杨桂柱 周丽丽 闫少羽 崔 立（上海交通大学农业与生物学院 0040;上海药明康德新药开发有限公司 003）

MLN4924在人乳腺癌小鼠移植瘤模型BR-05-0028中的药效学研究

杨桂柱1，2周丽丽2闫少羽2崔 立1*（1上海交通大学农业与生物学院 200240;2上海药明康德新药开发有限公司 200131）

为探讨MLN4924联合X射线放疗对人乳腺癌小鼠移植瘤模型BR-05-0028的治疗作用，采用病人来源的乳腺癌组织构建动物肿瘤模型，观察了MLN4924治疗对肿瘤细胞生长的影响。结果表明，MLN4924联合X射线放疗能够明显抑制BR-05-0028细胞的增殖。H.E染色结果显示，MLN4924联合放疗对肿瘤组织坏死较少。

MLN4924；X射线放疗；乳腺癌；小鼠移植瘤模型BR-05-0028；应用效果

近年来，乳腺癌是一种严重危害妇女健康的癌症，其发病率在全世界范围内呈逐年上升趋势，是女性人群主要的恶性肿瘤[1]。MLN4924是新型的NEDD8-活化酶 (NAE)抑制剂[2，3]。为探寻一种新型有效的乳腺癌治疗方法，研究了MLN4924联合X射线放疗对乳腺癌的治疗作用，现将相关实验情况报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验设计

本实验采用病人来源的肿瘤组织接种到免疫缺陷鼠皮下构建实验模型。共采用BALB/c 裸鼠24只，雌性，体重20-22 g，由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供。随机平均分为4组，I组为对照组；II组为放疗组；III组为MLN4924治疗组；IV组为MLN4924联合放疗组，具体实验设计（见表1）。

表1 实验组别与给药设计

1.2 模型制作

将病人来源的乳腺癌样本接种到小鼠右侧腋窝皮下处。待肿瘤长至约130 mm3时进行随机分组治疗。

1.3 观察指标和测试方法

动物分组给药后，观察小鼠健康及活动状况，监测移植瘤的生长进展，每周2次测量小鼠体重和肿瘤体积。实验结束时，用CO2将动物安乐死，然后剥取肿瘤，用4%甲醛溶液固定，石蜡包埋并切片，进行H.E染色。

1.4 统计学分析

各组数据以均值±标准误 (x-±S.E.) 表示，组间比较采用方差分析，所有数据均用SPSS统计软件进行分析。

2 结果与分析

2.1 体重变化

给药后，对照组和MLN4924治疗组的裸小鼠体重稳步增长，而放疗组及MLN4924联合治疗组的裸小鼠体重增长缓慢，相对体重变化率（见表2）。

表2 MLN4924及X射线放疗对裸鼠相对体重的影响

2.2 肿瘤体积

与对照组比较，给药35 d后，MLN4924治疗组与对照组间肿瘤体积在统计学上无显著差异（P＞0.05），而放疗组和MLN4924联合放疗组的肿瘤体积明显小于对照组，与对照组间有极显著差异(P＜0.01)。结果表明，MLN4924剂量30 mg/kg时对乳腺癌BR-05-0028抗肿瘤作用不明显，而放疗及联合治疗表现出较好的抑制肿瘤作用（见表3）。

表3 MLN4924及X射线放疗对裸鼠肿瘤体积的影响

2.3 病理检测

在镜下对照组出现肿瘤组织伴有坏死、炎症细胞浸润和

肿瘤细胞核多极分裂等现象；放疗组出现组织坏死和炎症细胞浸润等现象；MLN4924治疗组的肿瘤组织坏死较少，可见炎症细胞，同时肿瘤组织有纤维化倾向；MLN4924联合放疗组的肿瘤组织坏死较少（见图1）。

图1 BR-05-0028乳腺癌裸鼠移植瘤病理切片(HEX400)

3 结论与讨论

MLN4924是一种新型NAE抑制剂，可通过结合并失活NEDD8活化酶的方式杀死癌细胞，在对肺癌[4]、胰腺癌[5]动物模型的治疗过程中表现出较好的治疗作用。为降低单一放疗对机体产生的副作用[6]，本实验利用病人来源的乳腺癌瘤块接种至BALB/c裸鼠皮下建立模型，通过MLN4924联合X射线放疗，在减少放疗对机体损伤的基础上，保证了对癌细胞的杀伤。结果表明，MLN4924剂量30 mg/kg作为增敏剂联合X射线放疗（1Gy）能有效抑制肿瘤细胞的增殖，同时对裸鼠体重没有产生明显的影响，且H.E染色结果显示，MLN4924联合放疗组的肿瘤组织坏死较少。

本研究采用的病人来源瘤块接种建模方法[7]，较传统的细胞系悬液接种法更能保持肿瘤细胞原有的生物学特性[8]，有利于真实呈现原生肿瘤的生理环境和病理状态，使模型有更好的稳定性及治疗的可靠性。

[1] 李树玲.乳腺肿瘤学[M].北京：科学技术文献出版社,2000.

[2] Mori F, Nishie M, Piao Y S, et al. Accumulation of NEDD8 in neuronal and glial inclusions of neurodegenerative disorders[J]. Neuropathology & Applied Neurobiology, 2005,31(1):53-61.

[3] Lijun Jia, Hua Li,Yi Sun.Induction of p21-dependent senescence by an NAE inhibitor, MLN4924, as a mecha nism of growth suppression[J].Neoplasia,2011,13(13):561-569.

[4] 董扬,黎友伦.MLN4924促进人肺癌细胞株A549凋亡的机制研究[J].中国肿瘤临床,2012,(24):2055-2058.

[5] Dongping Wei, Hua Li, Jie Yu, et al. Radiosensitization of human pancreatic cancer cells by MLN4924, an investigational NEDD8-activating enzyme inhibitor[J].Cancer Research,2012,72(1):282-293.

[6] 谢慧红.乳腺癌术后放疗的副作用及护理[J].中国误诊学杂志,2008,(2):392-393.

[7] 杨桂仙,张大方.乳腺癌动物模型的研究现状与评价[J].长春中医药大学学报,2007,23(2): 82-83.

[8] 丁健.人类炎性乳腺癌移植肿瘤裸鼠动物模型的建立和生物学特性的研究[J],中华外科杂志,2001,39(10):796-798.

2015-12-17

*为通讯作者。