚未见报道。三七中主要含三七皂苷和人参皂苷类成分，测定三七饮片及其制剂中多种皂苷类成分的报道较多[2-6]。本研究采用UPLC法同时测定复方三七胶囊中人参皂苷Rg1、Re、Rb1及三七皂苷R1的含量，为全面评价该制剂的质量提供了有效、可行的方法。

1　一般材料

1.1仪器

ACQUITY UPLC（PDA检测器，美国Waters），METTLER TOLEDO X205DU分析天平（0.1mg） 。

1.2试药

复方三七胶囊（吉林市鹿王制药股份有限公司，批号：151101），人参皂苷Rg1对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110703-201529，含量95.0%），人参皂苷Re对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110754-201525，含量92.3%），人参皂苷Rb1对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110704-201122，含量92.9%），三七皂苷R1对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110745-201318，含量94.0%）。甲醇为色谱纯，水为超纯水。

2　方法与结果

2.1对照品溶液的配制

分别精密称取人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1对照品各20mg、人参皂苷Re和三七皂苷R1对照品各10mg，置同一20mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度作为储备液：人参皂苷Rg1和Rb1浓度1mg/mL，人参皂苷Re和三七皂苷R1浓度0.5mg/mL。

2.2供试品溶液的制备

取本品内容物混匀，精密称取1g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，称定重量，置水浴上回流2h，放冷，再称定重量，以甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.3色谱条件

采用ACQUITY UPLC，ACQUITY BEH C18色谱柱（2.1mm×100mm，1.7μm），柱温35℃，乙腈-水为流动相梯度洗脱（洗脱条件见表1），流速为0.45mL/min ，检测波长为203nm，柱温为25℃，进样量1μL。在此色谱条件下人参皂苷Rg1和人参皂苷Re分离度大于2.0，色谱图见图1。

表1　梯度洗脱条件

图1　复方三七胶囊UPLC色谱图

2.4标准曲线

分别精密吸取对照品储备液1、1、1、2、3和2mL，分别置100、50、25、25、20和10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别进样1μL，以峰面积对对照品浓度绘制曲线，分别得回归方程，结果见表2。

表2　标准曲线

2.5精密度考察

取对照品溶液（三七皂苷R138.80μg/mL、人参皂苷Rg1157.0μg/mL、人参皂苷Re 38.50μg/mL、人参皂苷Rb1159.4μg/mL），进样1μL，重复6次，记录峰面积，计算峰面积RSD%分别为0.09%、0.27%、0.17%和0.08%，精密度良好。

2.6重复性考察

平行制备6份供试品溶液，分别进样1μL，记录主峰面积，计算平均含量分别为三七皂苷R11.152mg/g、人参皂苷Rg13.722mg/g、人参皂苷Re 0.5125mg/g、人参皂苷Rb13.292mg/g，RSD%分别为0.23%、0.35%、0.44%和0.22%，重复性良好。

2.7稳定性考察

取供试品溶液一份，分别于0，2，4，8，12，24h时各进样1μL，记录主峰面积，三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1峰面积RSD%分别为0.18%、0.22%、0.31%和0.12%，稳定性好。

2.8准确度考察

精密称取9份已知含量的样品，每份0.3g，置具塞锥形瓶中，将一定量混合对照品溶液分别加入9份供试品中， 甲醇加入量为50mL减去加入的对照品溶液的体积，照2.2项下方法制备，依法用HPLC测定，记录峰面积，计算加样回收率，结果见表3（三七皂苷R1）、表4（人参皂苷Rg1）、表5（人参皂苷Re）和表6（人参皂苷Rb1）。结果表明，本法准确度较好。

2.9样品含量测定

精密称取供试品6份，依2.2项下方法制备供试品溶液，依法测定，计算含量。平均含量分别为三七皂苷R11.152mg/g、人参皂苷Rg13.722mg/g、人参皂苷Re 0.5125mg/g、人参皂苷Rb13.292 mg/g，RSD%分别为0.23%、0.35%、0.44%和0.22%。

3　讨论

3.1色谱条件的确定

人参皂苷类成分的HPLC分析往往需要比较长的时间，如《中国药典》[6]中三七的皂苷类测定方法需要60min， 文献报道的一些复方制剂中测定该类成分也需要60min及更长的时间[8-10]，如要分离人参皂苷Rg1和Re，分析时间则延长更多[5]。UPLC法因分析时间短、分离效率高，越来越多地用于中药复杂、难分离成分的测定[7，12]，三七及复方制剂中人参皂苷类成分的分析时间也因此大大缩短[2-3，11，13-15]，既节省时间、精力，又大大减少了流动相的使用，降低环境污染。

表3　三七皂苷R1回收率测定结果

表4　人参皂苷Rg1 回收率测定结果

表5　人参皂苷Re 回收率测定结果

表6　人参皂苷Rb1 回收率测定结果

复方三七胶囊中的三七所有药材均为生药原粉，有紫外吸收的成分较多，HPLC分离诸多组分较困难。本文采用UPLC法同时测定复方三七胶囊中人参皂苷Rg1、Re、Rb1及三七皂苷R1，以乙腈-水作为流动相进行梯度洗脱，检测波长203nm，通过优化梯度洗脱条件，人参皂苷Rg1和Re分离度大于2.0，为全面评价复方三七胶囊的质量提供了快速有效的方法。

3.2提取条件的优化

试验中选择了甲醇超声（1h，2h）和甲醇回流（1h，2h，3h，4h）进行提取效率的考察，发现甲醇回流明显优于甲醇超声，甲醇回流时间越长测定的四种成分含量越高，回流3h和4h测得含量仅略高于回流2h测得含量，长时间回流意义不大，故选择甲醇回流2h。甲醇回流提取后，放冷，补足甲醇减失重量后用0.22μm微孔滤膜过滤后即于UPLC进样分离分析，无过多繁冗的提取步骤，方法精密度、准确度均较好，简便易行。

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Simultaneous determination of ginsenoside Rg1, Re, Rb1 and notoginsenoside R1 in Fufang Sanqi capsule by UPLC

ZHU Ying SHI Da
Drug Inspection, Nanjing Institute for Food and Drug Control, Nanjing 210038, China

Objective To determine ginsenoside Rg1, Re, Rb1and notoginsenoside R1in Fufang Sanqi capsule by UPLC. Methods UPLC was performed on a ACQUITY BEH C18column(2.1mm×100mm, 1.7μm) at 25℃. Acetonitrile- water gradient elution was applied at the flow rate of 0.45ml /min. The detection wavelength was 203nm. Results Ginsenoside Rg1, Re, Rb1and notoginsenoside R1were thoroughly separated with the related substances. The linear ranges were 19.61～ 392.2μg/mL(r=0.9997), 4.813～ 96.26μg/mL(r=0.9998),19.92～ 398.4 μg/mL (r=0.9998) and 4.850～97.00μg/mL(r=0.9999), the average recoveries (n=9) were 100.00%, 99.78%, 99.92% and 99.83% with RSD of 0.30%, 0.45%, 0.29% and 0.54%. Conclusion The method is fast, efficient, and it is suitable for determining ginsenoside Rg1, Re, Rb1and notoginsenoside R1in Fufang Sanqi capsule.

UPLC; Fufang Sanqi capsule; Ginsenoside

R927.2

A

2095-0616（2016）17-33-04

▲

（2016-06-28）