李　楠,逄春华,曲志娜,赵思俊,王　娟,赵建梅,李玉清,黄秀梅,王君玮,刘焕奇

(1.青岛农业大学动物科技学院,山东青岛266109;2.中国动物卫生与流行病学中心,山东青岛266032;3.青岛机场出入境检验检疫局,山东青岛266108)

青岛地区肉鸡生产链中沙门菌的分离及血清学鉴定

李楠1,2,逄春华3,曲志娜2,赵思俊2,王娟2,赵建梅2,李玉清2,黄秀梅2,王君玮2,刘焕奇1

(1.青岛农业大学动物科技学院,山东青岛266109;2.中国动物卫生与流行病学中心,山东青岛266032;3.青岛机场出入境检验检疫局,山东青岛266108)

为了解青岛地区肉鸡生产链中各环节沙门菌的分布及其血清型状况,采用常规培养与PCR鉴定对不同环节沙门菌进行分离.采用玻片凝集试验与xMAP®液相芯片分型法进行血清型鉴定.结果青岛地区肉鸡生产链沙门菌总阳性率为10.10%.养殖环节中种鸡场、孵化场、商品鸡场的分离率分别为0.67%、37.76%、9.20%;屠宰加工过程中淋洗前、淋洗后、预冷液、预冷后、分割环节分离率分别为3.69%、3.86%、5.7%、16.16%、31.43%;市售成品为17.15%.78.65%菌株为肠炎沙门菌.结论种鸡场沙门菌净化与孵化场种蛋消毒及淘汰弱雏是青岛地区肉鸡养殖环节沙门菌的关键控制措施;预冷液与分割车间的环境卫生是其屠宰加工环节的关键控制点.青岛地区肉鸡生产链中流行血清型为肠炎沙门菌.

沙门菌;肉鸡;分离鉴定;血清型

沙门菌是常见食源性病原菌,对人和动物危害极大.据美国疾病控制与预防中心统计,每年有1/6人口因食用受污染食品而发生中毒,疫情报告显示,沙门菌是引起疾病暴发的主要病原菌[1],其中以肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌尤为突出.已有报道人类沙门菌感染和食物中毒常来源于感染沙门菌的禽类、蛋类或其他畜产品[2],鉴于青岛地区是肉鸡养殖重点区域,因此本文针对肉鸡生产链中沙门菌污染状况进行了调查,分析不同环节沙门菌污染差异以及优势血清型,了解各环节关键控制点,为沙门菌的防控提供参考.

1　材料

1.1标准菌株肠炎沙门菌(ATCC13076)、大肠杆菌(ATCC25922),由中国动物卫生与流行病学中心提供.

1.2试剂沙门菌显色培养基、抗血清(泰国S&A),购自北京陆桥生物技术有限责任公司; PCR试剂,购自TaKaRa公司;沙门菌血清型快速分型试剂盒,购自Luminex公司.

1.3仪器恒温培养箱(上海爱朗公司);PCR仪(美国BIO-RAD公司);电泳仪(北京六一仪器厂);凝胶成像分析仪(美国BIO-RAD公司);Luminex 200液相芯片分析仪(美国Luminex公司).

1.4引物根据沙门菌inv A基因设计引物F: 5′-GTGAAATTATCGCCACGTTCGGGCAA-3′;R: 5′-TCATCGCACCGTCAAAGGAACC-3′.

2　方法

2.1样品采集于青岛地区肉鸡生产加工企业的种鸡场、孵化场、肉鸡场、屠宰场以及市售成品等环节采集样品,具体数量与分布见表1.

表1　采样环节、数量、分离率及血清型

2.2分离鉴定按照GB 4789.4[3],显色培养后挑取可疑单个菌落纯化备用.采用革兰染色镜检、生化鉴定试剂盒与PCR方法对疑似菌株进行鉴定.

2.3血清型鉴定玻片凝集试验:采用GB 4789.4[3]玻片凝集法鉴定O抗原和H抗原;xMAP®液相芯片分型法:经PCR扩增后用Luminex 200液相芯片仪进行数据读取、分析.

3　结果

3.1不同生产环节分离鉴定结果疑似菌株经革兰染色镜检、生化鉴定与PCR鉴定后,获得267株沙门菌,总检出率为10.10%.肉鸡生产链各环节存在不同程度污染.养殖环节以种鸡场分离率最低(0.67%),孵化场弱雏分离率最高(37.76%).屠宰加工环节以分割鸡肉分离率最高(31.43%),屠宰胴体在淋洗前后分离率差异不大,但经预冷液处理后分离率明显提高,尤其分割处理后高达31.43%.市售环节分离率有所下降(17.15%),但仍高于养殖环节成年肉鸡沙门菌检出率.具体结果详见表1、图1,部分沙门菌PCR扩增结果见图2.

图1　各环节分离率统计

图2　部分沙门菌电泳

3.2血清型鉴定结果结合两种血清型鉴定方法得到各环节血清型分布如表1所示.主要血清型为肠炎沙门菌,为78.65%,除种鸡场未检测到该血清型外,其余各生产环节均有且均为优势血清型.其次为婴儿沙门菌,为16.48%,在种鸡、成年肉鸡以及屠宰场的预冷液和分割鸡肉中均检测到该血清型,此外还有少数伦敦沙门菌.

4　讨论

本试验中种鸡阳性率最低,仅为0.67%,张秀丽等[4]报道的种鸡沙门菌检出率18.40%,与本试验结果差异极显著(P<0.01),这可能与养殖区域、饲养管理以及长期净化等因素有关.孵化场弱雏阳性率最高,为37.76%,赵玉梅等[5]对肉鸡死胚进行细菌分离,结果显示死胚中沙门菌的带菌率较高,为21.43%,而鸡胚均来自种鸡场,说明沙门菌通过种蛋进行传播是其重要的传播方式,严重影响孵化率、雏鸡存活率等.因此,种鸡场沙门菌净化与孵化场种蛋消毒及淘汰弱雏是青岛地区肉鸡养殖环节沙门菌的关键控制措施,有利于提高孵化率及降低养殖环节延伸过程中沙门菌的污染.

屠宰加工是整个生产过程中另一个沙门菌污染的重要环节.朱恒文等[6]针对肉鸡屠宰加工过程中沙门菌污染状况进行了调查,结果显示,宰前及煺毛、净膛过程为引发生产链沙门菌污染的风险点.这与本试验结果有所不同,本试验发现经预冷液处理后沙门菌检出率明显上升,尤其是分割样品污染情况最为严重,说明青岛地区肉鸡屠宰加工过程预冷环节控制不当、分割器具及环境卫生条件相对较差.因此,严控预冷过程、加强分割车间卫生条件是屠宰加工环节的关键控制措施,有利于降低加工过程中沙门菌外来污染.

本试验还发现,青岛地区肉鸡生产链中所分离菌株主要为肠炎沙门菌,其次为婴儿沙门菌,而侯小刚等[7]研究发现,德尔卑沙门菌是四川肉品生产链中优势菌株,其次为科特布斯沙门菌. Diarra M S等[8]对来自加拿大卑诗省肉鸡样品进行调查,主要是肯塔基沙门菌和鼠伤寒沙门菌.由此可见,不同国家、不同地区沙门菌流行血清型不同,其分布存在一定地域性,因此,应加强沙门菌分布的动态监测,有针对性地做好防控工作.

[1]Gomez T M,Motarjemi Y,Miyagawa S,et al.Foodborne salmonel⁃losis[J].World Health STAT Q,1997,50(1/2):81-89.

[2]甘学雄.关注沙门菌确保禽蛋食品安全[J].养禽与禽病防治,2008(10):20-21.

[3]GB 47894-2010.食品安全国家标准食品微生物学检验沙门菌检验[S],2010.

[4]张秀丽,杨保伟,廖兴广,等.河南省鹤壁市食源性和禽源性沙门菌耐药性研究[J].中国人兽共患病学报,2010,26(12): 1134-1136.

[5]赵玉梅,范玉霞.肉鸡死胚中沙门菌的分离及血清学鉴定[J].山东畜牧兽医,2013(5):1-3.

[6]朱恒文,方艳红,王元兰,等.肉鸡屠宰加工生产链中沙门菌的污染调查及ERIC-PCR溯源[J].食品科学,2012,33(17): 48-53.

[7]侯小刚.四川主要肉品生产链中沙门菌的分离鉴定、耐药性分析及PFGE分型[D].雅安:四川农业大学,2012.

[8]Diarra M S,Delaquis P,Rempel H,et al.Antibiotic Resistance and Diversity of Salmonella enterica Serovars Associated with Broiler Chickens[J].Journal of food protection,2014,77(1):40-49.

Isolation and Identification Serotyping ofSalmonella in Broiler Production Chain in Qingdao

LI Nan1,2,PANG Chun-hua3,QU Zhi-na2,ZHAO Si-jun2,WANG Juan2,ZHAO Jian-mei2,LI Yu-qing2,HUANG Xiu-mei2,WANG Jun-wei2,LIU Huan-qi1
(1.Department of Animal Science,Qingdao Agricultural University,Qingdao 266109,China; 2.China Animal Health and Epidemiology Center,Qingdao 266032,China; 3.Qingdao Airport Entry-Exit Inspection And Quarantine Bureau,Qingdao 266108,China)

To investigate the distribution and serotypes of Salmonella in various links in broiler production chain and provide reference for the prevention and control of Salmonella in Qingdao.Using the conventional methods and PCR to isolate and identify the strains.Serotypes were identified by slide agglutination test and xMAP®SSA.The total positive rate of Salmonella was 10.10%. The positive rates in breeding farm,hatchery,commodity farms were 0.67%,37.76%,and 9.20%in farming link,respectively The positive rates in broiler carcasses,broiler carcasses,after drip washing,pre-cool liquid,cool broiler carcasses,broiler meat were 3.69%,3.86%,5.7%,16.16%and 31.43%in slaughter process,respectively.The positive rate in retail broiler meat was 17.15%. There were 78.65%strains were.The purification of Salmonella in breeder farm and disinfection of eggs and eliminating weak young in hatchery are the critical control measures in broiler farming link in Qingdao.The sanitation of pre-cooling solution and cutting rooms are critical control points in slaughter process.The prevalent serotype is S.enteritidis in the broiler production chain in Qingdao.

Salmonella;broiler;isolation and identification;serotype

LIU Huan-qi

S858.31

A

0529-6005(2016)06-0036-03

2015-01-16

"十二五"科技基础性工作专项(2012FY111000); 948项目"兽药监管技术引进"(2011-G14)

李楠(1988-),女,硕士生,研究方向为兽医临床,E-mail:linan5m@126.com

刘焕奇,E-mail:huanqiliu@126.com