陈蓉，周华友，闫清雅

（广州中医药大学第二附属医院，广东省中医院妇科，广东广州　510120）

益肾填精助孕方结合免疫治疗习惯性流产疗效观察

陈蓉，周华友，闫清雅

（广州中医药大学第二附属医院，广东省中医院妇科，广东广州510120）

【目的】探究益肾填精助孕方结合淋巴细胞主动免疫治疗习惯性流产（HA）封闭抗体（BA）阴性患者的临床疗效。【方法】将139例BA阴性的HA患者随机分为治疗组70例与对照组69例。对照组给予单纯淋巴细胞主动免疫治疗，治疗组给予淋巴细胞主动免疫结合益肾填精助孕方（仙芪益真胶囊和仙子益真胶囊）治疗。观察2组BA转阳率及安胎疗效。【结果】（1）BA转阳率比较：治疗后，治疗组的BA转阳率为82.86%，优于对照组的60.87%，差异有统计学意义（P＜0.05）。（2）安胎疗效比较：治疗后，治疗组的总有效率为87.14%，优于对照组的66.67%，差异有统计学意义（P＜0.05）。【结论】对BA阴性的HA患者用益肾填精助孕方结合淋巴细胞主动免疫治疗较单纯淋巴细胞免疫治疗更有效。

习惯性流产；封闭抗体；淋巴细胞主动免疫治疗；益肾填精助孕方；仙芪益真胶囊；仙子益真胶囊

习惯性流产（habitual abortion，HA）指连续自然流产3次及3次以上者。国内外报道原因不明习惯性流产约占流产患者的40%～70%［1］。此类患者往往经历多次妊娠和流产，给患者身心带来极大痛苦，而且由此可能导致家庭不和与婚姻破裂。HA病因除染色体异常、黄体功能不足、甲状腺功能减退、子宫发育不良等因素外，还有一部分患者流产原因不明。有研究表明原因不明习惯性流产的发生与免疫因素密切相关［2］。免疫因素确切的HA患者，其发病机理还未完全明了。本院前期临床研究表明益肾填精助孕方治疗HA疗效显著，但在免疫治疗疗效方面缺乏实验室依据。本研究采用益肾填精助孕方结合淋巴细胞主动免疫治疗HA，并与单纯使用淋巴细胞主动免疫治疗进行疗效比较，旨在对HA病因及中医药疗效做进一步深入研究。现将研究结果报道如下。

1　对象与方法

1.1研究对象本研究病例均为2014年9月～2016年1月在广东省中医院妇科门诊接受治疗的HA患者，共139例。采用随机数字表法将患者随机分为治疗组70例和对照组69例。

1.2诊断标准（1）西医诊断标准参照《妇产科学》［3］拟定：连续自然流产3次或3次以上者。（2）中医诊断标准参照《中医妇科学》［4］拟定：妊娠期出现阴道少量流血，时下时止，腰酸腹痛坠胀。

1.3纳入标准来本院就诊的139例患者，均经以下筛查：①血清中封闭抗体（blocking antibody，BA）阴性；②女方行B超及常规的妇科检查，排除生殖器解剖结构异常及生殖道感染；③内分泌检查（性激素）基本正常；④夫妻双方染色体核型筛查阴性；⑤女方抗精子抗体、抗内膜抗体、抗磷脂抗体等免疫性抗体检测为阴性；⑥男方精液检查基本正常，性生活正常；⑦夫妻双方除外肝炎、艾滋病、梅毒等传染病，肝肾功能和血常规正常；⑧所选患者确诊为习惯性流产，所有患者及家属均签署了知情同意书。

1.4治疗方法

1.4.1对照组单纯给予淋巴细胞主动免疫治疗。淋巴细胞主动免疫治疗：首选配偶血液，如配偶有传染性疾病，则选用无血缘关系第三方健康他人的血液。无菌条件下抽取供者静脉血8～10 mL，肝素抗凝，用10 mL生理盐水稀释；沿离心管壁缓慢加到等量淋巴细胞分离液上，旋紧管盖，2 000 r/min，离心30 min；吸取含有淋巴细胞的白膜层，加入适量无菌生理盐水重复洗涤3次；小心将白膜层重悬并调整外周血单个核细胞（PBMC）浓度为2×107～4×107个/mL，淋巴细胞比例占75%以上，悬液总量约1～2 mL，准备皮下注射。整个过程应严格无菌操作。用皮内注射的方法，注入女方前臂皮下6点，左右手臂交替进行。注射后24 ～28 h，局部可出现直径0.2～0.6 cm大小不等的红润硬结，以后逐渐消失。孕前4次为1个疗程，间隔3～4周治疗1次，1个疗程后复查BA，阴性者继续下一个疗程治疗，BA转阳者建议在6个月之内妊娠。确诊妊娠后，前3个月再加强行免疫治疗2次，间隔2～3周。如果半年内未孕，再适当延长免疫治疗时间。

1.4.2治疗组给予淋巴细胞主动免疫结合益肾填精助孕方治疗。（1）淋巴细胞主动免疫治疗同对照组。（2）益肾填精助孕方治疗：使用本院研制的仙芪益真胶囊（益真I号）［由巴戟天、淫羊藿、黄芪、当归、枸杞子、川续断等组成，经精制加工提取制成颗粒装胶囊，每粒含生药1.09 g，批准文号为（99）穗卫医制（省）字第B-032号］，每日3次，每次3粒。仙子益真胶囊（益真II号）［由熟地黄、女贞子、旱莲草、川续断、菟丝子、淫羊藿等组成，经精制加工提取制成颗粒装胶囊，每粒含生药1.65 g，批准文号为（99）穗卫医制（省）字第B-033号］，每日3次，每次3粒。2种胶囊交替口服，非经期使用，经期停服。疗程同对照组。

1.5疗效标准根据《中药新药临床研究指导原则》［5］及《中医病证诊断和疗效标准》［6］拟定。治愈：阴道流血停止，腰腹疼痛消失，子宫大小与孕周相符，B超检查胚胎发育正常。显效：阴道流血停止，腰酸腹痛明显改善，子宫大小与孕周相符，B超检查胚胎发育正常。有效：阴道流血停止，腹胀痛、腰酸坠胀症状有所改善，子宫大小与孕周相符，B超检查胚胎发育正常。无效：经治疗，出血、腹痛、腰酸痛同前或加重，胚胎停止发育。

1.6统计方法采用SPSS 17.0统计软件进行统计分析。计数资料用率或构成比表示，组间比较用 χ2检验；计量资料用均数 ±标准差（±s）表示，若方差齐性及服从正态分布，组间比较采用t检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.12组患者基线资料比较表1结果显示：2组HA患者的年龄及流产次数比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），表明2组的基线特征基本一致，具有可比性。

表1　2组患者年龄及流产次数比较Table 1　Comparison of age and abortion frequency of both groups　（±s）

表1　2组患者年龄及流产次数比较Table 1　Comparison of age and abortion frequency of both groups　（±s）

组别对照组治疗组N 69 70 N年龄/岁30.3±3.1 31.0±3.3 N流产/次3.0±1.1 3.1±1.3

2.22组患者治疗后BA转阳率比较表2结果显示：治疗组的BA转阳率为82.86%，优于对照组的60.87%，2组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.32组患者安胎疗效比较表3结果显示：治疗组的总有效率为87.14%，优于对照组的66.67%，2组安胎疗效比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。

表2　2组患者治疗后BA转阳率比较Table 2　Comparison of rate for BA turning positive in both groups after treatment

表3　2组患者安胎疗效比较Table 3　Comparison of anti-abortion effect of both groups　n（p/%）

3　讨论

从现代生殖免疫的观点来看，HA的发生是母胎之间免疫状态失衡导致免疫排斥的结果［7］，是由于患者对胚胎抗原免疫反应不足，即患者由于对胚胎同种异体抗原无法产生足够的BA而使胚胎得不到免疫防护而流产。正常妊娠时，夫妇人类白细胞抗原（HLA）不相容，胚胎所带的父系HLA能刺激母体免疫系统并产生抗配偶淋巴细胞的特异性IgG 抗HLA，从而封闭母体淋巴细胞对滋养层细胞的细胞毒作用，保护胚胎或胎儿免受排斥，被认为是维持妊娠所必需的BA。体外研究显示，妊娠时母体可产生致敏T细胞，它能破坏胚胎细胞，但致敏T细胞的杀伤功能可被移植，然而习惯性流产的妇女80%～90%测不到这种特异性的BA，体内存在未被抑制的细胞。这些细胞可直接作用于胚胎，或通过释放炎性介质间接损害胎儿或胎盘，从而导致流产发生。本课题组经过多年的临床试验和研究发现，淋巴细胞主动免疫疗法能有效地阻止BA缺乏，且未发现其对母儿有明显副反应。

本院院内制剂益肾填精助孕方经过多年的临床经验总结，为妇科调经助孕效果显著的经验方，其方包括仙芪益真胶囊（益真I号）和仙子益真胶囊（益真Ⅱ号）。仙芪益真胶囊以巴戟天、淫羊藿温补肾阳，暖煦胞宫；黄芪补气生血，当归养血活血，二者相配为补气生血配伍药对；枸杞子为植物种仁，味厚质润，以补髓填精见长；川续断益气养血，补阴摄阳，使其“阳得阴助而生化无穷”。仙子益真胶囊以熟地黄合二至丸养血滋阴，填精益髓；其中川续断归肝肾经，补肾强膝；菟丝子补益肝肾；淫羊藿温肾壮阳，补阳益阴，使其“阴得阳升而泉源不竭”。全方共奏阴阳平补，益肾填精助孕之功效。

益肾填精助孕方，临床上仙子益真胶囊和仙芪益真胶囊序贯应用，共奏温肾助阳、益精养血种子之功效。该法顺应肾中阴阳消长变化和卵巢间周期性变化规律，根据月经周期不同阶段针对性用药，促进肾中阴阳平衡及其协调转化，促进肾—天癸—冲任—胞宫轴的功能趋向正常，全面改善下丘脑—垂体—卵巢轴的内分泌功能，促进卵泡发育，从而健全黄体功能以助孕。肾气充盛，肾精充足，胎元自安。

益真Ⅰ号补元阳、Ⅱ号益真阴，既助肾阳又助肾阴，达到阴阳互补，互相平衡。补肾是调经种子的大法。徐珉等［8］观察了补肾中药益真Ⅰ、Ⅱ号胶囊对高龄不孕妇女围排卵期卵巢间质血流的影响，围排卵期卵巢间质血流的改变可间接反映卵子质量、卵巢储备的提高。因而认为补肾中药具有改善卵子质量，提高卵巢储备的作用。顾春晓等［9］在补肾法治疗黄体不健性不孕症的临床研究中得出结论：补肾中药周期疗法是治疗黄体不健性不孕症的有效疗法，可促进肾中阴阳平衡及其协调转化，达到健全黄体功能以助孕的目的。

本研究通过观察益肾填精助孕方结合淋巴细胞主动免疫治疗习惯性流产封闭抗体阴性患者的临床疗效，发现在中医补肾及免疫疗法共同调节下，其可以提高不明原因的习惯性流产患者的再次妊娠成功率，是一种高效可行的方法，易于临床操作，且未发现明显的副作用，具有重要的临床应用价值。同时我们还需扩大样本量，以进一步深入了解其具体的效应机制。

［1］林其德.原因不明复发性流产的基础与临床研究进展［J］.中华妇产科杂志，2003，38（8）：48l.

［2］杨素娟，江静，郝桂敏，等.主动免疫治疗原因不明习惯性流产的临床研究［J］.实用妇产科杂志，2007，23（5）：300.

［3］乐杰.妇产科学［M］.7版.北京：人民卫生出版社，2008：85.

［4］马宝璋.中医妇科学［M］.6版.上海：上海科学技术出版社，2001：127.

［5］郑筱萸.中药新药临床研究指导原则（试行）［M］.北京：中国医药科技出版社，2002：230-231.

［6］国家中医药管理局.中医病证诊断和疗效标准［M］.南京：南京大学出版社，1994：72.

［7］颜卫华，范丽安，杨钰琴，等.HLA-G多态性与原因不明习惯性流产相关性研究［J］.中国免疫学杂志，2002，18（2）：120.

［8］徐珉，黄健玲，司徒仪，等.补肾中药益真Ⅰ、Ⅱ号胶囊对高龄不孕妇女围排卵期卵巢间质血流的影响［J］.中国现代医学杂志，2008，18（7）：833.

［9］顾春晓，徐珉，李丽芸.补肾法治疗黄体不健性不孕症30例临床研究［J］.国医论坛，2008，23（4）：18.

【责任编辑：陈建宏】

Clinical Observation of Habitual Abortion Patients Treated by Yishen Tianjing Zhuyun Prescription Together with Active Lymphocyte Immunotherapy

CHEN Rong，ZHOU Huayou，YAN Qingya
（Dept.of Gynecology of Guangdong Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine，the Second Affiliated Hospital of Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510120 Guangdong，China）

ObjectiveTo investigate the therapeutic effect of Yishen Tianjing Zhuyun Prescription（a Chinese herbal recipe consisting of Xianqi Yizhen Capsules and Xianzi Yizhen Capsules，having the actions of strengthening kidney-essence and promoting gestation）together with active lymphocyte immunotherapy for habitual abortion （HA）patients.Methods A total of 139 HA outpatients with negative blocking antibodies（BA）were randomly divided into treatment group（70 cases）and control group（69 cases）.The control group was treated only with active lymphocyte immunotherapy，while the treatment group was treated with Yishen Tianjing Zhuyun Prescription and active lymphocyte immunotherapy.Results（1）After treatment，the BA-positive rate was 82.86%in the treatment group and was 60.87%in control group，and there existed significant difference between the two groups（P＜0.05）.（2）The total anti-abortion effective rate was 87.14%in the treatment group and was 66.67%in control group，the difference being significant between the two groups（P＜0.05）. Conclusion Yishen Tianjing Zhuyun Prescription combined with active lymphocyte immunotherapy is more effective than active lymphocyte immunotherapy alone for the treatment of HA patients with negative BA.

habitual abortion；blocking antibody；active lymphocyte immunotherapy；Yishen Tianjing Zhuyun Prescription；Xianqi Yizhen Capsules；Xianzi Yizhen Capsules

R714.21；R271.9

A

1007-3213（2016）05-0642-03

10.13359/j.cnki.gzxbtcm.2016.05.006

2016-04-06

陈蓉（1970-），女，副主任医师，医学硕士；E-mail:13725499613@163.com

广东省科技计划项目（编号:2014807）