俞柳敏，林　华，张秋燕，张艳艳，陈元星

(1.莆田学院附属医院，福建莆田 351100；2.福建省莆田市城厢区医院　351100)



·临床研究·

莆田市191例珠蛋白生成障碍性贫血基因型研究

俞柳敏1，林华1，张秋燕1，张艳艳1，陈元星2

(1.莆田学院附属医院，福建莆田 351100；2.福建省莆田市城厢区医院351100)

目的了解莆田市珠蛋白生成障碍性贫血基因分布情况。方法采用PCR结合基因芯片技术检测405例珠蛋白生成障碍性贫血疑似携带者。结果在405例疑似珠蛋白生成障碍性贫血携带者中确诊191例，其中α珠蛋白生成障碍性贫血114例，β珠蛋白生成障碍性贫血74例，αβ复合珠蛋白生成障碍性贫血3例。3种常见的α珠蛋白生成障碍性贫血基因型是--SEA、-α3.7、-α4.2，突变频率分别是72.8%、15.8%、2.6%。最常见的β珠蛋白生成障碍性贫血基因型是IVS-Ⅱ-654/N、CD41-42/N和CD17/N，突变频率分别是54%、21.6%和13.5%。检测还发现了5种复合型珠蛋白生成障碍性贫血基因。结论该次研究阐明莆田市珠蛋白生成障碍性贫血基因型和分布情况，为莆田市开展珠蛋白生成障碍性贫血遗传咨询和产前诊断提供依据。

珠蛋白生成障碍性贫血；基因分型；基因诊断

珠蛋白生成障碍性贫血是一组单基因遗传性慢性溶血性疾病。珠蛋白生成障碍性贫血是由红细胞血红蛋白的珠蛋白肽链基因缺失或突变，导致珠蛋白肽链的合成抑制、失衡，引起无效造血和溶血。珠蛋白生成障碍性贫血分为α珠蛋白生成障碍性贫血和β珠蛋白生成障碍性贫血两类。α珠蛋白生成障碍性贫血主要分布于东南亚、中国南方和少数非洲地区，β珠蛋白生成障碍性贫血主要分布于地中海地区、中东、印巴地区和中国南方地区。珠蛋白生成障碍性贫血具有严重的致死和致残性，需要长期、昂贵的治疗，给家庭带来沉重的精神负担和经济负担。为了解莆田市珠蛋白生成障碍性贫血基因分布情况，本院对405例疑似珠蛋白生成障碍性贫血基因携带者进行基因诊断。

1　资料与方法

1.1研究对象选择2014年1月至2015年12月在本院进行珠蛋白生成障碍性贫血基因检测的405例疑似携带者，其中男63例、女342例，年龄1个月至83岁。

1.2方法

1.2.1基因提取抽取乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝外周血2 mL，采用潮州凯普公司提供的基因提取试剂盒提取DNA。

1.2.2珠蛋白生成障碍性贫血基因诊断采用潮州凯普公司提供检测试剂盒对标本进行基因诊断。扩增仪采用ABI 7500。α珠蛋白生成障碍性贫血采用Gap-PCR技术扩增，β珠蛋白生成障碍性贫血采用一般PCR技术扩增。扩增产物经反向点杂交法(RDB)杂交，通过酶促反应判读结果。同步检测3种缺失型α珠蛋白生成障碍性贫血(--SEA、-α3.7、-α4.2)、3种突变型α珠蛋白生成障碍性贫血(CS、QS、WS)、15种基因型β珠蛋白生成障碍性贫血(IVS-Ⅱ-654、-28、-29、CD14-15、CD17、CD27-28、βE、CD41-42、CD43、CD71-72、IVS-Ⅰ-1、IVS-Ⅰ-5、Cap、Int、CD31)。

2　结　果

2.1检测结果405例疑似携带者经过基因诊断，确诊191例，检出率为47.2%。其中α珠蛋白生成障碍性贫血114例(59.7%)，β珠蛋白生成障碍性贫血74例(38.7%)，αβ复合珠蛋白生成障碍性贫血3例(1.6%)。首次在莆田市发现1例三重杂合子珠蛋白生成障碍性贫血基因携带者。

2.2α珠蛋白生成障碍性贫血基因型检测结果114例α珠蛋白生成障碍性贫血患者中最常见的基因型是--SEA，其次是-α3.7。各种基因突变型及突变频率见表1。双重α杂合子检出4例，基因型分别为-α3.7/--SEA和-α4.2/--SEA。检出α珠蛋白生成障碍性贫血纯合子1例。

2.3β珠蛋白生成障碍性贫血基因型检测结果74例β基因携带者中基因突变频率为38.7%。具体各基因型及突变频率见表2。未检出β珠蛋白生成障碍性贫血纯合子和双重β杂合子。

2.4αβ复合珠蛋白生成障碍性贫血基因型检测结果检出3例(1.6%)αβ复合珠蛋白生成障碍性贫血患者。-α3.7/ααβ-28、和--SEA/ααβ-28各检出1例。检出莆田市首例三重杂合子，基因型为-α4.2/ααβE/CD41-42，为国内罕见基因型。

表1　α珠蛋白生成障碍性贫血基因型及突变频率

表2　β珠蛋白生成障碍性贫血基因型及突变频率

3　讨　论

珠蛋白生成障碍性贫血是中国南方危害最大的遗传病之一，发病率全球第3。α珠蛋白生成障碍性贫血是由于位于16号染色体上的α珠蛋白基因缺失或突变使α珠蛋白合成受抑制，造成α链减少，过剩的β链在红细胞内沉积，使红细胞变形性降低，红细胞破坏增多。β珠蛋白生成障碍性贫血是由于位于11号染色体上的β珠蛋白基因突变导致β珠蛋白合成受抑制，过剩的α链在红细胞内沉积导致红细胞过度被破坏。

本研究显示莆田市α珠蛋白生成障碍性贫血基因构成前3位是--SEA、-α3.7、-α4.2，这与我国广东、广西、四川、重庆等地报道一致[1-4]。莆田市β珠蛋白生成障碍性贫血基因构成前3位分别是IVS-Ⅱ-654/N、CD41-42/N和CD17/N。国内其他地区β珠蛋白生成障碍性贫血的主要3种基因型也相同，但是在排序上有不同，体现出β珠蛋白生成障碍性贫血较α珠蛋白生成障碍性贫血有更明显的地区差异性和遗传异质性。同时发现在福建省内，IVS-Ⅱ-654/N是最主要的β珠蛋白生成障碍性贫血基因型[5-7]。

本次研究发现在疑似携带者中珠蛋白生成障碍性贫血的检出率为47.2%，很大比例的疑似携带者珠蛋白生成障碍性贫血基因检测为阴性。原因有：(1)是本次珠蛋白生成障碍性贫血筛查主要手段为血常规检测，判断筛查阳性的标准为血红蛋白(Hb)<110 g/L，红细胞平均血红蛋白量(MCH)<27 pg，红细胞平均体积(MCV)<80 fL。符合这种血常规结果的疾病不只有珠蛋白生成障碍性贫血，还有缺铁性贫血、铁粒幼细胞贫血、慢性病贫血等。(2)是检测范围有限，只能检测已知基因型，少见或未知基因型不能检出。Galehdari等[8]用基因测序技术在伊朗发现42种β珠蛋白生成障碍性贫血基因型，远高于本研究采用方法所能检测的15种基因型。基因测序技术能检测更多的珠蛋白生成障碍性贫血基因型，但是实验要求条件高，检测费用高，目前还难以在临床广泛使用。

本次研究病例中，进行珠蛋白生成障碍性贫血基因检测的人群主要是育龄妇女和儿童，成年男性和老年男女性较少。由此可见，经过多年在妇幼保健系统中的推广及经验交流，妇产科医生和儿科医生对血常规存在异常的病例警惕性较高。由于没有莆田市珠蛋白生成障碍性贫血方面的流行病学调查数据支持，其他普通专科医生的珠蛋白生成障碍性贫血防治观念淡漠。珠蛋白生成障碍性贫血预防相关知识急需进一步普及和推广，以减少珠蛋白生成障碍性贫血的漏诊。

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2016-01-28修回日期：2016-05-26)

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.15.040

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1673-4130(2016)15-2154-02