王　 旭1 马可佳1 江云飞1 赵　贞2



流行性感冒病毒的微生物检验

王 旭1 马可佳1 江云飞1 赵贞2

【摘要】目的 探讨我院流行性感冒病毒的微生物检验现状，为流感的防治提供基础及为临床诊断提供依据。方法 选取2014年10月～2015 年4月在我院就医的有流感样症状的患者40例，对其取鼻、咽拭子或含漱液样本进行微生物检验。结果 通过检验患者的鼻、咽拭子及含漱液标本，检测出患者中存在流行性感冒病毒28例，检测样本阳性率70％。结论 流行性感冒病毒是流行性感冒的病原体，可引起人、禽、猪、马等的感染及发病，流感病毒感染者通常有急起高热、全身疼痛、乏力等临床症状。

【关键词】流行性感冒病毒；流感；微生物检验

流行性感冒病毒俗称流感病毒，可以分为甲（A）、乙（B）、丙（C）三型，是一种传播速度快、传染性强的疾病，主要通过飞沫或与被污染物接触等渠道进行传播，一般多发于秋冬季节［1］。甲（A）型流感病毒的抗原性容易发生变异，曾引起多次世界性的大流行；乙（B）型流感病毒的致病性相对较低，一般情况下引起小范围的流行；丙型流感病毒的抗原性相对稳定，极少造成大面积流行，多发于婴幼儿及青年［2］。当患者感染流感病毒时，通常会有全身疼痛、急起高热、乏力等症状。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2014年10月～2015年4月在我院就医的有流感样症状的患者40例，其中男性22例，女性18例，年龄3月龄～70岁，取患者鼻、咽拭子或含漱液样本进行微生物检验。

1.2 检验方法

1.2.1 标本采集及处理 取患者鼻、咽拭子或含漱液标本（以发病后3 d内标本为最佳）；如要进行血清学诊断，在患者患病早期及恢复期采集两份血清［3］。标本在采集后应立即入冰壶送检，在48 h内如未能进行接种，低温保存标本。采集样本所用的棉拭子应浸入5 ml灭菌的生理盐水中，含漱液应存放在无菌烧杯中［4］。标本液在充分振荡后，在4℃保存5～10 min，待自然沉淀后，取其上清液3 ml，在上清液中加入青霉素、链霉素，在4℃保存2 h后进行接种。

1.2.2 分离培养 流行性感冒病毒分离培养方法有鸡胚培养、细胞培养及动物分离培养。鸡胚培养：将标本接种到日龄适当的鸡胚尿囊腔或羊膜腔，并在35℃孵育2～3 d，放弃24 h内非特异性死亡的鸡胚。收集孵育后的尿囊液或羊水，对其进行血凝试验，如血凝呈阳性，使用特异性抗体进行血凝抑制试验，以此来鉴定病毒型及亚型；如血凝呈阴性，需要在鸡胚中进行二次盲传。细胞培养：将标本接种到猴肾、原代人胚肾及传代狗肾细胞中，在35℃孵育10～14 d，实时观察是否有病变现象发生。如有病变现象，进行血凝试验或红细胞吸附试验进行核查；如未有病变现象，需要每隔2～3 d进行1次核查；如在第14 d后仍无病毒的生长，可以盲传一代［5］。动物分离培养：在动物分离培养中雪貂是最易感体，但因其成本较高，在临床中较少使用，一般情况下选择鸡胚培养和细胞培养两种方法。

1.2.3 鉴定 不同的流感病毒只能凝集其相应的红细胞，对于血凝呈阳性的分离株，其鉴定方法可以使用特异性的抗体进行血凝抑制试验，此法可以确定病毒型及亚型［6］。

2 结果

通过对患者的鼻、咽拭子及含漱液标本进行微生物检测，检验出患者中存在流行性感冒病毒28例，检测样本阳性率70％。

3 讨论

流感病毒的微生物检验具有很高的临床意义，流感患者是流行性感冒的主要传染源，同时隐性感染者及被感染的动物也是流感的主要传染源之一。流感靠带有流感病毒的飞沫进行传播，同时共用手帕、毛巾等间接接触也可感染病毒。机体在被感染后，病毒经过呼吸道进入患者体内［7］。流感病毒在传入人群之后，具有很强的传染性并迅速的蔓延扩张，其传播速度、广度与人口的密度有着直接关系。当病毒进入人体后，如果咳嗽反射未能将其及时的清除，或未被黏膜分泌物中非特异性抑制物灭活，或未能被人体的特异性IgA抗体中和，会感染少数呼吸道的上皮细胞，引发细胞产生变性、空泡，并快速的产生子代病毒体侵入至邻近的细胞。呼吸道黏膜的上皮细胞是流感病毒入侵的目标主要，偶尔会有侵袭感染者肠黏膜引发胃肠型流感的病例。流感病毒潜伏期的长短主要由侵入病毒量与机体免疫状态决定，一般情况下为1～4 d。流感患者多有发热、畏寒、头痛、乏力等症状。流感具有发病率高、病死率低的特点。在临床中的死亡案例通常不是由流感病毒直接导致，而是由并发的细菌性感染导致的，多发生在老人、婴幼儿和慢性病患者［8］。通常情况下，流行性感冒病毒的抵抗力相对较弱，耐热性十分的差，在等于或高于56℃环境中保持30 min即可达到病毒灭活的目的，并对日光、紫外线、干燥环境以及甲醛、乙醚、乳酸等化学药物有很大的敏感性。流感病毒在室温环境下传染性丧失较快，但在0～4℃的环境中，流感病毒可以存活数周，在- 70℃或以下的环境中能够冻干后能够长期的存活。

参考文献

［1］ 赵娣伟.流行性感冒病毒检测方法的研究进展［J］.职业与健康，2014，30（11）：1553-1555．

［2］ 邢晓会，王大燕，舒跃龙.流行性感冒病毒耐药性检测方法研究进展［J］.中华预防医学杂志，2013，47（5）： 463-465 ．

［3］ 陈烨.实时荧光PCR用于流感病毒检测的效果分析［J］.医药与保健，2014（3）：100．

［4］ 卞家蓉，聂蔚，修清玉.流感病毒实验室检测技术研究进展［J］．国际病毒学杂志，2012，19（5）： 228-232．

［5］ 袁颖，常鑫，隋振耿.浅谈病毒基因检验结果评价［J］.医学信息，2013，26（4）：500-501．

［6］ 刘凤.分子技术在流感病毒检测中的应用［J］.现代预防医学，2014，41（12）：2249-2251．

［7］ 姜法春，吕思禄，贾晓蓉，等.季节性灭活流行性感冒病毒裂解疫苗安全性和免疫原性及与甲型H_1N_1流行性感冒病毒的交叉免疫反应研究［J］.中国疫苗和免疫，2011（2）：143-146．

［8］ 刘述华.流行性感冒病毒的微生物检验［J］.医学信息（下旬刊），2013，26（8）：521．

Microbiological Examination of Influenza Viruses

WANG Xu1MA Kejia1JIANG Yunfei1ZHAO Zhen21 Clinical Laboratory，Prevention and Control Center of Heilongjiang Provincial Land Reclamation Bureau，Harbin Heilongjiang 150090，China，2 College of Municipal and Environmental Engineering，Harbin Institute of Technology，Harbin Heilongjiang 150090，China

【Abstract】Objective To investigate the current situation of the microbial test of influenza virus in our hospital，to provide the basis for the prevention and treatment of influenza and to provide evidence for clinical diagnosis.Methods Selected during October 2014 to April 2015，in our hospital for medical treatment in 40 cases of patients with influenza like symptoms，the from nose，pharynx swabs or gargle samples for microbiological examination．Results By examining a patient's nose，throat swab and rinse fluid samples were detected in patients with influenza virus in 28 cases，the samples were detected positive rate of 70％.Conclusion Influenza virus is the pathogen of influenza，caused by the human，poultry，pigs，horses and other infection and disease and influenza virus infection usually have abrupt high fever，body pain，significant fatigue and other clinical symptoms．

【Key words】Influenza virus，Influenza，Microbiological examination

【中图分类号】R446

【文献标识码】A

【文章编号】1674-9316（2016）07-0157-02

doi：10．3969/j．issn．1674-9316．2016．07．120

作者单位：1 黑龙江省农垦总局疾病预防控制中心检验科，黑龙江哈尔滨 150090 2 哈尔滨工业大学市政环境工程学院，黑龙江 哈尔滨 150090