付晓艳，李　莉 综述，朱槿宏,何津春△ 审校

( 1.兰州大学第一临床医学院，兰州 730000；2.兰州大学第一医院医学检验中心，兰州 730000)



·综述·

脂蛋白(a)-P研究进展*

付晓艳1，李莉2综述，朱槿宏2,何津春2△审校

( 1.兰州大学第一临床医学院，兰州 730000；2.兰州大学第一医院医学检验中心，兰州 730000)

关键词:脂蛋白(a)；脂蛋白(a)颗粒；免疫固定电泳；核磁共振光谱法

脂蛋白(a)[Lp(a)]是人体内一种特殊的大分子脂蛋白，血浆中Lp(a)水平升高可增加患动脉粥样硬化(AS)的风险。长期以来，临床已经习惯使用Lp(a)-C或Lp(a)-M预测Lp(a)相关AS风险的高低[1-5]。但值得注意的是，致AS因子是Lp(a)-P而不是Lp(a)-C或Lp(a)-M。最新研究表明，Lp(a)-P最能代表Lp(a)的真实水平，对AS的预测价值较Lp(a)-C或Lp(a)-M高。下面本文就Lp(a)-P的研究进展做一综述。

1Lp(a)的结构

Lp(a)主要由低密度脂蛋白颗粒(由载脂蛋白B100和脂质组成)与载脂蛋白(a) [Apo(a)]通过二硫键连接组成[4]。Apo(a)是高度糖基化的蛋白质，含有1个蛋白酶样结构域和1个kringle结构域,kringle结构域中有1个K5和若干个K4。Apo(a)中的K4有10种不同亚型(T1～T10),除T2的拷贝数从3～43个不等,其他9型均含有1个拷贝，所以K4-2型的重复数决定了Apo(a)分子的大小，它是导致Lp(a)相对分子质量个体间差异较大[(180～800)×103不等]的主要原因。此外不同个体间乃至同一个体不同Lp(a)-P中所含胆固醇量的差异也是导致Lp(a)分子量个体间差异的原因之一[4-5]。

23种Lp(a)相关生物标志物

不同研究者发现，对AS预测价值较高的Lp(a)相关生物标志物有Lp(a)-M、Lp(a)-C和Lp(a)-P 3种。其中Lp(a)-M是用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定载脂蛋白(a)质量[Apo(a)-mass]表示的，测定结果用mg/L表示；Lp(a)-C是通过电泳法测定Lp(a)-P所携带的胆固醇，测定结果用mmol/L表示，也有文献将测定结果用mg/L表示[6]； Lp(a)-P是近年提出的较新的生物标志物，Lp(a)-P是通过免疫固定电泳法(IFE)或核磁共振波谱(NMRs)直接测定其在血浆中的浓度，测定结果用nmol/L表示[4-6]。

3Lp(a)颗粒测定研究进展

3.1Lp(a)颗粒测定背景Lp(a)-M测定是最早使用的Lp(a)动脉粥样硬化生物标志物，但早期免疫分析所用的抗体主要是针对Apo(a)K4-2型抗原表位，但该区域分子大小不一且抗体亲和力强弱不一导致Lp(a)-M测定准确性受到质疑。美国西雅图的华盛顿大学西北脂类研究实验室提出针对Apo(a)K4-9型抗原表位的ELISA，虽然不受Apo(a)分子大小异质性的影响，但只适用 ELISA,不适用于全自动生化分析仪的免疫比浊法[7]。由于免疫学方法测定Lp(a)-M存在的困难，故研究者提出用测定Lp(a)-C代替Lp(a)-M[3,8]，然而随着肥胖及代谢综合征发病率的上升，使得Lp(a)-C这一标志物相对其他标志物而言预测价值降低[9]。

鉴于Lp(a)-M或Lp(a)-C测定存在缺陷，以及大量荟萃分析发现低密度脂蛋白颗粒(LDL-P)较低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)是更好地预测AS发生的生物标志物[10-14]。研究者推断Lp(a)-P在预测 AS发生的风险上优于 Lp(a)-M或Lp(a)-C[2-6,8]。此后，研究发现，Lp(a)-P测定不受其分子大小及其他脂蛋白的影响，可以代表Lp(a)浓度的唯一特征，成为研究热点[2,15-18]。

3.2Lp(a)颗粒测定方法关于脂蛋白颗粒的测定，研究较多的是高密度脂蛋白颗粒和LDL-P，测定方法及应用日渐成熟。目前测定方法常用的有3种：超速离心法、IFE、NMRs[10]。文献中报道较多的是后两种[4,11]，现分别介绍如下。

3.2.1IFEIFE是一种用于分析样品中特异性抗原的技术，首先将蛋白质混合物在固相载体上进行区带电泳，再与特异性抗体反应，从而检出与抗体结合的相应抗原。Philip等[4]通过实验研究，建立了一种适用于临床常规检测Lp(a)-P的[Lp(a)]，此方法准确度高(CV<10%)、线性范围为50～800 nmol/L、精密度较好且不受Apo(a)分子大小的影响。该法首先将血清中的脂蛋白经琼脂糖凝胶电泳分离成不同区带,其次在含Apo(a)的脂蛋白区带中Apo(a)可与抗Apo(a)抗体结合，用酸性紫染色可见到脂蛋白固定条带，清洗后使用比浊法测定Apo(a)的总量[包括Lp(a)、VLDL、IDL和LDL中的Apo(a)]，根据公式[4]可通过Lp(a)中Apo(a)浓度计算出Lp(a)-P的浓度。计算公式如下：Lp(a)-P(nmol/L)=Apo(a)总量×Lp(a)条带占总面积百分比×18.52，其中18.52=Lp(a)中Apo(a)浓度×10/(apo-B相对分子质量×106)。

3.2.2NMRsNMRs是基于电磁波照射待测物质，使原子核发生能级跃迁，产生一定核磁共振信号，进而得到NMRs。NMRs之所以可应用于Lp(a)-P测定，主要是利用了不同大小的Lp(a)-P甲基基团天然质子NMR特征。Lp(a)的磁学特性使不同大小颗粒中的脂质发出不同的频率和形状信号[11]。对照已知的每一类颗粒的甲基信号频率和特征，记录血浆中待测脂蛋白颗粒所产生的信号，可以通过数学计算的方法计算出不同脂蛋白的数目和脂蛋白颗粒的大小。NMRs测定脂蛋白的最大优势是该法测定整个颗粒而不仅是某一化学成分的浓度。由于每个Lp(a)-P中的Lp(a)-C不是恒量，个体间差异较大，因此Lp(a)-C不能反映相应冠心病危险等级[12]。而NMRs不受个体间差异的影响，即一定浓度的脂蛋白亚类总是产生同等大小的甲基化信号。但大小接近的脂蛋白颗粒，其甲基信号频率和特征的变化在波谱上不易显现出来，因此这些脂蛋白颗粒仍是代表一组脂蛋白，这点值得注意。

3.3Lp(a)-P与Lp(a)-M、Lp(a)-C相比的优势多项研究表明，LDL-P浓度在预测AS危险性方面比LDL-C更敏感，因此理论上推测Lp(a)-P预测AS的灵敏度比Lp(a)-C更高[10-14]。目前这一推测已经得到证实[2,16-18]。早期Sniderman等[19]通过Meta分析显示,当Lp(a)-M处于临界值时，不同Lp(a)-P浓度的患者发生心脑血管事件的风险不同；2012年Matthew等通过对144例AS一级、二级预防者研究发现，Lp(a)-P与Lp(a)-C的不一致性高达23%，近年来该结论也被其他研究者证实[13-15]；2014年Hopwell等[15]通过对995例冠心病患者研究发现， Lp(a)-P比Lp(a)-M和Lp(a)-C测定更能预测冠心病的风险；研究还发现小分子Apo(a)患者具有更高的Lp(a)-P浓度，更易导致AS。

4结语与展望

Lp(a)作为AS的独立危险因素已得到公认，但目前关于Lp(a)仍有许多未解决的问题，例如，其代谢机制尚不清楚，其测定单位和度量标准在不同的实验室之间不一致等。一些研究者常混淆Lp(a)的3种生物标志物，因此有必要使更多临床医生了解Lp(a)测定的意义[5,16]。未来需要确定一种能够真实反映Lp(a)水平且易于检测的生物标志物，目前最新研究认为LP(a)-P就是这样一种生物标志物。学者们一致认为，现在及未来就是要通过国际间的合作在不同人群中研究 LP(a)-P引起的 AS风险，从而为Lp(a)-P是目前发现的最好的AS风险标志物这一观点提供支持。

今后Lp(a)-P研究方向可能出自以下几方面：(1)选择Lp(a)-P正常，但Lp(a)-M和Lp(a)-C升高或降低的，或Lp(a)-P升高或降低而Lp(a)-M和Lp(a)-C在正常参考范围内的标本来比较3种生物标记，证实三者在预测AS发生的优缺点；(2)应用高场多维NMRs优化LP(a)-P测定方法，使其更加适合常规临床检测；(3)对于高Lp(a)-P的动物模型，寻找新型的治疗手段降低血浆Lp(a)-P；(3)在临床上验证Lp(a)-P预测AS发病率的临床价值及治疗手段，确定AS的医学决定水平，以便制订干预人群和治疗目标，在一级、二级预防中都有重要意义。

综上所述，Lp(a)-P对AS的发生具有良好的预测价值，相信今后在基础和临床的不同层面上会有更广泛的研究和应用。

参考文献

[1]Malaguarnera M,Vacante M,Russo C,et al.Lipoprotein(a) in cardiovascular diseases[J].Biomed Res Int,2012,2013(1):650989.

[2]Kiechl S,Willeit J.The mysteries of lipoprotein(a) and cardiovascular disease revisited[J].J Am Coll Cardiol,2010,55(19):2168-2170.

[3]Brown WV,Ballantyne CM,Jones PH,et al.Management of Lp(a)[J].J Clin Lipidol,2010,4(4):240-247.

[4]Philip A,Erin G,William S,et al.Validation of a lipoprotein (a) particle concentration assay by quantitative lipoprotein immunofixation electrophoresis[J].Clinica Chimica Acta,2015,15(439):219-224.

[5]Joseph P,Philip A,Guadagno MS,et al.Lipoprotein(a)mass:A massively misunderstood metric[J].J Clin Lipidol,2014,13(8):550-553.

[6]Konerman M,Kulkarni K,Toth PP,et al.Lipoprotein(a) particle concentration and lipoprotein(a) cholesterol assays yield discordant classification of patients into four physiologically discrete groups[J].J Clin Lipidol,2012,6(4):368-373.

[7]Lamon-Fava S,Marcovina SM,Albers JJ,et al.Lipoprotein(a) levels,apo(a) isoform size,and coronary heart disease risk in the Framingham Offspring Study[J].J Lipid Res,2011,52(6):1181-1187.

[8]Mcconnell JP,Guadagno PA,Dayspring TD,et al.Lipoprotein(a) mass:a massively misunderstood metric[J].J Clin Lipidol,2014,8(6):550-553.

[9]Davidson MH,Ballantyne CM,Jacobson TA,et al.Clinical utility of inflammatory markers and advanced lipoprotein testing:advice from an expert panel of lipid specialists[J].J Clin Lipidol,2011,5(5):338-367.

[10]Paul N,James V.A comparative study of four independent methods to measure LDL particle concentration[J].Atherosclerosis,2015(243):99-106.

[11]Otvos JD,Mora S,Shalaurova I,et al.Clinical implications of discordance between low-density lipoprotein cholesterol and particle number[J].J Clin Lipidol,2011,5(2):105-113.

[12]Stephen A,Thomas D.Low-density lipoprotein particle number is associated with insulin resistance in clinical practice[J].J Clin Lipidol,2015(9):247-255.

[13]Mora S,Buring JE,Ridker PM.Discordance of low-density lipoprotein (LDL) cholesterol with alternative LDL-related measures and future coronary events[J].Circulation,2014,129(5):553-561.

[14]Master SR,Rader DJ.Beyond LDL cholesterol in assessing cardiovascular risk:apo B or LDL-P[J].Clin Chem,2013,59(5):723-725.

[15]Hopewell JC,Seedorf U,Farrall M,et al.Impact of lipoprotein(a) levels and apolipoprotein(a) isoform size on risk of coronary heart disease[J].J Intern Med,2014,276(3):260-268.

[16]Jacobson TL,Cardiovascular D.And contemporary management[J].Mayo Clinic Proceedings,2013,88(11):1294-1311.

[17]Nordestgaard BG,Chapman MJ,Ray K,et al.Lipoprotein(a) as a cardiovascular risk factor:current status[J].Eur Heart J,2010,31(23):2844-2853.

[18]Erqou S,Thompson A,Di Angelantonio E,et al.Apolipoprotein(a) isoforms and the risk of vascular disease:systematic review of 40 studies involving 58,000 participants[J].J Am Coll Cardiol,2010,55(19):2160-2167.

[19]Sniderman AD,Williams K,Contois JH,et al.A meta-analysis of low-density lipoprotein cholesterol,non-high-density lipoprotein cholesterol,and apolipoprotein B as markers of cardiovascular risk[J].Circ Cardiovasc Qual Outcomes,2011,4(3):337-345.

*基金项目：国家“十五”重大科技专项(2002BA711A08-17)；教育部科技基础平台建设(505015)；甘肃省自然科学研究基金(1308RJZA218，1302FKDA034)。

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.13.029

文献标识码：A

文章编号：1673-4130(2016)13-1822-03

(收稿日期：2016-03-05修回日期：2016-05-15)

△通讯作者，E-mail：jinchunhe@163.com。