郝玉青白艳艳刘健鹏杨增岐韩 斌

（1.榆林市动物疫病预防控制中心，陕西 榆林 719000；2.西北农林科技大学动物医学学院，陕西 杨凌 712100）

陕北白绒山羊小反刍兽疫及口蹄疫疫苗免疫方法比较

郝玉青1，2白艳艳1刘健鹏1杨增岐2*韩 斌1

（1.榆林市动物疫病预防控制中心，陕西 榆林 719000；2.西北农林科技大学动物医学学院，陕西 杨凌 712100）

为了合理使用小反刍兽疫疫苗和口蹄疫疫苗以及了解这两种疫苗用于陕北白绒山羊的免疫效果，改进免疫方法，本试验选取榆林市神木县金鸡滩镇一家规模化陕北白绒山羊羊场160只基础繁殖母羊为对象，将试验羊分成6组，分别进行小反刍兽疫疫苗和口蹄疫疫苗单独注射以及间隔7天分别注射不同疫苗、同时分点注射不同疫苗，设不注射疫苗组为对照组。免疫后第28天颈静脉采血并制备血清样品，用ELISA试剂盒进行免疫后抗体检测。结果表明试验组三同时分点注射O型口蹄疫与小反刍兽疫疫苗后抗体阳性率分别为80.00%和100.00%，与试验组四以及试验组五分别单独注射一种疫苗7天后不同点再注射另一种疫苗后检测抗体率之间差异不显著。说明O型口蹄疫疫苗与小反刍兽疫疫苗可以同时一次性分点注射。该研究为O型口蹄疫疫苗与小反刍兽疫疫苗的合理利用提供了可靠的试验依据。

陕北白绒山羊 小反刍兽疫疫苗 O型口蹄疫疫苗 疫苗分点注射

小反刍兽疫（Peste des petites ruminants，PPR）也称小反刍兽假性牛瘟、肺肠炎、口炎肺肠炎复征，是由小反刍兽疫病毒（Peste des petites ruminants virus，PPRV）引起的一种急性接触性传染病，主要感染小反刍动物（山羊和绵羊等）［1］。口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的一种急性、发热性、高度接触性一种人畜共患传染病，是动物中传染性最强的疾病［2］。O型口蹄疫作为国家强制免疫疫病，每年春秋两季都必须进行高密度的防疫。外来疫病小反刍兽疫的入侵给动物疫病的防控带来新的挑战，致使羊疫病防控种类增多。为了促进防疫工作开展，减少防疫人员的劳动强度，提高免疫密度和工作效率，更好的指导生产，我们开展了山羊小反刍兽疫与O型口蹄疫分组分点注射的免疫试验，现将有关研究结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验动物 选自榆林市神木县金鸡滩镇一家规模化陕北白绒山羊羊场160只基础繁殖母羊，试验羊只临床检查健康、无临床疾病表现。试验羊按规范进行饲养和管理，精饲料为配合饲料，粗饲料为青干草，为舍饲饲养。试验羊只从未接种过口蹄疫疫苗和小反刍兽疫疫苗，基础抗体为零。

1.1.2 疫苗来源和规格 羊口蹄疫疫苗为O型、亚Ⅰ型二价灭活苗（OJMS株+JSL株），由呼和浩特市金宇保灵生物药品有限公司生产。灭活前每0.1ml病毒含量≥2×107.0TCID50，免疫期为4～6个月；小反刍兽疫疫苗为新疆天康畜牧生物技术股份有限公司生产，该弱毒苗每头份疫苗含有的小反刍兽疫弱毒病毒≥103TCID50，免疫期持续暂为36个月。

1.1.3 诊断试剂 O型口蹄疫液相阻断免疫抗体ELISA试剂盒（批号：2014031901）和小反刍兽疫竞争ELISA试剂盒购（批号：2014061802）均购自中国农业科学院兰州兽医研究所。

1.1.4 诊断仪器 Eppendorf单、双道可调移液器；美国宝特（ELX50）自动洗板机；江苏科析KX-303恒温培养箱；美国Multiskan FC酶标仪。

1.2 方法

1.2.1 试验分组及血清样品的采集

选取未免疫过O型口蹄疫疫苗和小反刍兽疫疫苗且基础抗体为零的在相同饲养条件下饲养的160只健康羊，随机分成六组，前五组每组30只，第一组注射O型口蹄疫疫苗；第二组注射小反刍兽疫疫苗；第三组分两点同时注射O型口蹄疫疫苗和小反刍兽疫疫苗两种疫苗；第四组先注射O型口蹄疫疫苗隔7d后再不同点注射小反刍兽疫疫苗；第五组先注射小反刍兽疫疫苗隔7d后再不同点注射O型口蹄疫疫苗；第六组10只不注射任何疫苗。分组详细情况见表1。整个免疫剂量及操作按照疫苗使用说明书的规定进行。免疫后28d颈静脉采血并制备血清样品，共计160份。

表1 试验分组及免疫种类

1.2.2 检测方法

O型口蹄疫免疫抗体检测使用O型口蹄疫液相阻断免疫抗体ELISA试剂盒（LPB-ELISA）进行抗体合格率的检测；小反刍兽疫免疫抗体检测采用小反刍兽疫竞争ELISA试剂盒进行抗体合格率的检测。

1.2.3 判定标准

O型口蹄疫液相阻断ELISA（LPB-ELISA）试验的抗体效价≥26（1：64）时判定为合格。小反刍兽疫阻断ELISA 阻断率（PB）>50判为阳性，表述为小反刍兽疫血清学阳性；待检样品阻断率（PB）≤50，判为阴性。

2 结果与分析

小反刍兽疫疫苗与O型口蹄疫疫苗不同组免疫抗体检测结果见表2。

表2 小反刍兽疫疫苗与O型口蹄疫疫苗试验结果

3 讨论

（1）结果显示小反刍兽疫弱毒活疫苗不论单独免疫注射还是组合免疫，抗体阳性率差异不大，说明该疫苗都具有很好的免疫效果［4］，不受其他疫苗的干扰，抗体合格率都超过国家标准70%。口蹄疫灭活苗不论单独免疫还是组合免疫，抗体阳性率差异相对较大，口蹄疫需要较高的抗体水平才提供有效的保护力，免疫效果普遍不好的这种现象可能与疫苗毒株选择上有一定的相关性，口蹄疫基因型较多，各型间没有交叉免疫性，同血清型的各拓扑型之间也仅有部分交叉免疫性［5］。

（2）一次分点同时注射两种疫苗的免疫阳性率与两次分顺序、分时、分点注射疫苗的免疫阳性率比较差异性不大，疫苗免疫效果相当。实验中观测到所有的实验羊没有出现副反应，两种疫苗的安全性较高。

（3）仅进行一次O型口蹄疫疫苗免疫，抗体群体合略高于70%，可以看出首免，且免一次羊口蹄疫苗免疫抗体合格普遍不高，需进行二次免疫，主要是由于口蹄疫是灭活疫苗，灭活苗仅免疫一次抗体水平不高。二次免疫抗体水平升高，是由于首免对于抗体的产生没有更加明显的积极作用，但它可以刺激免疫细胞，起到所谓的“预刺激”作用，并促使其产生口蹄疫特异的记忆细胞，在首次免疫后选择合适的时间点进行第二次免疫，此时由于第一次的预刺激会提高第二次的免疫反应［5］。

4 结论

O型口蹄疫疫苗与小反刍兽疫疫苗两者之间的免疫抗体相互影响不明显，可以同时一次性分点注射。该研究为O型口蹄疫疫苗与小反刍兽疫疫苗的合理利用提供了可靠的试验依据，可在陕北白绒山羊养殖中进行推广。

［1］ 田克恭，李明.动物疫病诊断技术理论与应用［M］.中国农业出版社：2014：490-491.

［2］ 宁宜宝.兽用疫苗学［M］.中国农业出版社，2008：239-244.

陕北白绒山羊健康养殖与主要疫病防治关键技术研究与示范（2015年农业科技创新转化资金项目）

郝玉青（1988-），男，陕西 靖边人，兽医硕士，主要从事动物疫病防控工作。

杨增岐由表2可以看出，口蹄疫疫苗一次免疫抗体合格为70%，而小反刍兽疫疫苗一次免疫抗体合格率达到99.17%，表明现有的口蹄疫疫苗的免疫效果没有小反刍兽疫疫苗效果好，但是O型口蹄疫疫苗抗体合格率超过国家标准70%的要求。从各组来看，小反刍兽疫疫苗和O型口蹄疫疫苗单独使用和联合使用，所产生的抗体阳性率之间差异均不显著（P>0.05）。尤其是试验组三和试验组四、试验组五之间小反刍兽疫疫苗抗体合格率分别为100%、96.67%和100%，O型口蹄疫疫苗抗体合格率各组分别为80.00%、73.33%和76.67%，各组之间检验无差异（P>0.05），说明就本试验采用的疫苗使用方法，小反刍兽疫疫苗与O型口蹄疫疫苗一次同时分点免疫和间隔7d不同点再注射后检测抗体率之间差异不显著，提示这两种不同疫苗可以同时分点注射，这样可以大大降低保定羊的劳动强度和减少多次注射疫苗对羊产生应激。