许会卿，张新钢，朱利华

急性喘息儿童感染HBoV的临床分析

许会卿，张新钢，朱利华

目的分析研究急性喘息儿童人博卡病毒（HBoV）感染的临床特征。方法对219例因急性喘息就诊的患儿采用实时荧光定量PCR法对鼻咽部抽吸物（NPA）进行博卡病毒（HBoV）检测，阳性病例采用实时荧光定量PCR对其DNA载量进行测定，并结合其临床特征进行综合分析。结果HboV感染患儿22例，总阳性率为10.05%，平均检出年龄为1岁7月，未见明显季节性及性别差异。HBoV感染重症喘息患儿（7.9×108拷贝/ml）与非重症喘息患儿（3.4×108拷贝/ml）HBoV的病毒载量差异无统计学意义（＞0.05），HBoV协同感染（4.5×108拷贝/ml）与独立感染（2.7×108拷贝/ml）患儿病毒载量差异无统计学意义（＞0.05）。结论博卡病毒是小儿急性喘息性疾患的重要病原体，常年均可检出，HBoV可能不是小儿急性喘息的唯一致病因素。

喘息，急性；博卡病毒；病毒载量；病原学

呼吸道病毒感染始终是国内外医院病原学控制的难题，并且越来越被重视［1］，自瑞典学者Allander从儿童呼吸道感染样本中分离出人博卡病毒（HBoV）以来，由于病例纳入标准的不统一，其致病机制、生物学特征至今仍然不是十分明确，临床表现复杂多样。尽管有文献表明HBoV与儿童喘息性疾病有关，但鉴于纳入病例标准的差异，研究结论并不统一，甚至有文献提出与儿童喘息相关性并不明显［2］，所以对儿童喘息与HBoV感染的关系有必要展开进一步研究。笔者回顾性分析219例因急性喘息就诊儿童的临床资料，检测其HBoV感染情况并对其临床特征进行分析，现将结果报道如下。

1　资料与方法

1.1一般资料选取2009年11月至2010年12月宁波市妇女儿童医院临床症状表现为喘息的患儿219例，所纳入病例均为第一次喘息发作，既往无反复鼻塞、咳嗽及喘息等呼吸道症状，同时除外先天性心脏病、先天性喉喘鸣及先天性支气管肺发育不良等基础疾患，其诊断标准参照《实用儿科学》［3］。

1.2研究方法

1.2.1标本的采集在入院当天收集患儿鼻咽部抽吸物（NPA），吸出至一含有约3ml病毒保存液的无菌离心管中；迅速转运至实验室，振荡混匀后10 000 r/min，离心5 min，离心半径9.5 cm。取上清－80℃冰箱保存待测。

1.2.2标本DNA的提取所有样本室温解冻后，分别取200l利用QIAmp DNA Mini Kit（Qiagen）提取样本中的总DNA，操作严格按照试剂说明书进行。

1.2.3HBoV目的基因的扩增采用同时检测HBoVNP-1、NS1目标基因以杜绝假阴性［4］。根据HBoV ST1（DQ000495）设计引物，分别扩增NP-1基因片断（354bp）和NS1基因片段（291 bp）。引物由上海生工生物公司合成。扩增条件皆为：94℃预变性4 min；94℃变性1 min，55℃退火1min，72℃延伸1min，35个循环；72℃延伸10 min。扩增产物的鉴定：5 lPCR产物加样，凝胶成像系统观看目的条带，保存分析图像。引物序列具体见表1。

表1　HBoV目的基因引物序列

1.2.4HBoV-DNA病毒载量测定由本院中心实验室采用实时荧光定量PCR （RT-PCR）方法完成。

1.3统计方法采用SPSS 16.0统计软件进行统计学处理，计数资料采用2检验或Fisher确切概率法，组间HBoV病毒载量计量资料采用Mann-Whitney秩和检验。＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1HBoV检出情况所有219份样本中，HBoV检出22份，阳性检出率为10.05%。其中男性14例（63.6%），女性8例（36.4%）；最小年龄为4个月，最大4岁8个月，平均年龄为1岁7个月；春季5例，夏季4例，秋季6例，冬季7例，一年四季均可见阳性检测患儿，检出率季节差异无统计学意义（2=0.17，=0.68）。

2.2HBoV病毒载量与临床分析

2.2.1HBoV检出患儿病毒载量与临床感染情况分析所有 HBoV检出病例中，普通喘息患儿13例（59.1%），重症患儿 9例（40.9%）。协同感染 15例（68.2%），独立感染7例（31.8%）。普通感染与重症感染患儿HBoV病毒载量差异无统计学意义（=2.14，＞0.05）。协同感染与独立感染患儿HBoV病毒载量差异无统计学意义（=3.95，＞0.05）。见表2。

表2　HBoV病毒载量在不同临床感染情况中的分析

2.2.2HBoV协同感染情况与临床情况分析HBoV阳性检测的儿童中，协同感染组患儿中12例为双重感染，3例为三重感染，协同感染病原学检查主要为呼吸道合胞病毒和支原体，具体检出情况见表3。

表3　HBoV阳性儿童病原学检出率

3　讨论

近年来研究发现，HBoV是与儿童呼吸道疾病密切相关的一种新型细小病毒，但其发病规律及致病机制至今仍不十分清楚［2］。目前国内外有关儿童喘息与HBoV感染的相关性报道较少，笔者通过对2009年11月至2010年12月间收集的急性下喘息儿童的鼻咽部抽吸物（NPA）样本进行病原学分析，检测到22例博卡病毒感染阳性样本，阳性检测率为10.05%；符合目前报道的1.8%～19%的波动范围［5］，而本文的检测结果缺乏明显的季节性流行趋势，这可能与样本纳入标准、地域差异及实验设计的不统一有关。

目前国内外缺乏有关儿童HBoV感染与喘息的相关性报道，有限的报道对这方面描述充满争议。Deerojanawong等［6］学者发现HBoV的病毒载量在5岁以下喘息患儿中明显增高，但病毒载量与患儿喘息发作程度并不一致，亦有学者认为高的HBoV病毒载量提示可能加重患儿喘息程度并延长住院时间［7］。而新近有报道采取不同的队列，对有早产史及足月的下呼吸道感染儿童分别进行NPA采样后进行病原学检查，发现HBoV无论单独感染还是合并感染均可在两组喘息患儿NPA样本中检出，并且与两组患儿喘息发病严重程度相关性并不明显，提示尽管HBoV与儿童喘息性疾病密切相关，但并不是唯一因素［8］，新近Ting等［9］通过Meta分析进一步肯定了这种推论。本文结果显示，HBoV与儿童喘息性疾病密切相关，病毒载量与疾病的严重程度相关性并不明显。本实验结果与Ting等［9］的结论有部分相似之处，但本文结果提示普通喘息患儿与重症患儿HBoV病毒载量差异无统计学意义，而在HBoV感染阳性的重症患儿病例中，均为混合感染，这说明在婴幼儿急性感染情况下，病毒复制的数量与疾病的进展及严重程度不一定有关；而要综合分析患儿的临床情况或者综合分析各类型病原体的感染情况，HBoV感染不一定是重症病例的主要病原体，但在多重感染的情况下可能会加重疾病的严重程度。

研究显示，喘息是小儿呼吸道HBoV感染的重要临床症状表现的主要形式［9］，与笔者所纳入的病例临床特征相似，而且在本样本中，有大量危重症的喘息病例，提示该年龄阶段可能是HBoV重症感染的危险人群，有推测母传抗体保护作用的减退可能是其重要原因之一［10］。在笔者纳入的病例中，单独感染患儿较混合感染患儿病毒载量无明显差异，类似结论在国内外少有报道。推测HBoV虽然可以独立诱发儿童呼吸道喘息性疾病，但在混合感染情况下并不一定起主导致病作用。总的来看，由于多数患儿为混合感染，且感染病原体的情况多样，所以很难完全独立地评价HBoV的致病机制，这也加大了独立分析其临床表现的困难性。

综上所述，HBoV在伴喘息发作患儿中存在着较高的检出率，是引发儿童喘息的另一重要病原。目前尚缺乏有关HBoV感染后有关呼吸道病理生理学改变的报道，有限的分子生物学研究提示炎症介质的变化与HBoV病毒载量相关性并不明显［7］，且缺乏长期随访性研究，所以对于HBoV引起婴幼儿喘息性疾病的主要机制以及更大范围的流行病学资料等还需进一步研究，以促进儿童喘息性疾病的治疗和预防。

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10.3969/j.issn.1671-0800.2016.04.044

R725.6

A

1671-0800（2016）04-0500-03

2015-11-10

（本文编辑：姜晓庆）

宁波市社会发展科研项目（2009C50023）

315012宁波，宁波市妇女儿童医院

朱利华，Email:xuhuiqing 413@sina.com