王　稳　于善萍　刘晓虹



尖锐湿疣患者宫颈HPV分型检测

王稳于善萍刘晓虹

尖锐湿疣(Condyloma acuminate, CA)是由人乳头瘤病毒(Human Papillomavirys, HPV)所引起的一种性传播疾病，其发病率逐年上升，近年来受到广泛关注。而宫颈癌是我国最为常见的恶性肿瘤之一，是我国女性第二大癌症。HPV可分为高危型和低危型两种，长期持续感染高危型HPV可以导致宫颈癌，低危型HPV可导致生殖器CA。而且，有一定比例的低危型感染还伴有高危型混合感染。因此，对临床的CA患者进行宫颈HPV分型检测，对于HPV感染的治疗以及预测宫颈癌的发生具有重要意义。我们采用凯普导流杂交基因芯片技术，采集CA患者的宫颈脱落细胞进行HPV分型检测，以探讨此类患者宫颈HPV的感染状况和基因型别。

1　材料与方法

1.1病例选择218例患者来自2012年7月至2013年3月在我院女性科门诊就诊的患者，均因外阴赘生物，经5%醋酸白试验阳性临床诊断为CA。年龄16～61岁，平均年龄28.5岁。其中29例患者宫颈有CA，121例患者伴有不同程度的宫颈糜烂。

1.2标本采集按照凯普HPV DNA检测法的要求，用无菌棉拭子擦净宫颈口分泌物，将专用宫颈刷伸入宫颈口(鳞柱细胞交界)处，轻轻旋转宫颈刷3至5圈取得脱落细胞，再将宫颈刷放入装有细胞保存液和注明编号的样本管中待检。

1.3检测方法采用凯普医用核酸分子快速杂交基因分型试剂盒作HPV DNA检测及分型。实验操作与结果判读按试剂盒要求进行：样本HPV DNA提取-PCR扩增-核酸分子快速导流杂交--显色HPV基因分型。此检测包括高危型HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68，和低危型HPV6、11、42、43、44、CP8304，共21个基因型。

2　结果

218例CA患者以21～30岁年龄段最多，HPV DNA检出率最高年龄21～25岁，为74.63%，高危型检出率最高年龄41～50岁，为50%。218例CA患者中有138例宫颈HPV DNA检测结果为阳性，占63.30%。所检测的21种HPV基因型中有20种被检出，未发现HPV43型。检出率最高是HPV11(24.31%，53/218)和HPV6(23.85%，52/218)，最低是HPV42、HPV44和HPV52(均为0.92%,2/218)，见表1。

3　讨论

HPV是一种小分子双链DNA病毒，主要感染人的皮肤或黏膜上皮细胞，引起感染部位的良恶性病变。根据不同基因型与癌发生的危险性高低可分为：低危型HPV，常引起外生殖器湿疣、宫颈上皮内低度病变(CIN1)等良性病变；高危型HPV，与宫颈癌及宫颈上皮内高度病变(CIN2/3)的发生相关。HPV基因芯片分型是目前最先进的检测技术，它采用PCR技术和基因芯片技术，利用PCR技术的高灵敏性、基因芯片的高通量和高特异性快速诊断HPV的感染。我们应用该技术对CA患者的宫颈脱落细胞进行HPV基因分型检测，有以下发现：

1.外阴CA患者的宫颈HPV基因型以低危型为主，主要是HPV11(24.31%)和HPV6(23.85%)，但亦有一定比例的高危型感染(16.51%)和含有高危型感染的混合感染(18.35%)；宫颈有CA的患者宫颈HPV DNA的检出结果均为阳性，都有HPV6和/或HPV11,说明CA皮损中HPV基因型仍以低危型为主，另外高危型和混合感染均高于单纯外阴CA患者。因此，对CA患者进行HPV分型检测非常必要。

2.35岁以后高危型HPV的持续感染是宫颈癌的直接原因，特别是同一型别高危型HPV的持续感染更易造成宫颈癌。本研究发现高危型检出率高的年龄为40岁以上(50%)，与我国宫颈癌高发年龄在45～60岁相符。因此，对年长的女性CA患者的宫颈进行HPV基因型检测尤为重要。

3.有学者认为HPV多重感染者易出现持续感染，而高危型HPV持续感染可以导致宫颈癌。HPV感染主要通过性生活传播，HPV多重感染可能与患者的性伴侣数或性伴侣的多性伴有关。本研究所选取的病例都是CA患者，所以多重感染率较高(37.68%)。

因此，在积极治疗CA原发病灶的同时，还应该检测宫颈HPV的感染状况及分型，以阻断HPV的持续感染，预防宫颈癌的发生。

[1] 陶萍萍,卞美璐.女性生殖道人乳头瘤病毒基因型研究进展[J].中国实用妇科与产科杂志,2005,21(8):507-508.

[2] 施铮铮,杨孝军,许张晔,等.外阴HPV感染患者中宫颈HPV分型检测[J].温州医学院学报,2008,38(5):471-472.

[3] Ho GY, Burk RD, Klein S, et al. Persistent genital human papillomavirus infection as a risk factor for persistent cervical dysplasia[J]. J Natl Cancer Inst,1995,87(18):1365-1371.

(收稿：2013-07-01修回：2013-07-30)

大连市皮肤病医院,116021

表1218例CA患者HPV基因型的分布情况

HPV基因型阳性例数检出率(%)HPV65223.85HPV115324.31HPV42/44/5120.92HPV81(CP8304)/45/6652.29HPV162210.09HPV1862.75HPV31/39/6873.21HPV3394.13HPV3531.38HPV52135.96HPV53/58125.50HPV56/5941.83

注：由于存在多重感染，1例患者可多次计数， 所有数据处理进行卡方检验，P<0.05

138例HPV DNA阳性样本中，HPV单一型别感染86例(62.32%)，其中低危型60例(43.48%)，高危型26例(18.84%)，混合感染52例(37.68%)，有2例为低危型HPV6和HPV11的二重感染，50例为含有高危型的混合感染，包括二重感染26例(18.84%)，三重感染13例(9.42%)，四重感染7例(5.07%)，五重感染2例(1.45%)，六重感染2例(1.45%)。

29例宫颈CA患者的HPV DNA检测结果均为阳性，其中低危型(HPV6或/和HPV11)为20例(68.97%)，混合感染(HPV6或/和HPV11合并高危型)为9例(31.03%)。

121例合并宫颈糜烂的患者中有74例宫颈HPV DNA检测为阳性，占61.16%，含有高危型混合感染的有20例，占16.53%。